硝酸甘油对大鼠缺氧心肌细胞乙醛脱氢酶2表达的影响

目的探讨硝酸甘油(GTN)对大鼠缺氧心肌细胞凋亡的影响及其相关机制,为阐明长期使用GTN导致心脏不良事件的发病机制提供依据。方法利用心肌细胞缺氧模型,将缺氧的正常细胞作为对照组,测定GTN作用1～3d时心肌细胞的凋亡率以及乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因和蛋白的表达。结果①1、10、100μmol/L的GTN作用1d的心肌细胞凋亡均显著少于对照组(P值均<0.05),作用2、3d的细胞凋亡数均显著高于作用1d时(P值均<0.05)。由此确定GTN的作用浓度是1μmol/L,作用时间是2d。②不同浓度GTN作用1～3d,ALDH2基因表达与心肌细胞凋亡率呈负相关(r=-0.658,P=0.028)。③1μmol/LGTN作用2d时的ALDH2蛋白表达为1.35±0.16,显著低于对照组的1.66±0.22(P<0.05);作用2、3d时的ALDH2蛋白表达分别为1.35±0.16和0.33±0.27,均较作用1d时显著下降(P值均<0.05)。结论①GTN作用不同时间所起的作用不同:作用1d,为心肌保护作用;作用2～3d能引起心肌细胞凋亡增加,缺乏心肌保护作用。②GTN使用后ALDH2基因表达变化与心肌细胞凋亡呈负相关,可能与ALDH2对缺氧心肌细胞有保护作用有关。③GTN作用2～3d时缺氧心肌细胞ALDH2 mRNA和蛋白水平下调,可能与ALDH2消耗有关。

新生大鼠大脑皮质O-2A祖细胞的体外诱导分化

目的 在获取高纯度O 2A祖细胞的基础上 ,探讨O 2A祖细胞在体外分化的形态学特点。方法 采用“两次恒温摇床振荡法”和差速贴壁法 ,结合使用神经营养因子 (bFGF、PDGF AA) ,进行O 2A祖细胞体外纯化和扩增培养 ,并观察O 2A祖细胞在有血清和无血清培养条件下的分化情况 ,用免疫细胞化学鉴定分化成熟的 2型星型胶质细胞和少突胶质细胞。结果 培养的O 2A祖细胞能形成克隆球 ,具有增殖能力 ,经免疫细胞化学鉴定细胞纯度达 90 %以上。在含血清的培养基中能定向分化为 2型星形胶质细胞 ,其胞体较大 ,从胞体上伸出细长突起 ,由突起上再发出更为细小的分支 ,GFAP和A2B5抗体标记均为阳性 ;在无血清的化学条件培养基中能定向分化为少突胶质细胞 ,其胞体较小 ,突起短而细 ,相互交织呈“蜘蛛网”样 ,CNPase抗体标记阳性。结论 (1)培养的O 2A祖细胞保持定向干细胞的特性 ,具有增殖和双向分化的潜能 ;(2 )O 2A祖细胞定向分化为 2型星形胶质细胞过程中经历较长的增殖期 ,而分化为少突胶质细胞过程中则增殖期较短 ;(3)分化的 2型星形胶质细胞和少突胶质细胞在形态学和抗原表达上存在差异。

放射性脑损伤模型大鼠脑内移植超顺磁性氧化铁标记神经干细胞MRI示踪研究

目的 探讨超顺磁性氧化铁颗粒标记的神经干细胞(NSC)在放射性脑损伤大鼠模型脑内移植后,磁共振成像(MRI)示踪观察的可行性。方法 建立放射性脑损伤模型大鼠16只,4周后将磁化标记的NSC立体定向植入模型大鼠海马区。移植后1、2、4、8周行4.丌MRI干细胞示踪观察,选择T_1WI、T_2WI和梯度回波(GRE)序列。移植后1、8周处死大鼠,取脑组织冰冻切片后进行普鲁士蓝染色。结果 移植后MRI显示大鼠注射点处可见类圆形低信号影;GRE序列显示标记细胞较清晰,而T_2WI显示大鼠脑正常结构较清晰。移植后1、8周移植部位普鲁士蓝染色可见阳性细胞,与MRI结果相符。结论 MRI能够在放射性脑损伤大鼠脑内活体连续示踪观察NSC的迁移及分布情况。

