抗原表位预测工具的研究与发展现状

适应性免疫在抗原识别和人体免疫过程中起到十分重要的作用。本文综述了抗原表位预测工具的研究进展及其在疫苗设计和免疫治疗策略中的应用,突出了其重要性。通过分析B细胞和T细胞抗原表位的识别机制,本文阐释了表位的种类及其在免疫反应中的作用。进一步详细讨论了B细胞和T细胞抗原表位的预测工具,特别是它们如何利用支持向量机、随机森林、深度学习等不同算法来解析表位信息,并介绍了当前该领域的最新发展现状。最后,本文对抗原表位预测技术的未来发展趋势进行了展望。

骨桥蛋白反义寡核苷酸抑制胃癌细胞MKN28粘附侵袭的实验研究

目的:骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种分泌型、粘附性的糖基化磷蛋白,许多肿瘤在发生发展过程中均伴有OPN的表达,而表达OPN的肿瘤也更易表现出侵袭、转移的倾向。本研究将观察OPN反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)抑制高分化人胃癌细胞株MKN28粘附侵袭的作用。方法:用脂质体将骨桥蛋白ASODN转染胃癌细胞MKN28,实验分3组,对照组、随机序列寡核苷酸(random oligonucleotide,rODN)组和ASODN组。通过荧光定量RT-PCR、免疫组化方法、粘附细胞计数法、穿透小室聚碳酸酯膜侵袭实验分别测定骨桥蛋白mRNA和细胞表面骨桥蛋白的蛋白表达及癌细胞粘附力、侵袭力的变化。结果:转染后ASODN组骨桥蛋白mRNA的相对定量比值较对照组显著降低(1.83±0.10vs.3.32±0.16,P<0.05);免疫组化检测骨桥蛋白表达结果显示,转染后荧光强度明显降低,细胞表面骨桥蛋白表达下降(P<0.01);转染后ASODN组粘附力和侵袭力均较对照组显著下降(粘附细胞百分数为20.50±4.58vs.41.50±8.40,穿透聚碳酸酯膜细胞数为21.80±6.90vs.42.00±9.40,P均小于0.01)。而rODN组上述各指标较对照组无明显变化。结论:骨桥蛋白的表达与粘附侵袭能力密切相关,反义寡核苷酸能有效抑制胃癌细胞株MKN28细胞骨桥蛋白基因的表达,从而抑制蛋白质的合成,降低其粘附侵袭能力。

线粒体动力学在临床常见机体高能量代谢系统病变中作用的研究进展

线粒体作为机体内主要的能量提供细胞器,自身主要通过线粒体动力学,即融合和分裂过程以及线粒体自噬来维持平衡,功能异常的线粒体堆积会导致细胞凋亡和对能量代谢高度需求的组织器官损害。本文主要阐述线粒体动力学及其改变对于临床常见能量代谢相关疾病的影响。

硬皮病伴发肺间质病变小鼠模型的建立及发病机制研究

目的建立硬皮病伴发肺间质病变(systemic scleroderma associated with interstitial lung disease,SscILD)的小鼠动物模型,并初步探讨其发病机制。方法造模组以0.4 mg/mL浓度博来霉素(bleomycin,BLM)背部中央区域局部皮下注射0.1 mL/天,连续28天;对照组以PBS缓冲液(pH=7.4)相同方法处理;连续观察2组小鼠大体形态变化,以HE和Masson染色明确模型的可靠性,通过检测羟脯氨酸了解纤维化程度,并通过免疫组化检测TGF-β1、α-SMA、collagen-1、MMP-9、CD8+T细胞、CD68+巨噬细胞、IL-23的表述。结果造模组小鼠皮肤显著硬化,镜下真皮层显著增厚,胶原纤维束增多,排列紧密,胶原含量升高,符合硬皮病表现;并且肺组织出现明显炎症和纤维化,胶原含量显著升高,免疫组化检测发现TGF-β1、collagen-1、MMP-9、α-SMA、CD8+T细胞、CD68+巨噬细胞、IL-23的表达均显著性增高(P均<0.05)。结论 C3H/He小鼠连续28天皮下注射0.4 mg/mL的BLM能诱导Ssc-ILD动物模型,出现符合Ssc标准的皮肤改变,肺部出现明显的炎症和纤维化,与TGF-β1升高密切相关,并伴随α-SMA、collagen-1、MMP-9、CD8+T细胞、CD68+巨噬细胞、IL-23增多。

