肝癌TACE抵抗的预测及后续治疗研究进展

肝动脉化疗栓塞(TACE)是中期肝细胞癌(HCC)的标准治疗方案,部分患者无法在重复的TACE疗程中获益,这种状况被称为“TACE抵抗”。TACE抵抗发生的原因尚未完全阐明,TACE治疗后肿瘤缺氧环境诱导的TP53突变是其可能的机制。基于肿瘤影像学特征、肿瘤标志物、放射组学特征和基因组数据的多个预测模型被提出,旨在早期识别TACE抵抗状态。此外,血清微小RNA、蛋白质和炎症因子也是TACE抵抗潜在的预测标志物。以索拉非尼为代表的靶向治疗是TACE抵抗后首选的替代方案,靶向治疗联合免疫检查点抑制剂可以进一步改善预后;肝癌局部治疗,包括DEB-TACE、B-TACE、SBRT、TARE、125I粒子放射治疗及HAIC也被证明在部分TACE抵抗患者中有效。本文就TACE抵抗预测模型和发生TACE抵抗的后续治疗研究进展作一综述。

肝癌介入治疗少见而严重的并发症研究

目的 研究肝动脉灌注化疗栓塞术 (transcatheter arterial chemoemblization,TACE)的少见并发症。方法 本文回顾性分析了复旦大学附属中山医院肝癌研究所 70 0例肝癌介入治疗中的少见并发症。结果 70 0例中共发生介入术后肝癌自发破裂 3例 ;十二指肠球部穿孔 1例 ;肝脓疡 2例 ;肺动脉栓塞 1例 ;肝动脉闭塞 2 0例 (其中15例在第 3次以后的肝动脉造影时发现 ,4例在第 2次介入治疗时发现 ,1例在第 1次介入治疗时发生 ) ;本组未发生不可逆性肝肾功能衰竭致死亡。结论 尽管介入治疗的严重副反应不多 。

热休克蛋白27在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达及机制研究

利用不同转移潜能肝癌细胞系探讨热休克蛋白27(HSP27)参与肝癌细胞转移潜能形成的可能分子机制.细胞免疫荧光技术、RT-PCR和免疫印迹技术显示,HSP27在转移潜能不同的肝癌细胞Hep3B、MHCC97L和MHCC97H中定位于细胞浆,亦可见于细胞核,HSP27 mRNA和蛋白质的表达水平与肝癌细胞转移潜能呈正相关.高转移潜能肝癌细胞系MHCC97H的HSP27 RNA干扰试验结果显示,HSP27 RNA干扰后MHCC97H的侵袭(MHCC97H组:21.36±2.92;对照RNAi组:19.88±2.23;RNAi组:11.40±2.05)、运动能力(MHCC97H组:26.35±3.29;对照RNAi组:24.43±3.17;RNAi组:10.92±2.27)明显减弱,细胞凋亡显著增加(MHCC97H组:15.12%;对照RNAi组:17.56%;RNAi组:27.64%).同时进行信号转导基因芯片检测发现,HSP27干扰后核因子κB(NF-κB)通路抑制,并且免疫印迹显示细胞核内活化的NF-κBp65减少,细胞内磷酸化IκBα降低.另外,免疫共沉淀检测发现,在肝癌细胞内HSP27可与IKKβ、IκBα共沉淀,且在HSP27RNA干扰后IKKβ与IKKα结合能力下降.这些结果提示,HSP27可能通过参与细胞内NF-κB通路的激活,影响细胞凋亡和细胞运动,在肝癌细胞侵袭转移过程中发挥作用.

肝癌TACE中化疗和栓塞与肿瘤抑制和肝损伤关系的临床研究

目的研究肝癌TACE中化疗与栓塞的并用与否对肿瘤抑制和肝损伤的影响。方法回顾性分析152例HCC患者接受化疗灌注(A组30例)、栓塞(B组29例)或化疗栓塞(C组93例)后1天和4天,AFP下降及肝功能各指标变化。结果(1)AFP下降人数,B组(56.5%,78.3%)和C组(67%,80.7%)显著大于A组(25%,25%)(P<0.001)。(2)肝功能异常人数增幅表现为:TBil,A、C组明显高于B组(P<0.001)。ALT及ALB,B、C组明显大于A组(P<0.005)。PA,C组明显高于A、B组(P<0.005)。结论TACE对肿瘤的抑制主要归功于肿瘤供血血管的栓塞作用;加用肝动脉化疗灌注后,肝损伤的增加明显大于对肿瘤的抑制。

