可变数目串联重复序列在上海崇明岛地区结核分枝杆菌北京基因型菌株微进化研究中的应用

本文通过对上海市疾病预防控制中心收集并保存的、来源于上海崇明岛地区痰培养阳性肺结核患者的135株结核分枝杆菌北京基因型菌株进行可变数目串联重复序列(VNTR)和单核苷酸多态性(SNP)基因分型,并构建最小生成树(MST),来寻找适合研究北京基因型菌株微进化的VNTR组合及区分不同亚型的分子标志。结果显示,16位点VNTR与SNP的分型结果最匹配,适合于研究该地区北京基因型菌株的微进化;SNP单倍型主要集中在ST10(42.2%)、ST19(30.4%)、ST22(14.1%)3个类型;4个VNTR位点(Mtub21、QUB26、MIRU16和QUB4156)可能是区分北京基因型菌株不同亚型的分子标志。

上海2009甲型H1N1流行性感冒病毒全基因组分析

2009年全球暴发2009甲型H1N1流行性感冒(简称流感)疫情,上海于2009年5月出现第1例输入型病例。为了解上海地区输入型2009甲型H1N1流感病毒的生物学特征,以上海较早发现的2例输入型甲型H1N1流感患者作为研究对象,分离出A/Shanghai/37T/2009和A/Shanghai/71T/2009病毒,利用实时定量荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定病毒,通过扫描透射电子显微镜观察、免疫荧光检测、全基因组测序和生物信息软件分析,对这2株流感病毒形态、结构、耐药性、基因特点和病毒型别等进行研究。结果显示,病毒呈现正黏病毒颗粒形态特征;犬肾(MDCK)细胞内的病毒能与患者恢复期血清反应。此2株病毒的全基因核酸序列和氨基酸序列与美国参考株A/California/04/2009(H1N1)有较高同源性,其中第31位氨基酸残基发生改变。对金刚烷胺耐药,而对奥司他韦敏感。基于全基因组的系统发育分析,确认此2株病毒属2009甲型H1N1流感病毒。

走近医学真菌

真菌学科所研究的真菌至少包括50000种，其中多数在自然界有机物循环中起重要作用。在医学真菌中，真菌的次级代谢产物如抗生素以及免疫抑制药物如环孢素，均已被用于医疗。此外，酵母已作为一种模式生物进行基因组学、蛋白质组学、代谢组学的研究对象，例如目前研究蛋白质一蛋白质相互作用中，酵母双杂交体系对推动生命科学卓有贡献。与人类疾病密切相关的真菌种类仅为几十种。

2009年上海分离的2株猪源甲型H1N1流感病毒

2009年全球暴发猪源甲型H1N1流感病毒疫情，上海地区于5月份诊断第一例输入性病例。本研究从上海地区较早发现的两个输入性甲型H1N1流感病例样本中分离出2株病毒，分别命名为A／Shanghai／37T／2009和A／Shanghai／71T／2009。MDCK细胞培养上清中的病毒通过电镜显示，该病毒的直径大约为60～80nm，具包膜，包膜表面有突起，呈现出正粘病毒颗粒形态特征。免疫荧光检测显示，MDCK细胞内病毒成分能与病人恢复期血清反应。2株病毒的全基因核酸序列和氨基酸序列与美国参考株California04具有高度的同源性；基于全基因的系统发育分析，确认此2株病毒属于2009年在全球暴发流行的新型H1N1甲型流感病毒。在此基础上的进一步研究发现，2株病毒可诱导A549细胞中抗病毒效应基因的表达；经Ⅰ型干扰素预处理的细胞可有效抵抗病毒的感染，提示其潜在的保护作用。综上所述，上海分离的2株病毒和2009年北美暴发的猪源甲型H1N1流感病毒是同源的，并且在病毒的致病性，药物的抗性和抗原性方面没有发生变异。