活细胞实时成像技术研究抗坏血酸(AA)协同砷剂抗人骨肉瘤MG-63的体外疗效

目的研究抗坏血酸(ascorbic acid,AA)和三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)抗人骨肉瘤细胞MG-63的体外疗效。方法以MG-63细胞为体外模型,用62.5μmol/L AA与1μmol/L As2O3单独或联合处理细胞,利用新型连续活细胞图像采集和分析平台(continuous live cell imaging and analysis platform,Cell IQ)实时观察细胞的生长情况和形态学的变化。结果 1μmol/L As2O3和62.5μmol/L AA单独处理都可抑制MG-63细胞的生长并诱导细胞死亡。1μmol/L As2O3和62.5μmol/L AA联合处理细胞较单独处理组细胞抑制效果更明显。结论 AA和AS2O3抗人骨肉瘤细胞Mg-63可起到协同作用,这一结果为临床治疗骨肉瘤提供了新的思路和实验依据。

携带TRAIL的溶瘤腺病毒治疗三阴性乳腺癌的研究

目的:构建携带肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-relatedapoptosis inducing ligand,TRAIL)基因的溶瘤腺病毒p55-hTERT-HRE-TRAIL,评估该病毒在体外和体内对三阴性乳腺癌的杀伤能力。方法:将质粒p55-hTERTHRE与pPE3-TRAIL通过Lipofectamine 2000共转染至人胚肾293细胞,获得溶瘤腺病毒p55-hTERT-HRE-TRAIL;采用病毒体外增殖实验观察乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人正常乳腺细胞株MCF-10A中的增殖情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法比较不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的病毒对两种细胞的抑制效应;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测病毒感染细胞后上清液中TRAIL的含量,采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测细胞内TRAIL蛋白的表达。建立三阴性乳腺癌的原位成瘤模型及左心室注射模拟转移瘤裸鼠模型,应用"活体内光学成像系统"动态观察肿瘤的生长及转移情况。结果:p55-hTERT-HRE-TRAIL感染乳腺癌细胞株后表现出强大的增殖、复制能力,而在人正常乳腺细胞株内增殖并不明显;很低浓度的p55-hTERT-HRE-TRAIL就对乳腺癌细胞产生明显的杀伤效应,而对正常乳腺细胞没有明显的杀伤作用;p55-hTERT-HRE-TRAIL感染乳腺癌细胞后,TRAIL蛋白的表达明显增多,而感染正常乳腺细胞后表达的TRAIL维持在较低的水平。乳腺癌原位成瘤模型中,空白对照组的光子数多于其他各组,肿瘤体积大于其他各组(P<0.05)。左心室注射模拟转移瘤模型中,对照组活体内光学成像与TRAIL治疗组差异有统计学意义,TRAIL治疗组的生存天数延长(P<0.05)。结论:成功构建高滴度的溶瘤腺病毒p55-hTERt-HRE-TRAIL,该病毒在乳腺癌细胞中具有特异性增殖并杀伤肿瘤细胞的能力。

诱导骨髓基质细胞表达神经细胞标记物Nestin，NSE和GFAP：脑源性神经节苷脂定向诱导细胞分化作用的研究

目的：研究脑源性神经节苷脂诱导成年大鼠骨髓基质细胞定向分化为神经前体细胞的作用。方法：成年大鼠骨髓基质细胞传 代纯化后，分别在无血清、无外源性生长因子、含2%B27的 Neurobasal-A 培养基及含20%胎牛血清的 DMEM 培养基中添加脑源性 神经节苷脂作为诱导物，观察细胞的形态变化。结果：在无血清、无外源性生长因子、含2%1327的 Neurobasal-A 培养基中，脑源性神 经节苷脂能诱导骨髓基质细胞定向分化为神经前体细胞，其形态发生显著变化，胞体逐渐变小、折光性增强，突起逐渐增多、延长，部 分细胞间可见突起连接、细胞核和核仁；诱导第5 d 免疫细胞荧光染色显示，神经前体细胞标记物Nestin染色阳性，同时部分细胞可 见神经元特异性标记物 NSE 及星形胶质细胞标记物 GFAP 染色阳性，而少突胶质细胞标记物 Nogo-A 染色阴性。在含20%胎牛血 清的 DMEM(高糖)培养基中，脑源性神经节苷脂的这种诱导、分化作用明显被抑制，表现为细胞形态变化不明显，Nestin、NSE 及 GFAP 染色均为阴性。两组对照组细胞形态无变化、上述染色均为阴性。结论：脑源性神经节苷脂具有诱导骨髓基质细胞成为神经 前体细胞的作用，这种作用不需要外源性生长因子存在，血清可抑制这种作用，脑源性神经节苷脂在成体干细胞可塑性研究中有重要 价值。

