利用FPLC提纯抗苯丙氨酸羟化酶抗体的Fab及其轻链和重链的分离

IgGPH_7经木瓜蛋白酶消解产生Fab和Fc,在FPLC仪上,分别用MonoQ,Superose_(12),MonoS柱提纯Fab。提纯的Fab经还原和烷基化后,再用琥珀酸酐修饰,然后用Mono Q柱分离得到轻链和重链。最后通过SDS凝胶电泳和N端顺序测定,以鉴定它的纯度和轻、重链。

抗苯丙氨酸羟化酶单克隆抗体的提纯和轻、重链的N端顺序

利用DEAE-52离子交换层析和FPLC的Mono Q离子交换柱,从鼠的腹水液中提纯抗苯丙氨酸羟化酶单克隆抗体,再利用FPLC的Superose 12凝胶柱分离它们的轻链和重链。经SDS-凝胶电泳,氨基酸组成分析和N端顺序测定,确定轻链的分子量约为24 kD,约含有215个残基,轻链的N端的顺序是:D-V-V-M-T-Q-T-P-L-S-L-P-V-S-L-G-D-Q-A-S-I-S-C-R-S-D?-Q-N(D)-,并确认该轻链为鼠KaPPa轻链Ⅱ型。重链的分子量约为52 kD,它的末端被焦谷氨酰封闭。