精子功能检测对选择IVF或ICSI治疗不育症的临床意义

本文评价了精子功能检测对选择体外受精(IVF)或卵胞浆精子注射(ICSI)治疗不育症的临床意义。精子功能缺陷所导致的精子与透明带结合反应(即透明带结合、透明带诱发顶体反应和透明带穿透)异常是IVF受精失败的主要原因。在常规精液分析中,精子形态学测定对预测精子受精能力最有价值,但精子形态学评估则是最难做准确和稳定。IVF受精失败的卵子是很有用的生物材料,可用来测定精子形态和顶体功能。人卵透明带有选择性地与正常形态和完整顶体的精子相结合。透明带诱发顶体反应与精子穿透明带的能力呈显著正相关。在不明原因不育症患者中,约25%的不育原因可能是透明带诱发顶体反应缺陷或低下所引起。在严重畸形精子症(正常形态率≤5%)、少精子症的不育病人中,精子与透明带结合异常比率很高。因此,临床上应把这些有精子缺陷,尤其是会影响精子与透明带结合的患者检测出来,采用ICSI治疗,避免这些病人用IVF治疗而导致很低的受精率。精子形态学分析和精子与透明带结合试验有助于临床选择IVF或ICSI治疗不育患者。

细胞凋亡和继发性坏死的Annexin法定量检测

目的 探讨分析凋亡与坏死淋巴瘤 (Raji)细胞的定量方法。方法 以 1.0 μm ol/ L 地塞米松(DEX)诱导 Raji细胞凋亡 ,用异硫氰酸荧光素标记的连接素 V(Annexin V)和碘化丙锭 (PI)分别与凋亡细胞膜上的磷脂酰丝氨酸和继发性坏死细胞内降解的 DNA结合 ,并以流式细胞术分析和分选标记细胞 ,用电镜和 DNA凝胶电泳对分选细胞及其 DNA进行鉴定。结果 Annexin+细胞数随 DEX孵育时间的延长而增加 (r=0 .97) ;Annexin+/ PI- 与 Annexin+/ PI+细胞经电镜和 DNA梯形带确证具有凋亡与坏死细胞的特征 ;Annexin法可准确测定 10 5～ 10 6细胞中的标记细胞。结论 Annexin法可快速。

脑源性神经生长因子促进脑梗死后小鼠内源性神经干细胞的增殖及向神经元分化

目的:探讨脑源性神经生长因子是否能促进脑梗死后小鼠内源性神经干细胞的活跃,能否刺激其分化成神经元。方法:实验于2004-07/2005-02在墨尔本大学完成。选取10周龄纯种C57BL/6J小鼠24只,分为盐水对照组、脑源性神经生长因子治疗组,每组雌雄各6只。①两组均采用结扎左侧大脑中动脉远心端法建立脑梗死模型,同时采用Matsushita描述的方法监测大脑中动脉供血区的血流量,血流量降低至少75%为有效。②脑源性神经生长因子治疗组于梗死后24h给予脑起源神经营养因子治疗,用药方式采用ALZET锇药物泵缓慢释放。将500μg/kg脑起源神经营养因子溶解于生理盐水中,加入到ALZET泵中,可在28d内持续缓慢释放药物。盐水对照组于梗死后24h给予等量生理盐水。③造模前后对两组小鼠运动功能进行Rotarod测试,记录小鼠在Rotarod上的停留时间。采用双重免疫荧光组化及共焦计数系统检测方法,对两组小鼠内源性神经干细胞的数量、密度及其分化方向进行评估。结果:①运动功能测试结果:与梗死前比较,两组小鼠在梗死后第1周均表现出明显的运动功能下降。但梗死后第2,3,4周,脑起源神经营养因子治疗组小鼠在Rotarod上的停留时间延长,运动功能的恢复明显优于盐水对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。②组织切片双重免疫荧光染色结果:两组小鼠脑内均出现免疫荧光阳性表达的内源性神经干细胞,主要分布在病灶周围,在损伤侧的对侧也出现表达。脑起源神经营养因子治疗组的表达数量明显高于盐水对照组。③内源性神经干细胞的激活情况:梗死4周后,两组小鼠脑内都出现内源性神经干细胞的再表达,脑起源神经营养因子治疗组内源性神经干细胞数较盐水对照组明显增加,约4.2倍。同时脑起源神经营养因子治疗组分化为神经元的比例明显高于盐水对照组(36%,15%),分化为星形胶质细胞的比例低于盐水对照组(54%,77%),分化为少突胶质细胞的比例二者基本相似(10%,8%)。结论:脑起源神经营养因子可能是基于内源性神经干细胞治疗脑卒中的一种有效的方法.通过调控内源性神经干细胞的增殖分化来治疗神经系统疾病在未来将是一种新的干细胞治疗方法.

