肿瘤干细胞表面标志物CD133在肝细胞肝癌组织中的表达及其与肝移植患者预后的关系

目的探讨肿瘤干细胞表面标志物分化群抗原（CD）133在肝细胞肝癌（肝癌）组织中的表达及其与肝移植患者预后的关系。方法本回顾性研究的109例肝癌组织标本来源于2004年1月至2007年12月在中山大学附属第三医院肝移植中心施行同种异体原位肝移植，组织病理学检查证实为肝癌的手术切除标本，另取41例肝穿刺正常肝组织作为正常对照。收集109例肝癌患者的临床病理学资料，并对其进行术后随访，收集患者存活时间，肿瘤复发、转移及死亡情况的随访资料。所有患者均签署知情同意书，符合医学伦理学规定。应用免疫组织化学方法检测109例肝癌组织和41例正常肝组织中CD133的表达水平，分析CD133阳性表达与患者年龄、性别、甲胎蛋白（AFP）、外周血中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）、肿瘤直径、肿瘤数量、分化程度、血管侵犯等肝癌临床病理学参数的关系。应用Kaplan—Meier法计算患者移植后存活率，应用Log—rank检验比较各参数对存活率的影响。结果全组肝癌患者均接受随访，随访时间6～77个月。随访期间肿瘤复发37例，复发部位分别为肝内24例、肺部6例、腹腔3例、全身多发性转移或骨转移4例。随访期间死亡40例，分别死于肿瘤复发35例、胆道并发症3例、肺部感染和急性粒细胞白血病各1例。肝癌组织中CD133阳性表达44例，阳性率为40．4％，正常肝组织无CD133表达，比较差异有学意义（P〈0．01）。CD133阳性表达与肿瘤直径、肿瘤分化程度有关（均为P〈0．05）。CD133阳性组患者肝移植的1、3、5年存活率明显低于CD133阴性组患者（χ2=8．008，P〈0．05）。结论肝癌组织存在CD133表达，CD133阳性表达的肝癌肝移植患者预后较差。

肝癌白细胞抗原-G的表达及其在肝癌肝移植预后中的价值

目的探讨人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)在肝细胞肝癌组织中的表达及其在肝癌肝移植患者预后中的价值。方法回顾性分析2004年1月至2008年5月期间中山大学附属第三医院肝移植中心收治的83例肝癌肝移植患者的临床资料。应用免疫组化方法检测肝细胞肝癌组织及其癌旁组织中HLA-G的表达情况,应用Kaplan-Meier法计算累积生存率和无瘤生存率,采用log-rank检验和Cox回归模型分别进行无瘤生存率单因素和多因素分析。结果 83例肝癌肝移植患者中,35例(42.2%)肿瘤复发。全部病例1、3和5年累积生存率分别为97.2%、89.8%和43.1%,1、3和5年无瘤生存率分别为93.6%、68.9%和38.7%。肝癌组织中HLA-G表达阳性率(68.7%)明显高于癌旁组织(15.7%,P<0.01)。HLA-G的表达与肿瘤直径、病理分级和血管侵犯有关(P<0.05)。单因素分析显示,影响肝癌肝移植术后无瘤生存率的危险因素有HLA-G表达(P<0.01)、肿瘤直径(P<0.05)、肿瘤侵犯血管(P<0.01)及病理分化程度(P<0.01)。HLA-G表达阳性组移植后的无瘤生存率低于HLA-G表达阴性组(P<0.01)。Cox风险回归模型结果表明,HLA-G表达(P<0.05)、肿瘤侵犯血管(P<0.01)及病理分化程度(P<0.05)是影响肝癌肝移植患者术后无瘤生存率的独立危险因素。结论肝癌组织存在HLA-G表达。HLA-G表达、肿瘤侵犯血管及病理分化程度是影响肝癌肝移植患者术后无瘤生存率的独立危险因素。对HLA-G表达阳性患者采取干预治疗及严格筛选肝癌肝移植的适应证可有效降低术后肿瘤的复发率。

人类白细胞抗原-GRNA干扰载体的构建及效应检测

目的构建表达人类白细胞抗原-G(HLA-G)基因shRNA载体,探讨其对NK细胞杀伤效应的影响。方法构建4个HLA-G-shRNA真核表达质粒,瞬时转染至人肝癌Bel-7402细胞,检测HLA-G mRNA和蛋白水平的表达。将NK-92MI细胞(效应细胞)与转染后的Bel-7402细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符。RT-PCR和Western blot结果均表明重组载体抑制了Bel-7402细胞HLA-G基因的表达。NK-92MI细胞对转染HLA-GshRNA的Bel-7402细胞杀伤作用明显增强(P<0.01)。封闭NK-92MI细胞KIR2DL4受体后,杀伤作用减弱(P<0.01)。结论成功构建了HLA-G shRNA载体,下调HLA-G可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应,HLA-G与NK细胞表面KIR2DL4受体结合后,向NK细胞传递抑制效应。