HBV-preS2/S-C3d联合基因疫苗诱导的特异性免疫应答及其意义

目的:研究HBV-preS2/S-C3d联合基因疫苗诱导的特异性体液和细胞免疫应答及其意义。方法:CR2结合实验检测C3d融合蛋白的结合特性;分别用TR421、TR421-preS2/S和TR421-preS2/S-C3d3重组质粒免疫小鼠,ELISA法检测特异性抗HBs-IgG的亲合力,3H-TdR掺入法检测其特异性淋巴细胞增殖活性(SI),半定量RT-PCR法检测IL-4、IFN-γ、T-bet和GATA-3基因表达的水平。结果:C3d融合蛋白可有效地结合CR2;TR421-preS2/S-C3d3质粒基因免疫诱导的抗HBs-IgG水平、亲合力以及SI均明显高于TR421-preS2/S组,并且前者诱导的IL-4、IFN-γ、T-bet和GATA-3基因表达水平也均高于后者。结论:C3d通过结合CR2、上调IL-4和转录因子的表达、促进抗体亲合力成熟来增强基因免疫诱导的HBV特异性免疫应答。

C3d-P28对基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答的调节作用

目的 :观察补体C3d P2 8对基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答的调节作用 ,为增强基因免疫效果寻求新方法。方法 :将质粒pVAON33 S2 S质粒 (仅含HBV preS2 S编码基因 )和pVAON33 S2 S P2 8 4质粒 (含HBV preS2 S和 4拷贝C3d P2 8的编码基因 )以肌肉注射法对BALB C小鼠实施基因免疫 (10 0 μg 10 0 μl 只 ) ,并以空载质粒为对照。定期采集免疫小鼠血清、ELISA法检测其中特异性抗HBs IgG及其亚型的水平 ;免疫小鼠脾细胞经特异性抗原 (HBsAg)刺激后 ,采用3H TdR掺入法、半定量RT PCR法、同位素释放法分别检测其特异性淋巴细胞增殖活性、IL 4和IFN γ基因表达的水平、CTL杀伤活性。结果 :pVAON33 S2 S P2 8 4质粒基因免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性、抗HBs IgG水平以及特异性CTL杀伤活性均明显高于pVAON33 S2 S质粒 ;C3d P2 8未改变基因免疫诱导的抗HBs IgG各亚型水平的格局 ,同时增强IgG1、IgG2a、IgG2b的水平 ;pVAON33 S2 S P2 8 4质粒诱导的IL 4和IFN γ的基因表达水平均明显高于pVAON33 S2 S质粒。结论 :C3d P2 8可在提高体液免疫应答的同时增强基因免疫诱导的HBV特异性细胞免疫应答。

B7反义肽抑制同种异基因移植排斥反应的研究

目的 :探讨B7反义肽竞争抑制CD2 8 B7共刺激通路、抑制移植排斥反应的作用 ,为该反义肽在器官移植方面的应用提供实验依据。方法 :固相合成法合成含有MYPPPYmotif的B7反义肽N’ EFMYPPPYLD C’ ,纯度 95 % ,分子量 (MW)为12 71 6 ;用灭活的C5 7(H 2 d)脾细胞和体外培养新生C5 7心肌细胞作为刺激细胞 ,以适当浓度的B7反义肽处理刺激细胞后 ,再与BALB C(H 2 d)脾细胞作为应答细胞进行混合培养 ,观察此反义肽在体外抑制淋巴细胞增殖的效果 ;用此反义肽预封闭新生C5 7小鼠心肌后 ,移植到BALB C小鼠耳后 ,观察此反义肽在体内抑制移植排斥反应、延长心肌移植存活的情况。结果 :B7反义肽能抑制前述两种淋巴细胞增殖反应 ,抑制率分别为 38 4 %和 36 6 % ;并呈现出明显的剂量依赖关系 ,此反义肽预处理过的新生C5 7小鼠心肌 ,移植到BALB C小鼠 ,可较对照组平均延长 5 4天 (n =6 ,P <0 0 0 1)。结论 :人工合成的B7反义肽在体外可以通过抑制CD2 8 B7共刺激通路 ,抑制淋巴细胞的增殖 ,并可用于延长心肌移植物存活 ,为进一步研究其在移植免疫方面的应用提供了有益的启示。

