HER-2/neu胞外区的基因工程表达及其免疫避孕作用

目的:研究HER-2/neu胞外区部分片段重组蛋白疫苗在免疫避孕中的作用。方法:构建原核表达重组体pET-hECDu,在大肠杆菌中表达人HER-2/neu胞外区部分片段,经Hi-Trap亲和层析柱纯化得到重组蛋白(hECDu),以ELISA法检测其结合活性后免疫雌性小鼠。用ELISA法检测抗HER-2/neu体液免疫应答,3H-TdR掺入法检测细胞免疫应答。结果:经原核表达系统成功纯化得到与理论分子量77 ku(1 u=1 Da)相符的hECDu,并证实其可与抗HER-2/neu胞外区特异性单克隆抗体结合。该重组蛋白疫苗可诱导雌鼠产生较高水平体液及细胞免疫应答。其生育力(平均产仔数4.0±1.8)与对照组(7.8±1.3)相比明显降低,但免疫鼠产后4 d子宫及卵巢均无明显病理改变。结论:经原核表达系统成功纯化得到HER-2/neu胞外区部分片段重组蛋白,该蛋白疫苗可在小鼠中诱导产生免疫避孕效应。

未成熟树突状细胞诱导异基因嵌合体的形成

目的：证实供体来源的未成熟树突状细胞（ｉｍＤＣｓ）主动免疫受体小鼠后可诱导形成异基因嵌合体。方法：应用供体（Ｃ５７ＢＬ／６）来源的骨髓细胞在体外培养出ｉｍＤＣｓ，灭活后静脉输注受体小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ），并于输注后不同时间输注供体来源的骨髓细胞，检测异基因嵌合体的形成。同时比较ｉｍＤＣｓ一次免疫与多次免疫对诱导嵌合体形成的影响。结果：在ｉｍＤＣｓ免疫后３ｄ输注骨髓细胞可诱导异基因嵌合体的形成，并持续１００ｄ以上；在免疫后５ｄ注射骨髓细胞只能形成短暂的（＜２１ｄ）、低水平（＜１％）的嵌合状态；７ｄ后则完全不能形成嵌合。应用一次和多次ｉｍＤＣｓ免疫均能诱导形成异基因嵌合体，且维持时间均大于１００ ｄ，但其嵌合程度有显著性统计学差异（Ｐ＜０．０５）。结论：应用供体来源的ｉｍＤＣｓ主动免疫受体可诱导形成异基因嵌合体。