肝细胞癌仑伐替尼耐药机制与新治疗策略

仑伐替尼是继索拉非尼之后FDA首次批准的晚期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)一线用药,临床研究显示其疗效与索拉非尼相当,并在某些方面更具优势。然而,伴随仑伐替尼的大规模使用,近年来其临床耐药问题也引起高度关注。表皮生长因子受体(EGFR)激活、成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)过表达及HCC中肿瘤干细胞出现等为仑伐替尼耐药的重要原因。面对仑伐替尼耐药,一些创新性研究也取得了积极进展,如仑伐替尼联合免疫检查点抑制剂经临床试验证实具有良好疗效,成为新兴的HCC治疗策略。本文总结了近年关于仑伐替尼耐药机制及创新性应对策略的研究成果,为HCC患者进行仑伐替尼治疗提供新的参考。

体外诱导大鼠骨髓基质细胞向心肌细胞的分化

目的 通过体外诱导研究骨髓基质细胞 (MSC)向心肌样细胞的分化和心肌细胞特异性标志的表达。方法 抽取雄性SD大鼠骨髓 ,进行体外培养和连续传代 ,获得较纯的MSC。采用第 8代的MSC ,以去甲基化药物 5 氮杂胞苷进行体外诱导 ,相差显微镜下观察其形态变化 ,通过流式细胞仪 (FACS)分析细胞形态比例 ,以免疫组化方法鉴定心肌特征性蛋白Desmin和肌钙蛋白T(cTnT)表达 ,并通过RT PCR鉴定心肌特异因子基因的表达。结果 诱导前MSC多呈扁平多突起形态 ,诱导后形态发生变化 ,10d细胞呈长梭形 ,2 0d后细胞之间形成连接 ,排列方向渐趋一致 ,1月时出现肌管样结构。FACS检测发现诱导后MSC形态构成发生变化 ,以形态较小细胞为主。免疫组化检测Desmin阳性比例近 35 % ,有cTnT免疫荧光阳性细胞出现 ,约占 10 %。RT PCR显示诱导后MSC后有GATA 4、ANP和a MHC基因表达。结论 成体中的MSC在一定诱导条件下可以表现心肌样特征 。

更年宁心胶囊与戊酸雌二醇对更年期大鼠脾细胞凋亡基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的比较更年宁心胶囊与戊酸雌二醇对更年期大鼠脾细胞凋亡基因 Bcl-2、Bax 的表达。方法 30只12月龄 SD 雌性大鼠随机分为3组:更年组(每日每只予蒸馏水灌胃1 ml),雌激素组(戊酸雌二醇800μg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃),中药组(更年宁心胶囊2.5g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃)。3个月后颈动脉放血处死。放射免疫法测定血清雌二醇(E_2)水平,Annexin V-FTTC/PI 双染色流式细胞仪测定脾细胞凋亡率,RT-PCR 技术检测脾细胞凋亡基因 Bcl-2、Bax 表达。结果雌激素组血清 E_2水平明显高于中药组与更年组,而脾细胞抗凋亡基因Bcl-2表达明显低于中药组与更年组。结论与雌激素组比较,中药组增加了脾细胞抗凋亡基因 Bcl-2表达,提示对淋巴细胞凋亡可能具有保护作用。凋亡相关基因的表达受到体内雌二醇浓度的影响。