病毒与人类健康——2008年诺贝尔生理学或医学奖简介

2008年10月6日,诺贝尔生理学或医学奖授予了德国科学家哈拉尔德·楚尔·豪森、法国科学家弗朗索瓦丝·巴尔-西诺西和吕克·蒙塔尼,以表彰他们对揭示病毒感染在肿瘤、传染病等人类重大疾病中的致病机制所做出的突出贡献。本文将就病毒感染与人类健康的密切关系做一简要介绍。

泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性和同源性分析

目的分析泛耐药鲍曼不动杆菌(PDRAB)的耐药性、同源性及感染病例的临床特征和治疗情况,为指导临床合理用药、控制感染提供依据。方法收集临床分离自住院患者的鲍曼不动杆菌,用法国生物梅里埃VITEK-2 Compact全自动细菌分析仪及药敏纸片法分析菌株耐药性。选取PDRAB感染的病例,用回顾性统计分析方法分析PDRAB感染病例的临床特征及疗效转归;用微量板半定量法检测PDRAB菌株的生物膜形成能力;用脉冲场凝胶电泳法分析PDRAB菌株的同源性。结果共收集鲍曼不动杆菌138株,其中PDRAB菌株11株,占7.97%;选取PDRAB感染的病例10例,其中呼吸重症监护室7例(70%)、普外科2例(20%)、普通重症监护室1例(10%)。10株PDRAB对多黏菌素B敏感率为100%,对目前所有常规的抗菌药物耐药率为100%。138株鲍曼不动杆菌菌株中生物膜阳性7株(5.07%),其中PDRAB 2株、非PDRAB 5株。10株PDRAB菌株共分为7型(A、B、C、D、E、F、G),其中D和E型中的2株菌株的同源性高,其余为散发株。结论呼吸重症监护病房泛耐药现象严重,长期广谱抗菌药物的使用、侵入性诊疗,合并多种基础疾病与感染发生密切相关,多种抗菌药物联合使用对控制PDRAB感染有一定疗效。PDRAB耐药机制复杂,应以呼吸重症监护室为防控重点,同时加强对生物膜阳性菌株所分布的病区的耐药性监测。

GeneXpert MTB／RIF技术在结核病早诊断中的应用

目的评估GeneXpertMTB／RIF技术（简称XpertMTB／RIF）检测结核分枝杆菌（MTB）及其利福平耐药的可行性。方法选取2015年1—6月上海市松江区结核病定点医院结核科门诊连续纳入、初次就诊的疑似结核病患者，共556例。收集患者痰液标本，分别进行涂片抗酸染色镜检法（简称“涂片法”）、液体分枝杆菌培养管（MGIT）培养法（简称“液体培养法”）、传统比例法药物敏感性试验（简称“药敏试验”）和XpertMTB／RIF检测，比较XpertMTB／RIF法和传统方法检测痰标本中MTB及其耐药性的效能。结果537例患者经涂片法、液体培养法和XpertMTB／RIF检测，阳性率分别为17．32％（93／537）、28．31％（152／537）和28．12％（151／537）。以液体培养为金标准，XpertMTB／RIF检测的敏感度和特异度分别为90．60％（135／149）和95．84％（369／385），且敏感度高于涂片法[涂片法的敏感度为60．53％（92／152）]，差异有统计学意义（χ2=36．71，P％0．01）；XpertMTB／RIF检测涂阳标本的敏感度为96．63％（86／89），明显高于检测涂阴标本的敏感度ES1．67％（49／60）]，差异有统计学意义（χ2=9．43，P〈0．01）。以比例法药敏试验结果为金标准，XpertMTB／RIF检测利福平耐药的敏感度为90．00％（9／10），特异度为99．07％（106／107），一致率为98．29％（115／117）。结论XpertMTB／RIF技术操作简便、快速、安全，敏感度和特异度较高，对基层实验室早期检测MTB及判定利福平耐药具有重要价值。

