乙型肝炎病毒X基因变异和慢性乙型肝炎患者临床与组织病理学指标的相关性

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝组织内乙型肝炎病毒（HBV）X基因部分区段的变异与HBV相关各临床与组织病理学指标的关系。方法以83例慢性乙型肝炎肝穿刺活检标本作为研究对象,20例HBV相关性肝细胞癌作为对照;HBV X基因变异的研究采用PCR扩增和直接双向测序。免疫组化二步法显示肝组织内四种病毒蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测肝组织内HBV DNA含量。结果HBV X基因nt1583～1793区段错义突变主要出现在对应的X蛋白aa87（nt1632、1633）、88（nt1635、1636）、116（nt1719）、118（nt1726、1727）、119（nt1730）、127（nt1752）、130（nt1762）和131（nt1764）位氨基酸。nt1725～1730（aa118/119）突变与肝组织内HBcAg显著低表达（P=0.006）,和HBV DNA低拷贝数（P=0.004）明显相关,尤以ACTGAC（TD）型突变最为明显;相反,nt1762/1764（aa130/131）位点突变则伴肝组织内HBcAg显著高表达（P=0.005）和高水平的HBV DNA含量（P=0.006）。同时,肝癌组中nt1725～1730野生型所占比率明显高于慢性肝炎（P〈0.05）,而nt1762/1764突变型所占比率肝癌组与肝炎组相比显著增高（P〈0.01）。结论肝组织内,在nt1725～1730突变能显著降低HBcAg的表达和HBV DNA水平,nt1762/1764突变则相反。肝组织内HBV的高负载可能与肝细胞癌的发生有关。

慢性乙型肝炎组织病理学指标与患者预后的相关性

目的通过对慢性乙型肝炎肝穿刺标本中组织病理学指标和患者预后的回顾性研究，明确各指标间的相互关系及和预后的联系。方法对216例肝穿刺活检病例进行预后随访，时间为2～18年。根据随访结果，首先按有无肝细胞癌的发生将患者分为两组：癌变组和非癌变组；非癌变组患者又按有无肝硬化的发生分为硬化组和非硬化组。肝脏病理损伤程度用Seheuer评分来表示；免疫组化二步法检测肝组织HBsAg、HBcAg、HBeAg和HBx蛋白的表达；实时定量荧光PCR检测肝组织内HBV DNA的含量。结果相关分析结果显示：肝组织内HBeAg的表达与慢性肝炎G分级显著正相关（r=0．253，P=0．001）；HBx蛋白的表达与G分级（r=0．190，P=0．008）和S分期（r=0．231，P=0．002）均显著正相关。部分指标预后组间也存在一定差异：G分级（分别为2．84±0．93和2．14±1．13，P=0．000）和S分期（分别为2．83±1．26和1．86±1．39，P=0．000）硬化组显著高于非硬化组；同样肝组织内HBeAg（分别为0．32±0．45和0．18±0．43，P=0．005）和HBx蛋白（分别为1．16±1．22和0．63±0．95，P=0．024）的表达硬化组也明显比非硬化组高。方差分析显示HBeAg和HBx蛋白的表达具有交互作用，同一病例中两者同时表达大大增加肝硬化的发生率（达38．46％）。多元参数的最优尺度回归则显示Seheuer评分是最重要的判断预后的指标。结论肝组织内HBeAg和HBx蛋白的表达可反映病变的严重程度，并显著增加患者肝硬化的发生率；Seheuer评分是判断患者预后的重要的指标，其分值越高患者预后越差。

端粒酶作为肿瘤标志物在病理学诊断中的应用

很多恶性肿瘤中都能检测到端粒酶活性 ,端粒酶可以作为诊断这些肿瘤的生物学标志。在某些肿瘤中 ,端粒酶表达会随着肿瘤的进展而上调 。

药物性肝炎组织病理学评分探讨

尽管RUCAM以半定量方式确定DILI的可能性,其作为当前最好的辅助诊断工具,能帮助临床医师建立思维过程,但远不够完善,存在很多难以判定的不确切因素,或难以确定的计分定位。临床实际中,常需依据临床知识的敏锐性和直觉确立诊断。因此亟待研制一种更易应用有效的诊断工具。复旦大学病理学胡锡琪教授,据其长期临床病理经验,特别是近10年潜心研究DILI种种病理变化,从病理角度提出了DILI评分系统(DILI Pathologoal Scroring System,DILI PSS),并逐一冠以分值。我们将胡氏DILI PSS发布给读者以协助广大临床医师诊断,并希望广大肝病工作者在临床应用中不断提出改进建议和意见,使之不断完善,甚至组合RUCAM,使之成为期待已久的一种简易有效的DILI诊断工具。

