补肾宁心方对小鼠绝经后骨质疏松的选择性作用

目的:探讨补肾宁心方防治绝经后骨质疏松的作用。方法:建立BALB/c小鼠绝经后骨质疏松模型,灌服补肾宁心方浓缩液(简称补肾方),并以17β-雌二醇为阳性对照(简称E2组),以生理盐水为阴性对照(简称模型组)。12周后处死,取血测Th1/Th2型细胞因子;取椎骨(L3-4)和左股骨测骨密度(BMD);取右股骨行骨组织形态计量分析;胫骨提取总RNA,半定量RT-PCR分析护骨素(OPG)的mR-NA表达。计算子宫对体重的比值,并行子宫组织切片观察。结果:补肾方组的IFNγ-水平较模型组明显升高(P<0.01);而IL-4水平低于模型组(P<0.05)。补肾方组与E2组均可改善小鼠的BMD,增加骨小梁面积,使OPG mRNA表达增加。补肾方组的子宫与模型组比较无显著性差异。结论:补肾方能够选择性地防治绝经后骨质疏松,对子宫无或仅有轻微的刺激作用。其机制与调节Th1/Th2的偏离及提高OPG的表达,抑制破骨细胞的活性有关。

人早孕滋养细胞分泌趋化因子CXCL16促进自身增殖和侵袭

本文探讨趋化因子CXCL16在细胞滋养细胞的分泌特征,以及其促进滋养细胞增殖和侵袭的生物学作用。采用原代培养人早孕滋养细胞,ELISA法检测不同种植密度培养12、24、36、48、60、 72、100h上清液中CXCL16分泌水平;[3H]TdR掺入法分析外源性CXCL16刺激后滋养细胞的增殖效应;matrigel侵袭试验分析外源性CXCL16处理后滋养细胞的侵袭性。结果表明原代培养的人早孕滋养细胞可持续分泌趋化因子CXCL16,在最初培养的48h分泌旺盛,培养至100h仍可见CX- CL16分泌;rhCXCL16浓度达100ng/ml时能够明显促进体外培养的滋养细胞增殖效应:rhCXCL16 浓度达10ng/ml时能明显促进滋养细胞的侵袭能力。实验证明人早孕滋养细胞分泌趋化因子CX- CL16,并以自分泌方式促进滋养细胞的增殖和侵袭,可能在胎盘形成和绒毛外滋养细胞的入侵中发挥重要作用。

人早孕蜕膜基质细胞及免疫活性细胞趋化因子受体CXCR6的表达

目的分析人早孕期蜕膜基质细胞趋化因子配基受体对CXCL16／CXCR6的表达及免疫活性细胞趋化因子受体CXCR6的表达,以探讨CXCL16／CXCR6在蜕膜免疫活性细胞募集中的可能规律。方法收集早孕期蜕膜组织,分离蜕膜基质细胞和免疫细胞,分别采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术分析蜕膜基质细胞CXCL16和CXCR6的表达;流式细胞术分析蜕膜CD56^+CD16^- NK细胞、CD56^+CD16^+NK细胞、NKT细胞、T细胞、γδT细胞、单核细胞CXCR6的表达。结果人早孕蜕膜基质细胞高水平转录趋化因子受体CXCR6,低水平转录其配体CXCL16,但CXCL16和CXCR6在蛋白水平的表达偏低。早孕蜕膜γδT细胞CXCR6阳性率为87．29％;CD14^+单核细胞CXCR6阳性率为47．71％;NKT细胞CXCR6阳性率为44．14％;T细胞CXCR6表达率为32．91％;而蜕膜两种NK细胞 (CD56^+CD16^-、CD56^+CD16^+)几乎不表达CXCR6,,结论人γδT细胞、单核细胞、NKT细胞、T细胞可能通过表达趋化因子受体CXCR6被募集到蜕膜局部并驻留,从而参与早孕期母胎界面的免疫调节。

调节性T细胞源性IL-10与TGF-β1对破骨细胞分化及骨吸收的抑制作用

目的探讨调节性T细胞源性白细胞介素10（IL-10）与转化生长因子β1（TGF—β1）对人胚骨髓细胞来源的破骨细胞分化与骨吸收的调控作用。方法自孕13～16周药物流产胚胎获取人骨髓细胞，分别在不同浓度的IL-10与TGF-β1条件下，采用TRAP染色观察破骨细胞分化，甲苯胺兰染色骨吸收陷窝观察其骨吸收。结果当用IL-10或TGF—β1处理时，随着IL-10或TGF-β1浓度增加至10ng／ml，显示对破骨细胞分化与骨吸收功能的抑制作用，并呈明显的剂量依赖性。将IL-10与TGF—β1联合处理时，则显示出对破骨细胞分化与骨吸收功能明显的协同抑制作用。结论调节性T细胞源性细胞因子IL-10与TGF-β1对破骨细胞分化与骨吸收功能具有抑制作用。

脱氢表雄酮对小鼠成骨细胞增殖周期与凋亡的影响

目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)对小鼠成骨细胞(OB)增殖周期与凋亡的调控作用。方法颅骨酶解法分离OB和体外培养OB,体外模拟雌激素撤退现象,分为对照组、10^(-10)mol/L E_2组、10^(-7)mol/L DHEA组共3组,流式细胞仪分析DNA含量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡,透射电镜观察OB超微结构。结果DNA含量分析显示,DHEA组的S期和G_2/M期细胞百分率比对照组明显增加,细胞增殖指数显著增加(P＜0.01)；DHEA和E_2对OB还具有显著的抗凋亡作用(P＜0.01或P＜0.05)；透射电镜可见经10^(-7)mol/L DHEA诱导后的OB细胞器明显增多,内质网扩张,线粒体丰富等形态学改变。结论DHEA在体外可直接促进小鼠OB的增殖并抑制其凋亡。

早孕滋养细胞膜型及可溶性趋化因子CXCL16表达调控

目的探讨趋化因子CXCL16在人早孕滋养细胞表达和释放的调控机制。方法原代培养人早孕滋养细胞，实时定量RT—PCR、免疫化学和ELISA方法分析CXCL16的表达和分泌；ELISA方法分析细胞因子IFN-γ、TNF—α、IL-4刺激前后滋养细胞CXCL16的表达和分泌水平；ELISA方法分析ADAMIO治疗前后滋养细胞CXCL16的表达及分泌水平。结果滋养细胞表达并分泌趋化因子CXCL16；IFN-γ治疗后滋养细胞表达和分泌CXCL16水平均显著上升（P〈0．01），但TNF-α和IL-4并不影响CXCL16的表达或分泌；ADAM10可以加速CXCL16自滋养细胞的脱落，但并不上调CXCL16的合成。结论IFN-γ和ADAM10参与调控母胎界面滋养细胞趋化因子CXCL16的合成和分泌。