选择性COX-2抑制剂塞来昔布抑制B细胞淋巴瘤细胞株MDR-1及Bcl-2的mRNA表达并增强表柔比星的抗肿瘤作用

背景与目的:部分非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)具有高表达环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的特征,而后者与P-糖蛋白及Bcl-2表达相关,可能导致NHL对化疗耐药。本研究旨在探讨B细胞淋巴瘤细胞株中COX-2的表达以及选择性COX-2抑制剂塞来昔布增强淋巴瘤细胞对表柔比星抗肿瘤效应的敏感性及其可能机制。方法:用荧光定量PCR(q RT-PCR)及蛋白[质]印迹法(Western blot)分别检测Raji、Jeko-1和Namalwa等淋巴瘤细胞株以及正常人外周血B细胞的COX-2表达;以梯度浓度的塞来昔布作用于淋巴瘤细胞株,CCK-8方法检测细胞增殖的抑制程度,q RT-PCR检测各细胞株MDR-1 mRNA及Bcl-2 mRNA表达的变化;表柔比星单独或联合不同浓度的塞来昔布处理Raji细胞株72 h后,CCK-8方法分析塞来昔布对表柔比星的增敏作用。结果:各淋巴瘤细胞株及正常对照外周血B细胞均不表达COX-2。塞来昔布单药即可对各淋巴瘤细胞株产生程度不同的抗增殖效应;随着塞来昔布作用浓度的增加,除Jeko-1细胞不表达MDR-1外,其余细胞株MDR-1 mRNA及Bcl-2 mRNA表达水平逐渐下降;塞来昔布明显增强表柔比星对Raji细胞的抗肿瘤活性,两者之间具有协同作用。结论:选择性COX-2抑制剂塞来昔布下调B细胞淋巴瘤细胞株的MDR-1 mRNA及Bcl-2 mRNA水平,并且增强表柔比星对淋巴瘤细胞的抗肿瘤效应。

慢性阻塞性肺疾病激素不敏感与糖皮质激素受体核内转移的相关性

目的 研究慢性阻塞性肺疾病 （chronic obstructive pulmonary disease,COPD）对糖皮质激素不敏感是否与糖皮质激素受体 （glucocorticoids receptor,GRα）的核内转移有关。方法 将来自12例健康人、15例轻中度哮喘患者和15例COPD患者的人外周血单个核细胞 （peripheral blood molecule cells,PBMC）进行体外培养。ELISA方法检测其IL-8蛋白质水平,并计算地塞米松 （Dex）半抑制浓度。PBMC在Dex中培养0.5-6 h,通过Western blot检测GRα蛋白质水平,GRα的核内转移则通过免疫荧光和共聚焦显微镜来观测和分析评估。结果 COPD患者PBMC较轻中度哮喘患者和健康志愿者对Dex相对不敏感。Dex半抑制率 （IC50Dex）与糖皮质激素受体GRα核内转移呈负相关 （r=-0.54,P=0.000 8）。Dex可诱导增加各组PBMC中的总GRα,但GRα胞内分布各组间存在差异。Dex可明显增加健康人及哮喘患者核内的GRα,但并未增加COPD患者核内GRα。健康人及哮喘患者的PBMC中,Dex预处理能显著抑制TNF-α诱导的IL-8分泌,而在COPD患者的PBMC中这种抑制作用不明显。结论 COPD对糖皮质激素的不敏感与GRα核内转移有关。GRα核内转移受抑制可能是造成糖皮质激素在COPD患者中发挥抑制炎性作用欠佳的原因之一。

肺泡巨噬细胞亚型与急性肺损伤

巨噬细胞是机体固有免疫的重要组成部分,其亚型(M1和M2)在特异性免疫应答的诱导与调节以及疾病的发展和恢复中起关键作用。急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是严重的呼吸系统疾病。在ALI中,M1增加并分泌促炎细胞因子,在抵御病原入侵的同时也对肺部产生了急性损伤作用。M2可根据诱导因素的不同及功能的差异再细分为M2a、M2b、M2c等亚型,其中M2a起促进损伤修复的作用,M2b和M2c主要起免疫调节和免疫抑制的作用,M2c也可促进组织修复,有利于肺部损伤组织的愈合。M1与M2可以相互转化。在ALI的病程中,M1和M2需要保持平衡才能有效地清除病原物质,促进损伤的修复,而平衡的失调会导致ALI恶化,甚至进展为ARDS。本文主要针对巨噬细胞各亚型的特点及其与ALI的关系,M1和M2各自的极化和相互转化以及影响各亚型在不同时期平衡的因素作一综述。