自身免疫性肝病的组织病理学特点及其临床意义

自身免疫性肝病（AILD）可分为自身免疫性肝炎（AIH）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）和原发性硬化性胆管炎（PSC）。肝活检对于AILD的诊断以及严重程度和预后判断至关重要。AIH-般以界面性肝炎（碎屑样坏死）、淋巴．浆细胞浸润和肝细胞玫瑰样花结为组织病理学特点．而PBC和PSC分别表现为胆管肉芽肿样破坏和胆管周围同心圆样纤维沉积（“洋葱皮样”）。除组织病理学证据外，AILD的诊断还需结合特征性临床、生化改变以及血清自身抗体和球蛋白水平综合判断。

药物性肝损伤组织病理学评分再探讨

由于肝脏是药物代谢的重要器官,因此随着各种新药的不断涌现,药物性肝损伤（DILI）逐年增多,已知超过600多种药物可引起DILI。DILI的临床表型包括：急性肝炎、慢性肝炎、急性胆汁淤积、慢性胆汁淤积和胆汁性肝炎,DILI肝脏组织病理学变化包括： 1.单纯性黄疸：肝细胞弥漫性胆汁淤积伴毛细胆管扩张,胆栓形成,无肝细胞变性坏死,门管区无炎症反应。

自身免疫性肝病的组织病理学

自身免疫性肝病（AILD）组织病理学改变．主要探讨自身免疫性肝炎（AIH）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）和原发性硬化性胆管炎（PSC）。AIH、PBC和PSC被认为是具有相同的自身免疫性发病机制和相似的病理变化．即疾病早期炎症位于门管区及汇管区周围．疾病的终末期均发生肝硬化。然而在这些相似的病变背景下，AIH、PBC和PSC出现明显的组织病理学变化的差异．提示这些疾病有着不同的发病机制，即各有特定的损害部位（自身免疫的靶区）。

肝活检病理学进展

前言 肝活检的目的是评估肝炎的炎症程度和纤维化分期,确诊HCC的癌前期病变(例如小细胞异形增生)和除外相混淆的肝病例如脂肪性肝炎、AIH和DILI。美国肝脏病学会制订的临床指南推荐的肝活检仅限于一群特殊的慢性肝炎患者,对HBeAg阳性和ALT水平持续正常的年轻患者(30岁以下)没有必要作肝活检,因为这些患者处于免疫耐受期,其不是治疗的候选对象。

TGF-β1对醛糖还原酶在大鼠系膜细胞及人肾小球肾炎中表达的影响

目的 探讨转化生长因子 β1(tranforminggrowthfactor betal,TGF β1)对其反应性基因产物醛糖还原酶(aldosereductase ,AR)在大鼠系膜细胞中表达的影响及两者在人肾小球肾炎中的表达及其相互关系。方法 采用RT PCR、Westernblot法观察外源性TGF β1对大鼠系膜细胞中AR表达的影响 ;以 12例肾小球轻微病变作为对照 ,对各种不同组织学类型的IgA肾病 (15例 ) ,膜性肾炎 (14例 ) ,局灶节段增生性肾炎 (12例 ) ,狼疮性肾炎 (14例 ) ,新月体性肾炎 (9例 )的人肾穿刺活检标本 ,应用免疫组织化学ABC方法分别观察TGF β1和AR在肾炎组织中的表达 ,并对其染色强度作图像定量分析。结果 外源性TGF β1作用后 ,大鼠系膜细胞中AR的mRNA表达与蛋白水平升高 ,并显示出一定的时间与浓度依赖性。各型肾炎中TGF β1的表达均显著高于对照组 ;除IgA肾病之外的各型肾炎中AR的表达均显著高于对照组 ,AR的表达与TGF β1表达之间具有显著的相关性。结论 TGF β1相关反应性基因产物AR的表达与TGF β1的作用密切相关 。

乳腺神经内分泌癌35例临床病理分析

目的介绍并讨论乳腺神经内分泌癌的临床病理学特征。方法对35例乳腺神经内分泌癌的临床表现、组织学形态、免疫表型及预后进行研究。结果35例均为女性患者,发病年龄28～95岁（平均60.4岁）。肿块大小0.8～5cm（平均2.04cm）。组织学形态包括：实性黏附型（15例）、腺泡型（10例）、实性乳头型（5例）、细胞黏液型（2例）、小细胞/雀麦细胞癌（2例）、大细胞癌（1例）。所有病例NSE和CK阳性表达,分别有34例（97.1%）和21例（60.0%）表达Synaptophysin和chromogranin A,腋下淋巴结转移率为25.0%（5/20例）,除1例因发生肺和骨转移死亡外,其余患者均健在,随访时间2～76个月（平均32.1个月）。结论乳腺神经内分泌癌是一少见的独立病种,病理形态复杂,其生物学行为特性还需大样本较长期的随访观察。