AMPK调节骨骼肌细胞GLUT4基因表达的机制研究

腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)能调节运动/肌肉收缩所引起的骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因的表达,但至今它的调节机制不清。研究显示在非运动刺激引起的细胞信号事件中由组蛋白去乙酰化酶(HDACs)以及组蛋白乙酰化酶(HATs)控制的组蛋白乙酰化状态是调节基因表达的重要机制,所以我们假设AMPK信号途径是通过征用HDACs中的HDAC5(在骨骼肌细胞内高表达)来实现对运动/肌肉收缩引起的GLUT4基因表达控制。细胞分为正常浓度葡萄糖对照组(NGLU组)、正常浓度AICAR组(NGLU+AICAR组)、高浓度对照组(HGLU组)、高浓度AICAR组(HGLU+AICAR组)。用5 mmol/L和20 mmol/L葡萄糖浓度培养骨骼肌细胞后,NGLU+AICAR组和HGLU+AICAR组与肌肉收缩模拟信号刺激5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)孵育。AICAR能激活NGLU组骨骼肌细胞AMPKα2、减少骨骼肌细胞核HDAC5蛋白、促使HDAC5与骨骼肌细胞加强因子(MEF2)蛋白分离和上调GLUT4基因的表达;相反,高浓度葡萄糖延迟由AICAR引起的AMPKα2磷酸化、AMPKα2向细胞核转入、HDAC5向细胞核转出和GLUT4基因的表达。实验结果说明在不同葡萄糖浓度下的骨骼肌细胞GLUT4基因表达变化都对应着上游AMPK蛋白和下游HDAC5蛋白的变化,AMPK可能是征用转录抑制子HDAC5来调节MEF2的活性而达到控制肌肉收缩所引起的GLUT4基因表达。

精子功能检测与男性不育诊治的新进展

传统的精液常规分析是用于判断男性生育力的最基本临床指标，但是，只依靠精液分析的结果来预测男性生育状况仍是很不准确的。精子功能正常与否，对临床选择IVF还是ICSI治疗不育症极为重要。因为IVF需要功能完全正常的精子才能受精，而ICSI的受精只需要精子的正常核DNA，不需要其它的精子功能。在发明ICSI以前，患者IVF受精失败或低下（〈30％）发生率很高（20％～35％）。研究证明，这些IVF受精失败的患者主要与精子功能障碍有关。常见的是少精子症，弱精子症和畸形精子症。但是有很多患者，精液分析结果仍正常。为了提高临床对精子功能测定的准确性，文献里有很多新的精子功能试验的研究报导，比如丫啶橙（AO）测定精子DNA、精子与透明带结合和穿透、顶体诱发精子顶体反应和精子与透明质酸结合试验。精子形态测定是常规精液分析中最重要的临床指标之一。但精子形态又是最难测定准确和稳定。IVF／ICSI受精失败的人卵可以用来测定精子功能。人卵透明带选择性地与正常形态和顶体完整的精子结合，透明带诱发的顶体反应与精子穿透明带的能力有很强的相关性。在不明原因的男性不育患者中，由于透明带诱发顶体反应障碍所导致的不育症占25％左右。少精子症（精子计数〈2×10^6／ml）和严重精子形态畸形症（严格正常形态〈5％）的男性不育患者，精子-透明带结合反应缺陷的发生率很高（〉70％）。这类患者用IVF治疗受精率会很低，因此只能用ICSI治疗。精子与透明质酸结合试验与精子活力和形态有很强的相关性，但它不是很有用的精子功能试验。AO测定精子DNA对预测ART的受精和妊娠率的临床意义目前还没有肯定的结论，需要进一步研究。总之，在常规精液分析时，增加一些新的精子功能试验，在临床ART中对男性不育患者的诊治会有很大的帮助。