戊酸雌二醇对更年期大鼠脾细胞凋亡及卵巢功能的作用

目的了解戊酸雌二醇(E2)对更年期大鼠脾细胞凋亡的作用并观察卵巢组织形态学变化。方法SD雌性大鼠30只分为青年组(2.5月龄)、更年组(12月龄)、雌激素组(12月龄)3组。青年组、更年组均予蒸馏水1ml/d灌胃,雌激素组予戊酸E2800μg.kg-1.d-1灌胃。3个月后颈动脉放血处死。放射免疫法测定血清E2水平,AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪测定脾细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测相关凋亡基因Bcl-2、Bax的表达。光镜下对各组双卵巢切片进行组织形态学观察,IMS细胞自动图像分析系统对卵巢黄体数(个)、卵巢最大纵切面面积进行计量分析。结果更年组大鼠血清E2水平明显低于青年组而脾细胞凋亡率明显高于青年组,这与其促凋亡基因Bax表达明显升高有关。雌激素组血E2水平明显高于青年组和更年组,其脾细胞凋亡率也明显高于青年组,这与其抗凋亡基因Bcl-2表达降低及Bax表达升高有关。雌激素组抗凋亡基因Bcl-2表达也明显低于更年组。更年组与雌激素组都显示卵巢纵切面积缩小、黄体计数少等功能衰退表现。结论更年期大鼠脾细胞凋亡的增龄性改变与血清E2水平负相关;本研究中E2治疗未能逆转更年期大鼠脾细胞凋亡的增龄性变化,这与外源性雌激素导致的超生理浓度的E2水平有关。过高的E2浓度不能改善更年期大鼠衰退的卵巢功能。实验显示衰老与性腺功能衰退密切相关。

流式细胞磁珠微阵列法检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义

目的探讨流式细胞磁珠微阵列法（cytometric beads array,CBA）检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义。方法纳入慢性持续期哮喘40例,急性发作期哮喘22例,健康人18例。抽取外周血2 mL,采用CAB法检测外周血清中细胞因子水平,并分析各细胞因子特征及与临床数据的相关性。全自动血细胞及生化仪检测血常规,C反应蛋白和降钙素原。结果定制含7种细胞因子微球（分别为IL-5,IL-6,IL-10,IL-13,IL-17,TNF-α,IFN-γ）的CBA试剂盒。与健康人相比,7种细胞因子在慢性持续期哮喘无明显改变。急性发作期哮喘细胞因子升高分为5种亚群,分别为IL-6升高型（22.8%）、IL-6/TNF-α双高型（13.6%）、IL-5升高型（31.8%）、IL-17升高型（占13.6%）及细胞因子正常型（占18.2%）。其中,IL-6、TNF-α明显升高,较健康人分别升高了6.28-12倍和17.3倍。IL-6升高型、IL-6/TNF-α升高型与白细胞及C反应蛋白呈正相关（R2=0.63,R2=0.67;P〈0.05）。结论 CBA法可快速检测哮喘血清标本的多种细胞因子水平,细胞因子在慢性持续期无明显升高,但IL-6、TNF-α、WBC和CRP的综合指标有助于判断由细菌感染诱发的急性加重,并快速指导抗生素的使用。

