细胞信号转导抑制剂介导Th1/Th2免疫偏移对血吸虫虫卵肉芽肿的影响

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)和磷酯酰肌醇-3-激酶(P13-K)特异性抑制剂(分别为tyrphostin-25、D-sphingosine和wortmannin)对日本血吸虫感染小鼠虫卵肉芽肿病变的影响,并探讨其作用机制。 方法 于小鼠感染日本血吸虫后第35天起,经尾静脉分别注射3种信号转导分子抑制剂,连续5 d。在小鼠感染后6和8wk,观察小鼠肝肉芽肿病变,并用ELISA夹心法和硝酸还原酶法分别测定小鼠血清IFN-γ、IL-4和一氧化氮(NO)水平。结果 感染小鼠应用TPK和PKC抑制剂后均可显著抑制肝肉芽肿病变,PKC抑制剂可使肉芽肿减少率达56.2％～63.4％(P<0.01)。PKC抑制剂主要抑制Th2细胞因子IL-4的表达,其抑制率为34.1％和65.6％(P<0.01),而对NO水平的检测结果进一步证明了PKC抑制剂对IL-4表达的抑制作用。 结论 在日本血吸虫感染早期应用PKC抑制剂干预T淋巴细胞信号转导可显著抑制小鼠肝肉芽肿病变,其机制可能是由于抑制了Th2优势应答并介导Th2向Th1免疫反应偏移。

补肾益气方对正常早孕期人细胞滋养层细胞生物学行为的影响

目的探讨补肾益气方对正常早孕期人细胞滋养层细胞增殖、侵袭、分化等生物学行为的影响。方法体外培养正常早孕期人细胞滋养层细胞 ,分别设空白对照组、5 %含药血清组、10 %含药血清组、2 0 %含药血清组 ,用扫描电镜、噻唑蓝 (MTT)法、流式细胞仪、Transwell侵袭实验检测含药血清作用 2 4h、4 8h、72h后细胞的形态、增殖活性及侵袭力的变化。结果含药血清培养 2 4h、4 8h、72h后 ,细胞滋养层细胞微绒毛变丰富 ,伪足增多、延长 ;细胞在酶联免疫分析仪 4 90nm波长的吸光度值增加 (P <0 0 1) ;sub G1期细胞减少 (P <0 0 1) ,S期细胞增加 (P <0 0 1) ,G2 /M期细胞明显减少 (P <0 0 1) ;每视野穿过PET膜的细胞数明显增多 (P <0 0 1)。结论补肾中药促进人细胞滋养层细胞增殖及侵袭力 。

补肾中药调节溴隐亭致大鼠流产模型泌乳素释放肽及其受体表达对妊娠结局的影响

目的 研究补肾中药对下丘脑泌乳素释放肽 (PrRP)mRNA及垂体、蜕膜、胎盘组织PrRP受体 (PrRP R)mRNA表达的影响。 方法 6 0只SD孕鼠于孕 6～ 8d皮下注射溴隐亭 ,致成大鼠流产模型后随机分为 5组 :A组为模型组 ,B～D组分别为模型加用中药、泌乳素 (PRL)及孕酮 (P) ,E组为正常妊娠。孕 12d处死大鼠 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测下丘脑PrRP及垂体、蜕膜、胎盘组织PrRP RmRNA表达。 结果 B组PrRPmRNA表达明显高于A组 (P <0 .0 5 ) ,与其他 3组则无明显差别 ;A组垂体PrRP RmRNA表达明显高于其他 4组 (P <0 .0 1) ,各组蜕膜及胎盘PrRP RmRNA表达无明显差异。 结论 补肾中药通过调节下丘脑PrRPmRNA及垂体PrRP

干细胞样抗原提高树突状细胞介导胶质瘤免疫治疗的体外研究

目的比较胶质瘤干细胞样抗原与非干细胞样抗原致敏树突状细胞（DCs）疫苗对胶质瘤的体外作用。方法体外用无血清法和血清法培养恶性胶质瘤细胞，有限稀释法检测其克隆形成率；冻融法获取相应胶质瘤抗原；GM—CSF、IL-4体外诱导人外周血单核细胞获取DCs，与抗原孵育后再激活T淋巴细胞，同位素法检测效应细胞对胶质瘤细胞的杀伤率；流式细胞术检测DCs表面分子变化以及非贴壁细胞中T细胞比例的变化。结果无血清培液中的胶质瘤细胞具有更高的克喹形成率（P〈0．01）；DCs经不同抗原刺激后HLA—A、HLA—DR、CD80、CD86表达上调（P〈0．01）；非贴壁细胞与DCs共培养后T细胞比例明显增高；干细胞样抗原激活的效应细胞对非干细胞阵细胞和干细胞样细胞杀伤率分别为（70，2±5，13）％和（56．7±7．81）％（P〈0．001），而非干细胞洋抗原活化的效应细胞相应的杀伤率为（36．6±6．45）％和（9．05±3．49）％（P〈0．001）。结论无血清培养液中的胶质瘤细胞具有更强的增殖能力，胶质瘤干细胞样抗原较传统抗原具有更强的抗原性，为进一步提高胶质瘤DCs疫苗疗效奠定基础。

OX40和OX40L在免疫应答中的特点及其应用

OX4 0 /OX4 0L是T APC应答过程中的一对重要的协同刺激分子。当T细胞上的OX4 0与APC上的OX4 0L结合 ,OX4 0就将一个协同刺激信号传递给T细胞 ,促进了细胞克隆的扩增和增强其效应功能。OX4 0主要作用于T细胞效应的晚期阶段 ,能促进更多的记忆T细胞生成。在疾病过程中 ,OX4 0仅表达在炎症浸润部位的抗原特异性CD4 + T细胞上 ,因此可为临床诊断和疾病治疗提供依据 。

IL-2通过上调naǐve CD4^＋ T细胞SOCS-3表达抑制CD4^＋ T细胞的极化和增殖

目的探讨IL-2预孵育naǐve CD4^＋ T细胞后，对其极化（polarization）方向和增殖（proliferation）能力的影响。方法用终浓度为50U／ml的IL-2分别预孵育D011．10TCR转基因小鼠和C57BL／6N小鼠naǐve CD4^＋ T细胞，在不同时间点用荧光实时定量PCR（real-time PCR）检测这两种细胞中SOCS-3（suppressor of cytokine signal-3）表达的变化。预孵育4h后，洗去IL-2，分别加入卵清白蛋白（OVA）和灭活后的BALB／c脾细胞，在存在细胞因子IL-12或IL-4情况下共培养14d后，用流式细胞仪检测THl细胞活化和极化的标志IL-12Rβl、IL-12Rβ2，对C57BL／6N小鼠naǐve CD4^＋ T细胞的极化中还检测TH2极化的标志——细胞内IL-4的表达；同时将无IL-2预孵育的作为对照组。结果IL-2预孵育后这两种鼠naǐve CD4^＋ T细胞内的SOCS-3表达于6h达高峰；在SOCS-3表达达高峰后分别给予特异性抗原和同种异基因抗原刺激，其向TH1方向的极化和增殖能力都受到明显的抑制（P〈0．05）。结论IL-2预孵育naǐve CD4^＋ T细胞后，可以上调SOCS-3的表达；SOCS-3的上调表达可以抑制naǐve CD4^＋ T细胞接受特异性抗原和同种异基因抗原刺激后向TH1方向的极化和增殖能力。