大鼠抗Thy-1系膜增生性肾炎TGF-β1和calponin h1表达变化的初步研究

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和碱性调宁蛋白(calponin h1)在大鼠抗Thy-1系膜增生性肾炎 中的表达及其意义。方法 制备大鼠抗Thy-1系膜增生性肾肾炎模型,提取其肾组织的总蛋白和总RNA。应 用免疫组织化学ABC法、Western blot、RT-PCR等方法分别从蛋白和核酸水平检测TGF-β1和calponin h1在肾 炎模型1、3、5、7、14、21、28 d组织中的表达,研究其相互关系。结果 大鼠抗Thy-1系膜增生性肾炎中TGF-β1 的蛋白表达从7天组起明显随时间延长增强,至21 d组达高峰后回落,核酸表达差异不明显;calponin h1的少量 表达见于正常对照组,1、3、5 d组起表达明显增强,7 d组达到最高峰后开始回落,核酸表达的变化趋势则与 TGF-β1的蛋白表达变化趋势一致。结论 大鼠抗Thy-1系膜增生性肾炎组织中calponin h1表达增强,并在肾 炎病变早期呈增强趋势,后者与TGF-β1在肾炎早期的增强表达趋势相似。calponin h1可能在肾炎早期发挥抗 细胞增殖的作用。

转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞基质表达的影响

目的 通过对大鼠系膜细胞(MsC)转染人TGF-β1基因,观察该基因对MsC表达细胞外基质成分的影响。方法 采用脂质体介导法转染人TGF-β1基因至大鼠MsC,Western blot法鉴定;细胞爬片ABC免疫酶标法观察纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原、Ⅰ型胶原、层黏蛋白(LM)的表达,并对结果定量分析。结果 重组质粒pcDNA 3.0-TGF-β1成功转染至大鼠MsC,Western blot及免疫组化检测均证实TGF-β1蛋白表达增强;与正常的MsC相比,TGF-β1转染的MsC表达FN、Ⅳ型胶原增强,其差异有显著性意义;而Ⅰ型胶原、LM表达改变不明显。结论 TGF-β1可通过对大鼠MsC ECM成分表达的影响,而在肾小球硬化的发生发展过程起着重要作用。

TGFβ1对转染Smad4/Smad7基因的大鼠系膜细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响

目的 探讨Smad4 /Smad7信号蛋白在转化生长因子β1(TGFβ1)作用下对大鼠系膜细胞 (MsC)Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响。方法 经脂质体介导分别将Smad4 /Smad7基因瞬时转染体外培养的大鼠MsC ,并用免疫荧光、RT PCR和Westernblot法检测其转染成功与否 ;再用Westernblot法分别观察转基因MsC及其在TGFβ1作用下 ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达的改变。结果 与转染空载体的MsC相比较 ,转染Smad4基因的MsC ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达分别增强 1.2和 1.8倍 ,经TGFβ1作用后升高 1.8和 3.3倍 (P <0 .0 1) ;而转染Smad7基因的MsC ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达分别下降 1.4和 1.9倍 ,经TGFβ1作用后则降低 1.7和 2 .4倍 (P <0 .0 1)。 结论 TGFβ1/Smad信号通路可从正反两方面调节MsCⅠ。

DCN基因转染对大鼠肾系膜细胞生长及表型改变的影响

目的 通过观察转染DCN基因的大鼠系膜细胞 (MsC)生长及其一些表型的改变 ,为其用作细胞载体回输入大鼠肾病模型体内进行基因治疗奠定实验基础。方法 采用MTT比色法和流式细胞仪技术 ,检测该MsC株生长情况 ;Northernblot和Westernblot法检测其TGF β1mRNA、ColⅣmRNA和TGF β1蛋白表达水平 ;半定量RT PCR法检测其TIMP 2mRNA表达的改变。结果 与未转染MsC相比 ,转染DCN基因的MsC株的生长受到明显抑制 (5d时P <0 .0 5 ,6d时P <0 .0 1) ;G0 /G1期比例增加 ,S期比例降低 ,提示其生长缓慢 ;TGF β1和ColⅣmRNA表达明显降低 ,TGF β1蛋白分泌减少 ;TIMP 2mRNA表达明显下调。 结论 转染DCN基因的MsC可被用作载体开展对大鼠系膜增生性肾炎的实验治疗。