咖啡因促受照射肝癌细胞株MHCC97H凋亡的实验研究

目的观察咖啡因促受照射MHCC97H细胞株凋亡的作用及机制。方法通过流式细胞仪分析不同条件下细胞凋亡比例和周期分布,应用Western Blotting动态观察磷酸化CDC2 Tyr15的表达量,利用细胞克隆集落试验证明咖啡因的放疗增敏效果。结果MHCC97H细胞照射后48小时,0、8、16、24 Gy组的凋亡率分别为5.7%、12.0%、19.4%、21.7%;咖啡因促进凋亡,2.5 mmol/L咖啡因组的凋亡比例在照射16 Gy 48小时左右由对照组的19.4%升至32.3%,并且随着时间的推移凋亡比例逐渐增加。辐射引起细胞G2期阻滞,0、8、16、24 Gy组的G2期比例分别为13.9%、25.6%、41.4%、51.6%,G2期阻滞的程度与剂量呈正相关;而咖啡因可去除由辐射引起的G2期阻滞,2.5 mmol/L咖啡因组的G2期细胞比例在照射12小时左右由对照组的37.6%降为29.6%。MHCC97H细胞照射后,G2期阻滞程度与磷酸化CDC2 Tyr15的表达量一致;咖啡因则抑制磷酸化CDC2 Tyr15的表达量。细胞克隆集落试验显示,咖啡因可降低放射后MHCC97H细胞的存活分数,放疗增敏比(SER)为1.28。结论咖啡因通过增加CDC2 Tyr15的脱磷酸化,去除由辐射引起的G2期阻滞,从而促进凋亡,达到放疗增敏的效果。

肝癌的手术切除及介入和射频治疗对肝功能影响的临床研究

423例原发性肝癌患者分为手术、射频及介入治疗3组,比较各组治疗前后及不同治疗组间的主要肝功能指标变化。结果显示:治疗后第1、4、7、9天,各组肝功能指标均较治疗前明显升高;治疗前三组问ALT值无明显差别,治疗后第1-9天内,ALT变化在三组问有明显差异,以手术组数值最高;治疗后三组中肝功能各指标异常人数所占比率都有升高,均以手术组为最高。认为:三种治疗对肝功能均有影响,治疗前应充分评估患者肝功能储备状况。

低分子肝素对肝癌血管抑制作用的实验研究

目的 研究低分子肝素对肝癌血管形成的抑制作用。方法 采用人肝癌裸鼠转移模型 (LCI -D2 0 )。 4 0只模型鼠随机分成 4组即对照组 (生理盐水 )、化疗组 (顺铂 +氟尿嘧啶 )、肝素组 (法安明 )、联合组 (顺铂、氟尿嘧啶与法安明 )。观察肿瘤大小和转移、抑瘤率、测血清AFP、肿瘤微血管密度 (MVD)和血管内皮生长因子 (VEGF)的表达。结果 对照组、化疗组、低分子肝素组、联合组的肿瘤体积分别为 2 5 2 4 5± 1336 7mm3 、2 6 10± 12 17mm3 、5 883± 3131mm3 和 5 5 5 6± 2 5 70mm3 ;抑瘤率为 0 %、93.6 2 %、76 .70 %和 77.99% ;MVD为 2 0 .6 7± 6 .80、18.17± 2 .6 4、4 .83± 1.83和 6 .5 0± 2 .35 ;VEGF阳性率为 90 %、80 %、30 %和 30 % ;AFP为 12 1.80± 31.34ng/ml、2 1.4 5± 13.2 9ng/ml、75 .6 0± 2 9.74ng/ml和 5 5 .82± 37.98mg/ml;肝转移率分别为 80 %、70 %、2 0 %和 10 % ;肺转移率为 70 %、6 0 %、2 0 %和 10 % ;腹壁转移率为 90 %、6 0 %、4 0 %和 4 0 % ;腹水形成率为2 0 %、10 %、0 %和 0 %。低分子肝素组、联合组分别与对照组比较 ,对肝癌生长的抑制作用有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,低分子肝素对肝癌血管形成和转移有良好的抑制作用 ,与对照组及单纯化疗组比较有统计学意义