影响P2Z受体介导慢性淋巴细胞白血病细胞凋亡的各种因素及其机理研究

目的 探讨嘌呤能 P2 Z受体介导慢性淋巴细胞白血病 (CL L )细胞凋亡的影响因素及其机理。方法 在二价阳离子—— 1.0 mm ol/L Mg2 + 、Zn2 + 、Ca2 + 、Sr2 + 、Co2 + 、Ba2 + ,不同浓度的 EDTA或 EGTA,不同温度及在含 15 0 mm ol/L胆碱的介质中 ,将表达 P2 Z受体 [P2 Z(+) ]的 CL L细胞分别同 1.0 mm ol/L三磷酸腺苷 (ATP)或 0 .1m mol/L苯甲酰苯甲酸 ATP(Bz ATP)体外培养 8小时 ,以 DNA凝胶电泳、Td T法和流式细胞分析 (FCA )检测上述条件下细胞凋亡的诱导或抑制效应。结果 Mg2 + 或 Ca2 + 能以剂量依赖性方式促进 ATP诱导 P2 Z(+)细胞凋亡 ,而 EDTA或 EGTA却以相反的方式抑制 P2 Z(+)细胞凋亡的发生 ;1.0 mm ol/L Zn2 + 可完全阻止 ATP诱导 P2 Z(+)细胞凋亡所产生的 DNA片段 ,但其它二价阳离子包括 1.0 mm ol/L Sr2 + 、Co2 + 、Ba2 + 却不影响 ATP的诱导 ;胆碱作为磷脂酶 D(PL D)的抑制剂 ,也可部分抑制 P2 Z(+)细胞凋亡产生的 DNA片段 ;当温度低于 10℃ ,可完全阻止 ATP诱导 P2 Z(+)细胞凋亡产生 DNA片段的发生。结论 P2 Z受体介导 CL L细胞凋亡可能与核酸内切酶 ,PL D的参与密切相关。

雷米普利抑制自发性高血压大鼠细胞凋亡研究

为了研究血管紧张素转化酶抑制剂对自发性高血压大鼠细胞凋亡的作用，对雄性高血压大鼠（ＳＨＲ），分别从３周龄和５周龄起按每日１ｍｇ／ｋｇ剂量，给予雷米普利口服治疗，至１０周龄时停药，第１６周龄时处死，并以年龄、性别配对的ＳＨＲ以及ＷＫＹ大鼠作对照。测定各组血压、心脏与体重比，并以定量ＤＮＡ末端最大标记量（Ｌｍａｘ）的ＴｄＴ法、电镜、原位ＤＮＡ末端标记技术（ＴＵＮＥＬ）和放射自显影分析ＤＮＡ梯形带的方法检测心肌细胞凋亡。结果显示：早期雷米普利治疗不仅能显著降低ＳＨＲ血压、心脏与体重比，而且能抑制ＳＨＲ年龄依赖性的细胞凋亡；ＳＨＲ治疗组典型的ＤＮＡ梯形带消失，ＴＵＮＥＬ标记产物明显减少，其Ｌｍａｘ与ＷＫＹ对照组比较无明显差别（Ｐ＞０．１），但较未治疗ＳＨＲ组减少７０．７％。上述结果表明，雷米普利能抑制ＳＨＲ高血压的形成和心肌肥厚，并可阻止高血压形成过程中产生的细胞凋亡。

减少和抑制核HDAC5对骨骼肌细胞GLUT4基因表达的影响

验证收缩骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因的表达在转录水平上是否受转录抑制子Ⅱ型HDAC5蛋白(简写为HDAC5)的调节。研究运用运动模拟信号5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)和HDACs抑制剂SCRIPTAID孵育骨骼肌细胞。用蛋白印迹技术测定HDAC5蛋白表达,定量RT-PCR法检测GLUT4 mRNA表达。与无AICAR的对照组相比,AICAR组骨骼肌细胞内HDAC5减少了29%,并伴随有124% GLUT4 mRNA的增加,但肌细胞内HDAC5的蛋白总量无变化;使用HDACs抑制剂SCRIPTAID刺激骨骼肌细胞能够明显增加核心组蛋白乙酰化水平和上调GLUT4基因的表达。这些结果提示,通过AICAR和SCRIPTAID分别减少或抑制核HDAC5均能上调骨骼肌细胞GLUT4基因的转录,HDAC5可能在转录水平上对肌肉收缩引起的GLUT4基因的表达起着重要的调节作用。

IVF过程受精失败的预测

在发明和常规应用卵胞浆内单精子注射（ICSI）之前，十多年的临床体外受精（IVF）治疗实践中，受精率低下很常见，大约有20％～35％的IVF患者受精率很低（〈35％的卵子受精）和受精完全失败（所有卵子都不受精）。虽然受精失败与精子或卵子的质量有关，但相当一部分患者受精失败与精液质量或精子功能低下有很密切相关性。最常见的是严重的少精，弱精和畸形精子症患者。

非小细胞肺癌伴神经内分泌分化的研究

目的：研究非小细胞肺癌的类型、分化程度与神经内分泌分化间的关系。方法：随机收集４３例手术切除石蜡包埋的非小细胞肺癌的标本，采用７种神经内分泌抗体，用免疫组化ＬＳＡＢ法研究其神经内分泌分化。结果：阳性率为５３．４％，其中鳞癌和腺癌的阳性率分别为：５２．９％和５８．３％；而２例大细胞癌皆阴性。结论：非小细胞肺癌的组织类型与神经内分泌表达的种类有一定关系；而组织学类型和癌细胞分化程度与神经内分泌分化的阳性率没有显著相关性。