医源性表皮葡萄球菌ica操纵子转录水平对生物膜表型的影响

目的探讨表皮葡萄球菌临床株中ica操纵子转录水平对生物膜表型差异的影响。方法采用微量板半定量法检测细菌生物膜表型,用Southern杂交和聚合酶链反应检测icaA基因及ica操纵子中是否存在插入序列,用RNA狭缝杂交和逆转录实时定量聚合酶链反应检测icaA基因和icaR基因的转录水平;采用χ2检验分析icaA基因与生物膜表型的相关性,采用单因素方差检验分析转录水平的差异。结果101株临床分离株中,32.7%(33/101株)能形成生物膜,其中22株icaA基因阳性;67.3%(68/101株)无生物膜形成,其中15株icaA基因阳性。15株icaA+/生物膜表型-分离株中,ica操纵子各基因中均不存在插入序列,icaA基因的转录水平明显低于生物膜阳性的ATCC35984株(P<0.05),其中2株icaR基因的转录水平高于ATCC35984株(P<0.01)。结论表皮葡萄球菌临床株中ica操纵子的存在与生物膜表型相关(χ2=19.045,P<0.01);ica操纵子的低转录是icaA+/生物膜表型-临床株不形成生物膜的主要原因。

表皮葡萄球菌AtlE蛋白介导生物膜起始黏附的相关机制

目的探讨表皮葡萄球菌atlE基因编码的AtlE蛋白介导生物膜起始黏附的相关机制。方法采用RT-PCR法检测表皮葡萄球菌atlE基因在不同时期的表达水平,用紫外分光光度计检测DNA的方法检测了相应时期的胞外DNA的释放量,并用DNA酶(DNaseⅠ)研究表皮葡萄球菌胞外DNA在生物膜形成和起始黏附中的作用;采用pBT2质粒同源重组敲除的方法构建了表皮葡萄球菌1457的atlE基因突变株,研究atlE基因敲除突变对起始黏附能力、生物膜形成及胞外DNA释放能力的影响。结果表皮葡萄球菌atlE基因的表达与胞外DNA的释放量有相关性;DNA酶能影响未成熟生物膜且能降低起始黏附能力;ΔatlE菌株胞外DNA的释放减少,起始黏附能力明显降低,不形成生物膜。结论表皮葡萄球菌atlE基因编码的AtlE蛋白能通过释放胞外DNA在表皮葡萄球菌的生物膜起作用。

郑州地区耐多药结核分枝杆菌gyrA和gyrB基因突变特征及对氟喹诺酮类药物耐药研究

目的分析郑州地区耐多药(MDR)结核分枝杆菌(MTB)临床分离株中gyrA和gyrB基因突变特征及其对氟喹诺酮类(FQs)药物耐药的特点。方法收集2015年5月至2016年12月河南省胸科医院收治的256例肺结核患者的痰标本,进行MTB固体罗氏培养、液体分枝杆菌培养,MTB培养阳性者行比例法药物敏感性试验,采用聚合酶链式反应扩增MDR MTB的gyrA和gyrB基因,对扩增产物进行测序和序列比对分析。应用耐药基因判断MDR MTB对FQs药物耐药的敏感性和特异性。结果 256例患者中MTB培养阳性215例,其中非MDR肺结核患者137例,MDR肺结核患者78例。78株MDR MTB临床分离株对氧氟沙星(Ofx)、0.5 mg·L^(-1)莫西沙星(Mfx 0.5)及2.0 mg·L^(-1)莫西沙星(Mfx 2.0)的耐药率分别为55.1%(43/78)、55.1%(43/78)、32.1%(25/78);137株非MDR MTB临床分离株对Ofx、Mfx 0.5及Mfx 2.0的耐药率分别为7.3%(10/137)、5.8%(8/137)、0.7%(1/137);非MDR MTB临床分离株对Ofx、Mfx0.5、Mfx2.0的耐药率显著低于MDR MTB临床分离株(χ~2=61.21、66.73、45.87,P<0.001)。gyrA基因、gyrB基因在Ofx耐药株中的突变率分别为90.7%(39/43)、11.6%(5/45);gyrA基因、gyrB基因在Mfx 0.5耐药株中的突变率分别为88.4%(38/43)、11.6%(5/43);gyrA基因、gyrB基因在Mfx 2.0耐药株中的突变率分别为100.0%(25/25)、12.0%(3/25)。以FQs药物敏感性试验结果为金标准,gyrA基因突变判断MDR MTB对Ofx、Mfx 0.5、Mfx 2.0耐药的敏感性分别为90.7%、88.4%、58.1%,特异性分别为88.6%、85.7%、100.0%,gyrB基因突变判断MDR MTB对Ofx、Mfx 0.5、Mfx 2.0耐药的敏感性分别为62.5%、62.5%、37.5%,特异性分别为45.7%、45.7%、68.6%,检测gyrA基因突变判断MDR MTB对FQs药物耐药的特异性高于gyrB基因突变(χ~2=17.86、15.44、13.92,P<0.001),检测gyrA基因突变判断MDR MTB对Ofx耐药的敏感性高于gyrB基因突变(χ~2=4.53,P<0.05)。结论郑州地区MDR MTB对FQs耐药率较高,耐药的主要原因是gyrA基因突变,最常见的gyrA基因突变位于94位点。