肝癌转移相关的核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的研究

通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别,筛查与转移相关的重要糖蛋白.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(2-DE)和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析,建立3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L和MHCC97H的核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱.比较研究发现,不同转移潜能肝癌细胞呈现不同的SDS-PAGE/LCA凝集素印迹图谱,MHCC-97H和MHCC-97L在35～45 ku和45～60 ku间出现了Hep3B未见的条带.在核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱中,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别平均检测到(55±7)个蛋白质点(n=3),(60±6)个蛋白质点(n=3),(61±4)个蛋白质点(n=3);以各自双向电泳图谱为参考胶,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别与其匹配的平均匹配点数为(25±3)个(n=3),(30±4)个(n=3),(28±3)个(n=3).该图谱中,与Hep3B相比,MHCC97L有13个点未匹配,其中9个点为Hep3B(-)/MHCC97L(+);MHCC97H有9个点未匹配,其中6个点为Hep3B(-)/MHCC97H(+),MALDI-TOF-MS/MS可鉴定出Annexin1、Keratin 8等12种差异蛋白质.这些结果证实了不同转移潜能的肝癌细胞有明显的核心岩藻基化糖蛋白差异性表达.提示肝癌转移可能与这些差异糖蛋白及其核心岩藻糖基化有关.

CK8寡糖链结构及翻译水平改变与人肝癌细胞转移相关性研究

糖组学方法筛查人肝癌细胞转移过程中发挥重要作用的核心岩藻糖基化蛋白质分子,解析比较筛出的差异蛋白——细胞角蛋白8(CK8)翻译及糖基化修饰改变与人肝癌细胞转移潜能的关系.应用双向电泳(2-DE)、凝集素亲和印迹、凝集素亲和沉淀联合质谱分析技术,筛查并验证与肝癌转移相关的核心岩藻糖基化蛋白;应用细胞免疫荧光和蛋白质免疫印迹检测CK8的蛋白质表达情况;应用免疫沉淀结合多种凝集素亲和印迹,推测其与肝癌转移相关的寡糖链结构改变.研究发现,3种不同转移潜能人肝癌细胞Hep3B、MHCC97-L和MHCC97-H的扁豆凝集素(LCA)亲和印迹表达谱中,分子质量55～60ku、等电点4～6区域处有核心岩藻糖基化蛋白呈差异表达,质谱鉴定为CK8.LCA亲和沉淀及蛋白质印迹进一步验证CK8异常核心岩藻糖基化与肝癌转移相关;研究发现,CK8分布于细胞浆内,在MHCC97-L和MHCC97-H细胞中蛋白质表达水平较Hep3B高,在MHCC97-H中与LCA和蓖麻凝集素(RCA-1)的亲和力较Hep3B强.以上结果提示,2-DE和凝集素印迹技术联合MALDI-TOF-MS/MS分析可用于筛查疾病过程相关的异常糖基化蛋白质分子,CK8蛋白水平、核心岩藻糖基化及β-1,4末端半乳糖基化的增加均与肝癌细胞转移潜能相关.

人肝癌细胞系的糖蛋白质组学研究

糖基化是最重要的蛋白质翻译后形式之一,糖基化蛋白的糖链部分影响着蛋白质的折叠和稳定性以及其生物学功能.许多恶性肿瘤组织与正常组织相比已显示出蛋白质糖基化的差异.采用蛋白质组学分析方法结合先进的糖蛋白荧光染色技术,研究了正常人肝细胞系(ChangLiver)和人肝癌细胞系(Hep3B)糖蛋白糖基化的差异.首先用细胞裂解法提取细胞总蛋白质,进行双向电泳(2-DE),然后用pro-QEmerald488糖蛋白荧光染料进行糖蛋白染色,得到两种细胞系糖基化蛋白表达谱,经2-DE分析软件Dymension分析2-DE图像,比较糖蛋白的糖基化程度,并对糖基化蛋白进行质谱鉴定.结果显示正常人肝细胞表达(74±2)个(n=3),而人肝癌细胞系表达(78±3)个糖蛋白(n=3).两者匹配的糖蛋白质点31个,Hep3B表达而ChangLiver不表达的糖蛋白质点47个,ChangLiver表达而Hep3B不表达的糖蛋白质点43个.两种细胞系糖基化程度存在明显差异,与正常人肝细胞相比,肝癌细胞发生糖基化改变的糖蛋白有25个,其中糖基化水平上调的有10个,下调的有15个,质谱鉴定出12个发生糖基化改变的糖蛋白.这些结果显示蛋白质糖基化改变可能在肝癌的发生和发展中起一定作用.