诱导型一氧化氮合酶与移植血管平滑肌细胞增生的关系

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)与移植血管平滑肌细胞增生的关系。方法 新西兰大白兔 15只随机分成 3组 ,建立双侧颈动脉间置移植颈外静脉的动物模型。高剂量组每日喂食L 精氨酸 (L Arg) 2 5 0mg/kg ,低剂量组每日喂食L Arg 12 5mg/kg ;对照组不喂食L Arg ,持续 2周。检测血浆和组织匀浆一氧化氮(NO)水平 ,移植血管iNOSmRNA表达。观察术后 3和 6周移植血管平滑肌细胞增生。结果 1.iNOS活性 :(1)血浆NO水平 :实验组血浆NO水平显著高于对照组 ,高剂量组血浆NO水平高于低剂量组 ;(2 )组织匀浆一氧化氮合酶 (NOS)活性 :实验组组织匀浆NOS活性显著高于对照组 ;(3)组织匀浆iNOSmRNA表达 :术后 3周实验组iNOSmRNA表达 ,对照组无表达 ;术后 6周实验组iNOSmRNA表达高于对照组 ,高剂量组高于低剂量组。 2 .移植血管平滑肌细胞形态学变化 :(1)SMA免疫组化染色 :实验组移植血管平滑肌细胞厚度低于对照组 ;术后 6周低剂量组移植血管平滑肌细胞厚度低于高剂量组 ;(2 )PCNA免疫组化染色 :术后 3周实验组平滑肌细胞增殖低于对照组 ;术后 6周低剂量组平滑肌细胞增殖低于对照组和高剂量组。结论 iNOS表达致体内NO水平增高可抑制移植血管平滑肌细胞增生 ;

肾动脉多普勒超声检查在评价移植肾功能中的作用

目的:通过超声检查移植肾肾动脉的血流供应情况,评价肾动脉多普勒超声检查用于诊断移植肾失功能的临床价值。方法:本研究共入组107例肾移植患者,平均年龄(38.8±1.6)岁;其中68例为新近肾移植手术患者,39例为长期随访患者。通过彩色多普勒超声测量移植肾主肾动脉、段间动脉、叶间动脉的收缩期峰值流速(PSV)和舒张末期流速(EDV)以及阻力指数(RI)。结果:肾脏段间动脉和叶间动脉的血液流变学改变与肾脏功能的关系较为密切。主肾动脉、肾脏段间动脉和叶间动脉的PSV与内生肌酐清除率的相关指数r分别为0.072(P>0.05)、0.224(P=0.014)、0.250(P=0.006)。主肾动脉、肾脏段间动脉和叶间动脉的RI与内生肌酐清除率的相关指数r分别为-0.398(P<0.001)、-0.400(P<0.001)、-0.436(P<0.001)。主肾动脉、肾脏段间动脉和叶间动脉的EDV与内生肌酐清除率的相关指数r分别为-0.446(P<0.001)、0.659(P<0.001)、0.529(P<0.001)。以上结果提示,舒张期肾动脉血流的维持对肾脏功能有重要意义。进一步联合肾穿刺检查结果发现,移植肾内动脉RI升高和EDV降低是慢性移植物肾病和血管炎性排异反应的特征性表现。结论:肾动脉多普勒超声检查能有效地检测移植肾脏的血流改变,是临床肾移植中的重要辅助诊断工具。

黏着斑激酶与肿瘤

黏着斑激酶是一种非受体酪氨酸激酶,通过多种信号途径在细胞周期调控、生长调节、黏附、细胞骨架组装、运动、生存等方面发挥重要作用。研究发现,黏着斑激酶在多种肿瘤中高表达,参与肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等。黏着斑激酶已成为当前肿瘤研究热点,有可能成为肿瘤治疗的新靶点。

肝癌MHCC97H细胞肝细胞生长因子(HGF)/c-Met通路激活对血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究肝癌MHCC97H细胞中肝细胞生长因子(HGF)诱导血管内皮生长因子(VEGF)表达过程中的转录因子Sp1的活性。方法:将MHCC97H细胞分为对照组、HGF组、光辉霉素组,分别用RT-PCR及Western blot分析与VEGF mRNA、蛋白质表达及Sp1水平、磷酸化Sp1水平变化以及应用Sp1阻断剂光辉霉素后上述目标蛋白的变化情况。结果:外源性HGF60ng·mL-1孵育15min、16h后分别可以使MHCC97H细胞的VEGF mRNA及其蛋白质的表达明显提高(P<0.01)。这一过程中Sp1水平无明显变化(P>0.05)。进一步分析发现磷酸化Sp1水平明显升高(P<0.01)。用Sp1抑制剂光辉霉素预先处理MHCC97H细胞1h后,再加入HGF 60ng·mL-1 VEGFmRNA及其随后蛋白质表达均受到抑制(P<0.01)。结论:HGF诱导MHCC97H肝癌细胞VEGF表达是通过增强Sp1磷酸化实现的。