芹菜素改善D-半乳糖衰老模型小鼠衰老指征的研究

目的:观察芹菜素对D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠的影响。方法:建立D-半乳糖致小鼠衰老模型,以Y型电迷宫检测其学习记忆能力．分别采用黄嘌呤氧化酶法、TBA比色法测定大脑超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,观察小鼠服用不同剂量芹菜素后上述指标的变化。结果:芹菜素低、中、高剂量均可显著提高衰老模型小鼠的学习记忆能力(P<0．05或P<0．01),显著增加D-半乳糖所致衰老模型小鼠大脑SOD活性、降低MDA含量(P<0．05或P<0．01)。结论:芹菜素能改善D-半乳糖所致衰老小鼠的多项体征。

芹菜素对衰老模型小鼠学习记忆能力的影响

芹菜素（Apigenin），又称芹黄素，化学结构为5，7，4’-三羟基黄酮，是芹菜中的主要生物活性成分，广泛存在于多种水果、蔬菜、豆类和茶叶中。大量实验表明芹菜素是一种抗氧化和抗脂质过氧化作用的天然存在的黄酮类化合物，具有神经保护、抗氧化、自由基清除、抗肿瘤、抗炎、碳水化合物代谢促进因子、免疫调节等作用，与其它黄酮类物质（槲皮素、山奈黄酮）相比具有低毒、无诱变性等特点。

园林植物挥发油成分分析及抗菌活性测定

运用试管稀释法和平板涂布法,测定黄皮,白皮松,香榧,侧柏,龙柏,雪松,圆柏等7种常见园林植物的挥发油对表皮葡萄球菌,金黄色葡萄球菌,大肠杆菌及绿脓杆菌的抗菌活性(包括抑菌和杀菌两个方面)。结果显示,所有供试植物挥发油均具有一定的抗菌活性。对金黄色葡萄球菌的抑菌活性为侧柏=龙柏>圆柏>雪松>香榧;对表皮葡萄球菌的抑菌活性为侧柏>圆柏>龙柏=雪松=黄皮>白皮松>香榧;仅圆柏挥发油对大肠杆菌具有抑菌作用,所有供试植物挥发油对绿脓杆菌均无抑菌作用。实验证明,圆柏,侧柏,龙柏,雪松具有较强抗菌活性,是较为理想的城市生态保健型绿化模式的栽培树种。

穿心莲内酯对人PBMC/PBM表达IL-18相关细胞因子的影响

目的:研究穿心莲内酯对外周血单核细胞表达IL-18相关细胞因子的影响。方法:不同浓度穿心莲内酯处理LPS刺激的PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells,外周血单个核细胞)和LPS+IFNγ-/IL-4激活的磁珠分选PBM(PeripheralBlood Monocytes,外周血单核细胞),利用real-time RT-PCR法检测IL-18、IL-18BP、IL-18Rα、IL-18Rβ基因转录水平,ELISA法检测PBM上清中的IL-18、IL-18BP和IL-1β、IL-1Rα。结果:穿心莲内酯呈剂量和时间依赖地调节PBMC IL-18和IL-18BP的表达。穿心莲内酯处理使LPS刺激的PBMC IL-18BP转录增加,IL-18BP/IL-18比值升高;使LPS+IFNγ-激活的PBM表达IL-18BP/IL-18比值从9.60倍升高至214倍;IL-4激活的PBM表达IL-1Rα/IL-1β比值从9 200降低至6 520。结论:穿心莲内酯可调节激活的外周血单核细胞IL-18相关基因转录和表达,抑制炎症时IL-18的高表达。

