雌激素对钙通道作用的研究进展

雌激素是一种类固醇激素,在体内具有广泛的生物学活性。细胞膜钙通道是介导外钙内流的主要途径,参与了细胞内的很多过程,包括细胞兴奋、增殖、分化和凋亡。大量研究表明,雌激素可通过基因组效应机制影响神经系统、心血管系统以及其他组织细胞钙通道的表达和功能,也可通过非基因组效应机制快速激活或者抑制多种不同钙通道的活性,并且多呈现一种非单调的量效关系,本文就雌激素对钙通道作用的研究进展作一综述。

成瘾性药物对大鼠脑内G蛋白耦联受体激酶5 mRNA和蛋白水平的调控

G 蛋白耦联受体激酶 5(GRK5)在G 蛋白耦联受体信号转导中起重要调节作用。本文研究了单次给予成瘾性药物吗啡、海洛因和可卡因对大鼠脑内 GRK5 mRNA 水平的调控作用,并选取吗啡为代表,观察单次或多次给予吗啡后大鼠脑内GRK5 蛋白含量的变化。结果发现: (1)单次给予吗啡(10 mg/kg)、海洛因(1 mg/kg)或可卡因(15 mg/kg)均可引起大鼠大脑顶叶皮层、颞叶皮层和海马的GRK5 mRNA水平显著上升; (2)单次或多次给予吗啡注射可以显著上调大鼠大脑皮层GRK5 蛋白含量,而多次给予吗啡显著下调丘脑 GRK5 含量。我们的结果首次证明成瘾性药物对大脑皮层、海马等脑区的 GRK5 在mRNA 水平和蛋白水平都有调控作用,提示 GRK5 可能在精神活性物质的成瘾中起作用。

钙整合素结合蛋白CIB真核表达载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

目的构建钙整合素结合蛋白(calcium-andintegrin-bindingprotein,CIB)的真核表达载体,了解它在真核细胞中的表达及定位。方法从人脑组织分离总RNA,采用RT-PCR获得CIB开放读框序列,克隆至真核表达载体pCMV-myc,构建表达带myc表达标签的真核表达载体pCMV-myc-CIB,将其转染至NIH3T3细胞中,免疫组化鉴定其在细胞中的表达及定位。结果序列分析表明克隆的CIB序列与GeneBank报道的序列一致,脂质体转染入NIH3T3细胞中,用myc抗体检测到目的蛋白myc-CIB的表达。结论pCMV-myc-CIB表达载体构建成功,并在真核细胞中得到了正确表达,CIB蛋白主要定位于细胞质中。

脐血库造血干/祖细胞的分离、保存和集落培养(英文)

目的探讨脐血库脐血分离、保存方法及造血干祖细胞的体外培养条件。方法采用建立在密度梯度离心基础上的HES分离法对脐血进行有核细胞分离、冻存及粒巨系造血祖细胞集落(CFU-GM)培养。结果离心管收集分离和四联袋采集分离的方法均可获得较高的单个核细胞量,但四联袋采集分离在回收率和浓缩程度上更为优越,且粒巨系造血祖细胞(CFU-GM)含量丰富,10%DMSO冻存液保存复苏后仍可获得较高活率和CFU-GM。结论我们建立的HES分离结合密度梯度离心分离脐血造血干祖细胞以及脐血长期冻存的方法为广泛、大规模地建立脐血库提供了基础。

临床常用β-肾上腺素受体激动剂和拮抗剂对β-arrestin2招募作用的研究

大量β-肾上腺素受体(β-adrenergic receptor,β-AR)药物被应用于心血管疾病等临床疾病的治疗,但许多常用的β-AR药物对下游β-arrestin偏向性信号通路的激活特性和作用并不清楚。本文旨在检测临床常用的β-AR药物对β-arrestin的招募作用。我们采用TANGO(transcriptional activation following arrestin translocation)方法在稳定转染四环素反式激活因子(tetracycline transactivator protein,tTA)依赖荧光素酶报告子和β-arrestin2-TEV融合基因的HEK293细胞系(HTLA细胞)中检测β-AR配体对β-arrestin2的招募情况。β-AR被其配体激活后,β-arrestin2被募集到受体的C端,随后G蛋白耦联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)融合蛋白在TEV蛋白酶裂解位点发生裂解。裂解导致tTA的释放,tTA转移到细胞核后可激活荧光素酶报告基因的转录。结果显示,非选择性β-AR激动剂肾上腺素、去甲肾上腺素和异丙肾上腺素能通过β1-AR和β2-AR招募β-arrestin2。选择性β1-AR激动剂多巴酚丁胺和得诺巴明能通过β1-AR招募β-arrestin2。选择性β2-AR激动剂沙丁胺醇和丙卡特罗能通过β2-AR招募β-arrestin2。非选择性β-AR拮抗剂阿普洛尔和吲哚洛尔能通过β1-AR招募β-arrestin2。选择性β1-AR拮抗剂塞利洛尔和贝凡洛尔能够通过β1-AR招募β-arrestin2。选择性β2-AR拮抗剂布托沙明能够通过β1-AR产生β-arrestin2招募作用。上述结果为β-AR药物的潜在作用研究提供线索,也为后续β-arrestin偏向性β-AR药物的筛选奠定研究基础。

β-arrestin2在可卡因诱导的奖赏行为中的作用

β-arrestin2是G蛋白偶联受体的负反馈调控蛋白,介导受体的脱敏,此外β-arrestin2还可以通过招募信号分子,介导G蛋白非依赖的信号传导过程。β-arrestin2广泛分布于各重要脑区,参与神经环路的信号传递。本文旨在研究β-arrestin2在可卡因诱导的小鼠奖赏行为中的作用。采用β-arrestin2基因敲除小鼠(Arrb2/),检测了β-arrestin2在不同剂量可卡因诱导的条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)形成中的作用,还检测了其在可卡因诱导的自主活动性变化中的作用。结果显示,在中等剂量(20mg/kg)和高剂量(30mg/kg)可卡因诱导的CPP实验中,Arrb2/小鼠比野生型小鼠(Arrb2+/+)表现出更强的可卡因诱导的位置偏爱,而在低剂量(10mg/kg)可卡因实验中两者无显著性差异。可卡因诱导的Arrb2/小鼠的自主活动性显著低于Arrb2+/+小鼠。以上结果提示,β-arresstin2在可卡因诱导的奖赏行为中起重要作用。