IP10对机体抗肿瘤免疫应答的增强作用及其机制

目的:研究IP10对机体整体及肿瘤局部细胞免疫应答的影响,从而探讨其抗肿瘤的作用及机制。方法:基因转染的方法建立稳定表达IP10的4T1细胞株(IP10-4T1)。观察IP10-4T1细胞生长情况,观察荷瘤小鼠的生存情况。3H-TdR掺入法检测细胞免疫应答水平。F icoll密度梯度离心法分离肿瘤浸润淋巴细胞,流式细胞技术检测CXCR3的表达。结果:pcDNA3-IP10转染不影响4T1细胞体外生长。IP10-4T1形成的肿瘤生长明显减慢,瘤重显著减轻,该荷瘤小鼠生存率显著增加(P<0.05)。与对照组比较,IP10-4T1细胞免疫的小鼠脾细胞特异性增殖反应明显(P<0.05)。IP10-4T1细胞形成的肿瘤内CXCR3+细胞浸润增加,肿瘤内分离的淋巴细胞抗原刺激后显著增殖(P<0.05)。结论:IP10可能通过诱导机体细胞免疫应答、促进肿瘤内淋巴细胞浸润并增强肿瘤内淋巴细胞增殖活性介导抗肿瘤作用。

粘蛋白1及其介导的肿瘤免疫

粘蛋白 1(MUC1)是一种分布于腺上皮细胞的跨膜糖蛋白 ,在保护细胞免受外界不良因素的影响及介导细胞信号传导方面具有重要的生物学功能。MUC1也参与了多种疾病的发生 ,由于MUC1在肿瘤细胞表面表达量升高 ,同时肿瘤细胞表面MUC1的糖基化与正常细胞存在差异 ,因此它在肿瘤疾病的发生、发展及肿瘤治疗中发挥了重要作用 ,受到了广泛的重视。

未成熟树突状细胞诱导建立异基因嵌合体及延长移植物存活的可能机制

目的 :研究应用供体来源的未成熟树突状细胞 (imDCs)注射受体小鼠后 ,诱导形成异基因嵌合体及延长移植物存活的机制。方法 :(1)应用供体 (C5 7BL 6 )来源的骨髓细胞 ,在体外培养出imDCs ,灭活后体内输注或体外直接刺激受体小鼠(Balb C)的脾细胞 ,观察脾细胞对供体细胞的应答反应 ;(2 )取已建立异基因嵌合体并有效延长移植物存活的受体小鼠的脾细胞 ,观察其对供体细胞刺激的应答反应 ;(3)通过半定量RT PCR检测不同免疫状态下Th1 Th2型细胞因子的表达情况。结果 :应用imDCs体外预刺激脾细胞或体内注射imDCs受鼠的脾细胞 ,均呈现对供鼠脾细胞刺激的特异性低应答 ,这种低应答主要出现在受鼠脾细胞在供鼠脾细胞刺激后的 72小时内 ;建立异基因嵌合体并延长移植物存活的受鼠对来自供鼠脾细胞的刺激也表现为低应答 ,而对于无关第三者脾细胞的刺激仍保持较高水平 ,二者比较 ,统计学处理有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;在诱导形成异基因嵌合体及延长移植物存活的过程中 ,一定程度上显示出Th1 Th2模式的偏移。结论 :应用供体来源的imDCs注射给受体 ,诱导形成异基因嵌合体和延长移植物存活的机制可能与imDCs诱导受体T细胞无能有关 ,而且此过程中在一定程度上表现为Th1向Th2方向的免疫偏移。

全反式维甲酸对基因免疫应答的调节作用

目的 研究全反式维甲酸 (ATRA)对TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞免疫与体液免疫应答的调节作用。方法 肌肉注射重组质粒TR4 2 1 hCGβDNA(每只鼠 5 0 μg 10 0 μl)初次免疫小鼠 ,以灌胃的方式给予ATRA ,并以灌溶剂和TR4 2 1质粒免疫为对照 ;3周与 6周后经同样的方式加强免疫各组小鼠 ,采用ELISA方法对基因免疫小鼠血清中IgG抗体水平进行动态观察 ,分析小鼠血清中IgG抗体亚类 ;3H TdR掺入法测定特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结果 ELISA结果表明 ,TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生较高的抗hCGβ抗体水平 ,ATRA增强TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的抗hCGβ特异性IgG抗体水平并且伴随IgG2a IgG1显著性降低 ;TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生较强的淋巴细胞增殖活性和CTL活性 ,ATRA抑制TR4 2 1 hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞增殖和细胞杀伤功能。结论 ATRA促进基因免疫诱生的TH2免疫应答 ,抑制TH1型免疫应答 ,为改变基因免疫诱生的特异性免疫应答类型提供了一条新的途径。