新疆野生及栽培一枝蒿多糖对树突状细胞免疫功能的影响

研究和比较新疆野生与栽培一枝蒿多糖对骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟和功能的影响。超声法制备野生及栽培一枝蒿粗多糖;Sevage法除蛋白;蒽酮-硫酸法测定多糖含量;流式细胞术检测DCs的成熟;ELISA法检测IL-12和TNF-α的表达水平。结果显示,野生及栽培一枝蒿多糖含量分别为26.18%和22.14%,去除蛋白质后多糖含量分别为30.94%和27.06%;野生及栽培一枝蒿多糖均可以显著增强小鼠骨髓来源CD11c+DCs表面分子CD40,CD86及CD80的表达(P<0.05);显著促进IL-12和TNF-α的表达(P<0.05);显著降低DCs吞噬FITC-Dextran的能力;且相同剂量对DCs的免疫活性无显著性差异(P>0.05);除蛋白和不除蛋白的野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性均无显著差异(P>0.05)。新疆野生和栽培一枝蒿多糖含量差异较小,并均可以促进小鼠骨髓来源DCs的成熟和功能,且差异不大。

白介素-4和白介素-13促进人肺成纤维细胞ADAM33基因的表达

目的探讨白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13)对人肺成纤维细胞ADAM33(a disintegrin and a metal-loproteinase33,ADAM33)mRNA表达的影响。方法以不同浓度的IL-4或/和IL-13刺激培养的人肺成纤维细胞(MRC-5),然后用实时定量反转录多聚酶链反应(real-time RT-PCR)法测定ADAM33mRNA表达的变化。结果人肺成纤维细胞上存在着ADAM33mRNA的表达,当分别以10ng/mL的IL-4或IL-13刺激时,AD-AM33mRNA的表达增加呈现时间依赖性,至24h达到高峰。随着IL-4和IL-13刺激浓度的增加,ADAM33mRNA的表达也明显增加:以100ng/mL的IL-4和100ng/mL的IL-13刺激时,ADAM33mRNA的表达较未刺激细胞分别增加了(9.49±2.83)倍和(14.21±3.35)倍(P<0.01);而以10ng/mL的IL-4和10ng/mL的IL-13联合刺激时,ADAM33mRNA的表达较未刺激细胞增加了(15.06±4.57)倍(P<0.01)。结论IL-4和IL-13能明显促进肺成纤维细胞ADAM33mRNA的表达。

去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞体外成脂肪分化能力的研究

探讨不同月龄、去卵巢对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向脂肪细胞分化能力的影响。选用健康3月龄和6月龄Spraque-Dawley(SD)雌性大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松症的动物模型;使用密度梯度离心法分别获取各组骨髓间充质干细胞(MSCs),体外培养传至3代,加入成脂肪诱导液进行诱导,油红O染色观察细胞内脂滴;并用RT-PCR法检测成脂肪分化标志物脂蛋白脂酶(LPL)mRNA表达水平。实验分为8组:1)3月龄正常大鼠骨髓间充质干细胞组(MSCs3control);2)3月龄去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞组(MSCs3ovx);3)6月龄正常大鼠骨髓间充质干细胞组(MSCs6control);4)6月龄去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞组(MSCs6ovx);5)3月龄正常大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪诱导组(MSCs ADI3control);6)3月龄去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪诱导组(MSCs ADI3ovx);7)6月龄正常大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪诱导组(MSCs ADI6control);8)6月龄去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成脂肪诱导组(MSCs ADI6ovx)。结果显示:(1)年老组大鼠MSCs成脂肪细胞分化能力大于年幼组大鼠;(2)成脂肪诱导后,成脂肪诱导各组MSCs胞浆内均有脂滴形成,MSCs ADI3ovx和MSCs ADI6ovx明显多于相应对照组。(3)成脂诱导后,与相应的对照组相比,MSCs ADI3ovx和MSCs ADI6ovx LPL mRNA表达水平明显增高。研究结果表明,年老组和去卵巢骨质疏松大鼠(MSCs)向脂肪细胞分化能力皆增强。