突触蛋白在肌萎缩侧索硬化转基因小鼠运动神经元上的表达

目的:评估肌萎缩侧索硬化转基因小鼠脊髓前角和大脑运动皮质运动神经元上的突触蛋白在不同疾病阶段的数量变化。方法:实验于2003-11/2004-06在墨尔本大学HFI研究所脑损伤与修复组完成。表达突变人类超氧化物歧化酶1基因的转基因小鼠36只(肌萎缩侧索硬化组),以及表达B6SJL基因的正常小鼠36只(对照组),两组分别按性别及出生后60,90及120d随机分为每个时间点12只,雌雄各半。①采用荧光金标记法标记腰段脊髓及皮层的运动神经元。②采用免疫荧光方法标记突触蛋白,阳性对照为加入突触蛋白抗体并有阳性表达;阴性对照省略此抗体。③采用共焦计数系统计数并行统计学分析。结果:①荧光金标记的运动神经元:经荧光显微镜检查确定腰段脊髓及皮层的运动神经元均被荧光金清楚地标记。②运动神经元的突触蛋白计数:在疾病中期出生后90d及后期出生后120d,运动神经元上的突触蛋白的数量呈显著性降低(腰段脊髓细胞体:(0.75±0.06),(0.59±0.09)/μm;腰段脊髓树突:(0.71±0.06)(0.55±0.03)/μm;大脑皮层运动神经元细胞体:(0.79±0.03),(0.63±0.08)/μm;大脑皮层运动神经元树突:(0.76±0.07),(0.61±0.08)/μm,P<0.01);同组别雌雄对照差异无显著性。结论:肌萎缩侧索硬化运动神经元突触蛋白数量的降低与疾病及病程的进展有直接关系。

口腔材料测试的可靠性和有效性

在过去的一年中,人们已更加关注牙科杂志中产品广告的内容。David Bales以编辑的身份在1989年第一期《牙体修复学》杂志上强调了登载于国际知名杂志上的某些牙科产品广告的误导性。他建议美国牙医协会应该建立一个广告委员会,只认可和批准那些“真实的和不产生误导”的广告。然而,对登广告者和研究者而言。

日益增多的兽医研究生教育途径—在线家禽病理学课程的设计和传送

围绕家禽生产和管理的科学体系和技术知识是动态的和持续展开的.全球市场对家禽产品要求的增长、信息技术的改善和研究技术的进步都是造成指数增长的原因.……

5A模型和动机性访谈在全科医生戒烟干预里的应用

吸烟是一种有害健康的行为，是导致冠心病、中风、慢性支气管炎、哮喘等多种疾病发生的危险因素之一。同时，世界卫生组织估计全世界每年有540万人死于与吸烟相关的疾病。目前，中国约有3.5亿吸烟者，居世界各国之首，其中男性吸烟者占大多数[1]。而澳大利亚是世界上吸烟率最低的国家之一。据2010年的调查显示，在澳大利亚14岁以上人群中吸烟率为15.1%[2]。澳洲吸烟率显著的下降，得益于全社会近几十年来（尤其1980年至今）在控烟禁烟方面的努力，包括了全社会从各个层面、各个角度对烟草危害的宣传与教育，以及使用各种手段鼓励戒烟行为[3]。全科医生的干预更在改变吸烟者行为、帮助吸烟者戒烟中起到了不可或缺的作用[4]。澳洲的全科医生在戒烟干预中广泛应用的5A模型和动机性访谈，在澳洲全科医学学会制定的戒烟指南中被推荐[5]。现将5A模型和动机性访谈报道如下。

印度成人对于儿童眼保健的认识及贫困因素对其的影响（英文）

目的：探讨印度金奈地区成人对于儿童视力筛查的认识以及贫困因素对其的影响。方法：此研究采用为期4wk的现况研究方法,于2012-12在印度金奈市及周边社会经济发展水平较低的地区,随机选取参加拓展营的个体作为研究对象。在接受了免费的视力筛查之后,与他们进行了一个简短的半结构性面谈。每隔两位选取一位受访者在一开始就被问及是否有儿童居住在他们住宅区,回答肯定者则纳入此项研究。结果：本研究共纳入120人,其中38%（95%CI：30~47）的人指出在他们住宅区内至少有一名儿童先前接受过眼部检查（组1）,62%（95%CI：53~70）的参与者表示无儿童曾经接受过眼科检查（组2）。采用简单贫困记分卡方法测量两组贫困比分并无统计学差异。结论：据不到半数的参与者回忆,他们的孩子之前曾接受过眼部检查。在贫困比分上,确认之前曾接受过眼部检查的参与者与没有接受过眼科检查的参与者之间无统计学差异。与孩子从未接受过眼科检查的参与者相比,那些孩子接受过眼部检查的参与者对该检查抱有更积极的态度。研究表明,成人对于孩子接受眼部检查重要性的认识不受贫困程度的影响,提高成人对于儿童接受眼部检查的认识可能需要更多的干预措施而不是扶贫。