转基因神经干细胞移植在缓解脑缺血性神经血管损害中的作用

目的 评价转染血管内皮生长因子 (VEGF)基因的神经干细胞脑内移植后在宿主缺血区的神经血管保护作用。方法 建立大鼠暂时性大脑中动脉梗死模型 (tMCAO)并将其随机分成 :(1)对照组 ;(2 )细胞悬液磷酸盐缓冲液 (PBS)移植组 ;(3 )神经干细胞移植组 ;(4 )转基因神经干细胞移植组 ,每组 10例。立体定向法将BrdU标记的转基因神经干细胞移植到tMCAO大鼠的纹状体缺血半暗区。移植后 2～ 12周进行神经损害严重程度评分 (NSS)并与其他 3组比较。移植后12周 ,免疫荧光染色观察转基因神经干细胞在脑内的分化、迁徙情况 ;免疫组织化学染色观察各组移植区毛细血管结构 ,并计每例动物以移植点为中心的一个 10 0倍视野下内皮细胞数。结果 移植后 2～ 12周 (4 )组NSS评分均数分别为 5 .8、5 .0、4.6、4.0、4.0、3 .8,均低于其他 3组。其中第 8周显著低于 (1)、(2 )组 (P =0 .0 0 8) ,第 12周显著低于 (1)、(2 )、(3 )组 (P =0 .0 0 0 )。移植后 12周 ,转基因神经干细胞在宿主脑内存活、迁徙 ,部分分化成神经元。转基因神经干细胞移植组移植区毛细血管结构相对完整 ,血管内皮细胞数显著多于其他 3组。结论 转染VEGF基因的神经干细胞移植后对宿主局部血管和神经结构具有保护作用。

静脉注射骨髓基质干细胞对放射性脑损伤模型大鼠认知障碍的影响

目的观察静脉注射骨髓基质干细胞（MSCs）对放射性脑损伤模型大鼠认知功能的影响。方法离体分离、培养、增殖成年大鼠MSCs。采用6 MV X线对8～10周龄雌性SD大鼠做全脑照射，照射剂量20 Gy。照后1周采用尾静脉注射Hoechst33342荧光标记的MSCs（4×10^6），注射后4、8周观察大鼠认知功能变化，应用免疫荧光技术检测大鼠脑内Hoechst33342标记细胞及分化的功能细胞。结果与正常对照组相比，模型组大鼠的学习记忆能力明显受损（P＜0．01），静脉注射后4、8周，照射组大鼠认知功能明显改善（P＜0．05）。结论静脉注射MSCs可显著改善全脑照射大鼠认知功能，MSCs可在放射性脑损伤大鼠脑组织中存活和分化。

转染干扰素-γ诱导蛋白-10基因构建树突状细胞前列腺癌瘤苗及其抗肿瘤免疫作用的检测

目的 将小鼠前列腺癌细胞株RM-1裂解产物加载树突状细胞(DC)后,转染干扰素-γ诱导蛋白-10(IP-10)基因构建DC瘤苗,探讨该瘤苗对小鼠抗肿瘤免疫反应的诱导作用。方法将RM-1细胞的裂解产物作为肿瘤抗原加载小鼠骨髓来源的DC,并通过脂质体法转染IP-10基因,构建DC瘤苗;检测DC瘤苗的抗前列腺癌免疫治疗作用和免疫保护作用。结果 转染DC强表达IP-10,其上清对淋巴细胞有较强的趋化作用;构建的DC瘤苗能诱导特异性抗前列腺癌免疫反应,经瘤苗处理的荷瘤小鼠瘤体生长减慢,存活期延长;瘤苗还具有明显的免疫保护作用。结论构建的前列腺癌DC瘤苗在体内能有效诱导抗肿瘤免疫反应和免疫保护功能。