异位hCGβ基因免疫诱导的特异性抗肿瘤免疫应答

目的 观察异位hCGβ基因免疫诱导的肿瘤特异性免疫应答及其抗肿瘤作用 ,为肿瘤的免疫生物治疗寻求新途径。方法 构建含hCGβ编码基因的质粒TR4 2 1 hCGβ ,对BALB/c小鼠实施基因免疫 ,并以空质粒为对照。采用ELISA法和3 H TdR掺入法分别检测免疫小鼠血清中特异性抗hCGβ IgG抗体及其对肿瘤细胞体外生长的抑制作用 ;特异抗原体外刺激免疫小鼠脾细胞后 ,用3 H TdR掺入法和3 H TdR释放法分别检测其特异性增殖活性和细胞毒活性 ;皮下接种SP2 /0 hCGβ细胞攻击免疫小鼠 ,以成瘤率及实体瘤重量评估体内抗瘤效果。结果 全部TR4 2 1 hCGβ质粒免疫小鼠均产生高水平的抗hCGβ IgG抗体 ,该抗体可抑制肿瘤细胞的体外生长 ,与对照血清相比 ,差异有显著差性 (P <0 .0 5 ) ;hCGβ蛋白、灭活SP2 /0 hCGβ细胞以及两者混合均能刺激TR4 2 1 hCGβ质粒免疫小鼠脾细胞的体外增殖 (SI值分别为 1.5 3、1.81和 2 .0 5 ) ,与空质粒免疫小鼠相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;特异抗原刺激的TR4 2 1 hCGβ质粒免疫小鼠脾细胞对SP2 /0 hCGβ细胞的细胞毒活性明显高于SP2 /0细胞(P <0 .0 1) ;空质粒免疫小鼠接种SP2 /0 hCGβ细胞后成瘤率为 10 0 % ,瘤重达 3.37g ,而TR4 2 1 hCGβ质粒免疫小鼠的成瘤率为 16 .6 6 % 。

淋巴细胞的活化和抗核抗体的生成

抗核抗体 (ANA )是系统性风湿性疾病的标志性抗体。然而 ,有关ANA产生的启动原目前尚不完全清楚。我们自 90年代初开始了ANA启动原的研究 ,获得了一系列研究结果 ,从而提出以下ANA生成的启动原的新观点 :(1 )自身核抗原的改变是驱动ANA生成的启动原 ;(2 )活化淋巴细胞的核抗原发生量与性质的改变 ,是引起ANA生成的最主要原因 ;(3 )系统性红斑狼疮 (SLE )患者外周血B和T淋巴细胞已被活化 ;(4)在一定条件下活化淋巴细胞才能诱导ANA生成 ;(5 )ANA生成是有规律的 ,先出现少数ANA ,后陆续出现众多ANA ,即表位扩展 ;(6 )SLE反应 (自身免疫性 )在一定条件下可发展成SLE样病 (自身免疫病 )。

超抗原SEA对CD4^+T细胞TCR V_β链的取用格局

用超抗原葡萄球菌肠毒素A (SEA )在体内或体外刺激C57BL/ 6小鼠 2种不同的TCRVβ链T细胞亚群 (Vβ3+ CD4+ 、Vβ1 1 + CD4+ T细胞 ) ,观察二者对超抗原的免疫应答。结果显示 :体内初次刺激后 ,2种T细胞亚群在刺激后第 2天都发生增殖 ,随后均逐渐下降至对照水平。但第 2次用同样剂量刺激后 ,Vβ3+ CD4+ T细胞群对SEA的再次刺激表现出增殖 ,而Vβ1 1 + CD4+ T细胞群对SEA再次刺激则表现出免疫无能。体外初次、再次刺激也分别获得与体内实验相同的结果。表明超抗原SEA可选择性地取用Vβ3+ CD4+ T细胞群并对其发生增殖 ,即超抗原SEA对CD4+ T细胞TCRVβ链的取用格局各有不同。