教育程度增加变应性鼻炎和(或)湿疹的患病风险:一项基于欧洲患者全基因组关联研究的孟德尔随机化研究

目的采用孟德尔随机化(MR)方法探索教育程度与变应性鼻炎和(或)湿疹患病风险之间的因果关系。方法对基于大样本全基因组关联研究(GWAS)的汇总数据进行二次数据分析,包括来自社会科学基因组学会联盟的293723例参与者(教育程度)和来自英国生物样本库的462013例参与者[变应性鼻炎和(或)湿疹]。选择与教育程度密切相关的遗传位点作为工具变量,分别采用逆方差加权(IVW)、MR-Egger回归、加权中位数法和加权众数法进行两样本MR分析,以优势比(OR)评价教育程度与变应性鼻炎和(或)湿疹的患病风险之间的因果关联。结果共纳入70个单核苷酸多态性(SNPs)作为工具变量。MR-Egger回归结果显示,基因多效性不会对结果造成偏倚(P=0.107)。在单变量MR分析中,IVW结果显示,教育年限每增加1年或1个标准差(3.71年),患变应性鼻炎和(或)湿疹的风险分别为OR=1.044(95%CI:1.020~1.069,P<0.001)和OR=1.170(95%CI:1.074~1.256,P<0.001)。在反向MR分析中,IVW未观察到变应性鼻炎和(或)湿疹对教育年限的影响(OR=1.020,95%CI:0.927~1.023,P=0.683)。加权中位数法和加权众数法的结果与IVW的结果基本一致。结论教育程度与变应性鼻炎和(或)湿疹患病风险之间存在正向因果关系,即教育程度升高会增加变应性鼻炎和(或)湿疹的患病风险。

P2z受体在介导慢性淋巴细胞白血病细胞凋亡中的作用

目的：研究嘌呤能Ｐ２ｚ受体在介导慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）细胞凋亡中的作用。方法：将表达Ｐ２ｚ受体［Ｐ２ｚ（＋）］与不含Ｐ２ｚ受体［Ｐ２ｚ（－）］的两组ＣＬＬ细胞分别同１．０ｍｍｏｌ／Ｌ三磷酸腺苷（ＡＴＰ）体外培养８小时，以电镜、ＤＮＡ凝胶电泳和定量ＤＮＡ３′端ＴｄＴ法检测细胞凋亡；并对ＡＴＰ、苯甲酰苯甲酸ＡＴＰ（ＢｚＡＴＰ）、２甲基硫ＡＴＰ（２ＭｅＳＡＴＰ）、γ硫代ＡＴＰ（ＡＴＰγＳ）及其它核苷的诱导效应和氧化型ＡＴＰ（ＯｘＡＴＰ）、１［Ｎ，Ｏ二（５异喹啉碘酰基）Ｎ甲基Ｌ酪氨酰］４苯哌嗪（ＫＮ６２）的抑制效应做定量研究。结果：①Ｐ２ｚ＋细胞能在ＡＴＰ诱导下呈现典型的细胞凋亡形态和ＤＮＡ梯形条带；②不同的Ｐ２ｚ受体激活剂可通过Ｐ２ｚ受体诱导细胞凋亡并产生不同量的ＤＮＡ降解片段，诱导能力的强弱顺序是ＢｚＡＴＰ＞ＡＴＰ＞２ＭｅＳＡＴＰ，而ＡＴＰγＳ或其它核苷几乎无诱导能力；③ＯｘＡＴＰ和ＫＮ６２可完全阻止诱导剂诱导的细胞凋亡。

RTS,S/AS01疟疾疫苗大规模现场应用可能面临的挑战

RTS,S/AS01疟疾疫苗获得WHO批准大规模应用是人类抗击寄生虫感染史上的一个里程碑,然而RTS,S/AS01疫苗并非完美。本文从免疫学角度探讨了RTS,S/AS01疟疾疫苗存在的不足以及下一代疟疾疫苗研发可能面临的挑战。