紫花苜蓿炭疽病病原新记录种(Colletotrichum liriopes)的鉴定及生物学特性分析

【目的】从炭疽病症状的紫花苜蓿病株分离得到一种炭疽菌,与此前报道的三叶草炭疽菌(Colletotrichum trifolii)、北美炭疽菌(C.americae-borealis)形态上略有差异,研究该菌致病性、分类地位及其生物学特性并鉴定。【方法】采用组织分离法获得炭疽菌菌株,经柯赫氏法则证明其致病性,并运用形态学观察结合多基因片段PCR扩增法鉴定病原菌种类,测定不同培养基、碳源、氮源、温度、pH值、光照对该菌菌落生长的影响。【结果】从紫花苜蓿炭疽病病部分离获得一种新的致病炭疽菌,为麦冬炭疽菌(Colletotrichum liriopes)。该菌在5~35℃,pH值4~11的多数供试培养基、氮源、碳源条件下均能生长。【结论】麦冬炭疽菌(C.liriopes)可侵染紫花苜蓿引起炭疽病,其菌落最适生长温度为28℃,最佳氮源、碳源分别是酵母和可溶性淀粉,最适pH为7,菌丝致死温度61℃,12 h光暗交替对菌落生长有利。

苜蓿矮化病毒实时荧光定量PCR检测体系的建立

为灵敏、快速检测紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中的苜蓿矮化病毒(ADV),根据该病毒L蛋白保守序列设计特异性引物,建立基于SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量PCR检测体系,并应用该方法对田间样品和种子进行快速检测。结果表明,建立的RT-qPCR检测技术可对苜蓿中的苜蓿矮化病毒含量进行精确检测,最低检测浓度为9.8×10^(2)copies/μL,灵敏度约是常规PCR的100倍。通过对101份苜蓿样品的检测验证,该方法阳性检出率为61%,较常规PCR高6%。挑选的10份苜蓿种子中有3份被检测出携带苜蓿矮化病毒,病毒含量范围为0~3.02×10^(6)copies/μL。表明建立的RT-qPCR检测体系特异性强、灵敏度高,可应用于苜蓿矮化病毒的定量检测。