过氧化氢干雾对生物安全柜微环境表面消毒效果的研究

生物安全实验室微环境消毒是控制实验室污染的重要环节。过氧化氢广泛用于病原微生物实验室微环境消毒,但其对不同病原微生物的消毒效果有待研究。本文研究了过氧化氢干雾(粒径<10μm)以不同消毒程序对生物安全柜表面常见微生物的消毒效果。结果显示,在生物安全柜内采用优化的消毒程序(发散循环8次,每次1min,达60ppm后,静置消毒2h),过氧化氢干雾可完全杀灭1×106 CFU枯草芽胞杆菌、嗜热脂肪芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、耻垢分枝杆菌,以及1×108 CFU大肠埃希菌。然而,当金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、耻垢分枝杆菌浓度达1×107 CFU时,过氧化氢干雾无法完全杀灭。因此,建议在进行过氧化氢干雾消毒时,应先用消毒剂处理,以期彻底杀灭生物安全柜微环境中污染的病原微生物。

乙型肝炎病毒与Ⅰ型干扰素系统相互作用新机制及治疗新策略的研究

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是严重危害人类健康的重要疾病之一,迄今尚无治愈药物。干扰素(interferon,IFN)由于HBeAg/HBsAg血清转换清除率较高、获得疗效后复发率低,成为临床抗乙肝病毒药物之一,但由于仅约20%~40%的患者对IFN有较好应答,其临床应用受到很大阻碍。鉴于此,国内外学者近年来利用体外HBV复制感染细胞模型及动物模型与临床乙型肝炎患者队列,采用多种研究手段,一方面研究IFN及IFN诱导的细胞基因在抗HBV及信号传导途径中的作用及新机制,另一方面研究HBV复制和蛋白表达对天然免疫信号通路、IFN诱生和抗病毒效应的影响,同时以此为基础探索优化干扰素治疗及治愈慢性乙肝的新型措施和手段。本文重点介绍了作者所在课题组的研究工作,并对未来发展提出了展望。

ADAM33基因在慢性哮喘小鼠气道重塑中的表达

目的:研究ADAM33(a disintegrin and a metallo proteinase 33)mRNA在慢性哮喘小鼠模型气道重塑中的表达。方法:20只雌性C57BL/6小鼠随机分为2组,每组10只。A组(慢性哮喘组)分别于第1、14天小鼠腹腔注射1mL致敏液,从第21天开始雾化吸入2.5%的卵蛋白(OVA)溶液,每次30min,每周3次,连续8周。(2)B组(生理盐水对照组)给予生理盐水进行致敏和激发。在末次激发24h后,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)做细胞分类计数。用实时定量反转录多聚酶链反应(real-timeRT-PCR)法测定肺组织中ADAM33、白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13)mRNA表达量。取左肺组织分别行苏木紫-伊红(HE)染色和Masson′sTrichrome染色,用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体行免疫组化染色。结果:A组BALF中嗜酸粒细胞[(6.3±1.3)×105/mL]及百分比[(18.1±3.0)%)]、肺组织中ADAM33、IL-4和IL-13等mRNA表达量[分别为(1.41±0.93)×10-2、(5.72±3.89)×10-2、(9.45±5.91)×10-2)]与B组相比明显增高(P<0.01)。而且Masson′sTrichrome染色示上皮下胶原纤维沉积增加、α-SMA免疫组化示气道平滑肌层明显增厚。结论:ADAM33 mRNA在小剂量OVA反复激发复制的慢性哮喘小鼠模型中表达增加,可能参与气道重塑的发生和发展。