转染Smad7基因的大鼠肾小球系膜细胞对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变

目的探讨Smad7基因对大鼠肾小球系膜细胞(MsC)Ⅰ、Ⅲ型胶原(ColⅠ、ColⅢ)表达的影响,为试图运用Smad7对肾纤维化进行基因治疗提供实验依据。方法经脂质体介导将含有Smad7重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及Northern blot、Western blot法鉴定;又分别采用RT-PCR和Western blot法,检测转染阳性MsC克隆ColⅠ、ColⅢ表达改变。结果成功建立稳定高表达Smad7的阳性MsC克隆(S-22与S-26),并证实两阳性MsC克隆ColⅠ及ColⅢmRNA及蛋白的表达均被明显抑制,其中S-22克隆ColⅠ及ColⅢmRNA表达分别降低47%和56%,其蛋白表达分别降低65%和54%。结论Smad7可能通过抑制组织内ColⅠ及ColⅢ的生成而起到减轻肾纤维化进展的作用。

TGF-β1对醛糖还原酶在大鼠系膜细胞及Thy-1肾炎中表达的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF- β1)对醛糖还原酶(AR)在大鼠系膜细胞(MsC)及大鼠抗Thy 1肾小球肾炎模型 (ATG)中表达的影响。方法 采用RT PCR和Westernblot技术分别检测TGF β1刺激后体外培养大鼠系膜细胞AR的表达以 及TGF -β1和AR在ATG中的表达;应用免疫组化检测ATG中TGF -β1、AR的表达,并对染色强度进行图像分析。结果 外源 性TGF- β1作用后,大鼠系膜细胞中AR表达升高,并显示出一定的时间与剂量依赖性。ATG中,随着病程的延长,TGF -β1、AR 表达升高,对免疫组化结果进行图像分析显示,二者表达之间具有相关性(r=0.65,P<0.05)。结论 TGF -β1可以上调其相 关反应性基因AR的表达,后者可能参与了肾小球肾炎发生发展的过程。

链脲佐菌素糖尿病仓鼠心肌病变的病理变化

目的 观察链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病仓鼠机体代谢及心肌病理改变 ,建立一种理想的糖尿病心肌病变动物模型。方法 腹腔注射STZ建立糖尿病仓鼠动物模型 ,10周后电镜观察心肌超微结构 ,光镜观察心肌病理改变 ,免疫组化法检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原变化 ,同时应用生化、放免法检测血糖、糖化血清蛋白、血脂、胰岛素变化。结果 与正常对照 (NC)组仓鼠相比 ,糖尿病 (DM )组仓鼠血糖和糖化血清蛋白水平显著升高 ;血TG、CHO和LDL也明显升高 ;病程 10周的糖尿病仓鼠表现为心肌内大量糖原颗粒沉积 ,心肌局灶性炎症细胞浸润和间质淡嗜伊红物质沉积 ;NC组仓鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量为 1.92± 0 .2 7、1.11± 0 .12 ;DM组Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量分别为NC组的 2 .71和 1.6 8倍 (P <0 .0 0 1、<0 .0 1) ,且Ⅰ /Ⅲ型胶原比值也明显升高 (P <0 .0 1)。结论腹腔注射STZ可诱导稳定的糖尿病仓鼠动物模型 ;糖尿病仓鼠机体代谢和心肌病理变化与人类相似 。

醛糖还原酶抑制剂影响PDGF-BB促系膜细胞增殖作用的机制研究

目的探讨醛糖还原酶抑制剂(ARI)影响血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)促体外培养大鼠系膜细胞(MsC)增殖作用的机制。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比PDGF-BB刺激MsC生长速度与MAPK3条信号通路(ERK、JNK及p38)抑制剂及PI3K信号通路抑制剂对PDGF促MsC增殖作用的影响。用半定量RT-PCR检测醛糖还原酶抑制剂(ARI)对MsC合成内源性PDGF-B链的影响。蛋白印迹法观察ARI对PDGF引起的信号通路磷酸化的影响。结果(1)ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125及PI3K抑制剂LY294002能明显抑制PDGF对MsC的促增殖作用(P<0.05),而p38抑制剂SB203580不能抑制PDGF的促MsC增殖作用;(2)ARI在转录水平对MsC合成内源性PDGF-B链没有明显影响。(3)PDGF刺激MsC后引起ERK、JNK及PI3K/Akt信号通路的磷酸化,而ARI仅能抑制JNK及PI3K/Akt两条信号通路的磷酸化(P<0.05),对ERK信号通路的磷酸化没有明显影响。结论ARI部分抑制PDGF促MsC增殖作用可能与其影响JNK和PI3K/Akt信号通路活化有关。