裸鼠肝癌丝裂霉素控释剂瘤内植入后药物浓度及骨髓抑制研究

[目的]研究MMC控释植入剂瘤内植入后药物浓度 时间变化及骨髓抑制程度。[方法]裸鼠皮下接种瘤组织后随机分组 ,比较丝裂霉素控释剂组与丝裂霉素腹腔注射组给药后5分钟、4小时、12小时、60小时、120小时、240小时肿瘤及血浆药物浓度及用药前后血常规变化。[结果]瘤内植入组与腹腔注射组在用药后5分钟(P=0.049)、12小时(P=0.000)、60小时(P=0.045)、240小时(P=0.000)肿瘤药物浓度差异有显著性。用药后5分钟(P=0.050)、60小时(P=0.046)、240小时(P=0.031)血浆药物浓度差异有显著性。用药后一周瘤内植入组与腹腔注射组红细胞(P=0.049)、血红蛋白(P=0.032)、血小板(P=0.001)、白细胞(P=0.016)差异均有显著性。用药后两周瘤内植入组与腹腔注射组血小板(P=0.035)、白细胞(P=0.047)差异有显著性。[结论]MMC植入剂瘤内植入可提高治疗效果 ,降低化疗药物毒性引起的全身性副作用。丝裂霉素控释剂瘤内植入可能成为临床治疗中晚期肝癌的新方法。

NKT细胞在肝癌组织中的分布状况与肝癌局部免疫的研究

目的 :通过双重免疫组织化学的方法来研究NKT细胞在肝癌组织、正常肝脏组织以及其它肝脏病变组织中的分布情况 ,探讨NKT细胞的数量分布变化与肝癌组织局部微环境免疫状态的关系。方法 :采用双重免疫组化方法对上述组织石蜡切片染色 ,随机选取视野计数NKT细胞 ,然后统计分析。结果 :①侵袭性高或有转移 (有癌栓 )的HCC组NKT细胞数低于侵袭性低或无转移 (无癌栓 )的HCC组 :P <0 .0 5 (P =0 .0 38) ;②正常肝组织组NKT细胞数与肝癌癌周组织组NKT细胞数则无统计学差异 :P >0 .0 5 (P =0 .731) ;③在肝癌组中 ,有包膜组和无包膜组两组数据在统计学上没有明显差异 :P >0 .0 5 (P =0 .6 2 0 ) ;④小肝癌组和大 (巨大 )肝癌组两组数据在统计学上有显著差异 :P <0 .0 5 (P =0 .0 2 6 ) ;⑤以术前AFP阴、阳性 (2 0 μg /L为标准 ) ,术前AFP阴性组和术前AFP阳性组两组数据在统计学上没有明显差异 :P >0 .0 5 (P =0 .6 18)。结论 :①NKT细胞数与肝癌侵袭、转移性呈负相关 ,提示NKT细胞对肝癌的侵袭、转移有抑制作用 ;②正常肝组织 (供体肝组织 )及肝脏良性病变周围肝组织中NKT细胞的数量分布与原发性肝癌癌周组织中NKT细胞的数量分布没有明显的统计学差异 ,说明肝组织中NKT细胞的数量可能与原发性肝癌的易感性无关 ;

非转移性和转移性人肝癌血清糖蛋白凝集素亲和谱的比较研究

目的应用凝集素亲和技术寻找肝癌转移相关特征性血清糖蛋白凝集素亲和谱,并探讨其生物学意义。方法本研究利用含有13种肿瘤相关的凝集素集合芯片技术,比较研究了非转移性和转移性人肝癌血清糖蛋白凝集素亲和谱,同时采用多重凝集素印迹方法验证凝集素芯片结果。计量资料数据采用双样本异方差t检验,进行两两比较。结果研究证明,与非转移人肝癌血清相比,转移性肝癌血清糖蛋白对麦胚凝集素(wheatgerm agglutinin,WGA)、黑接骨木凝集素(sambucus nigra lection,SNA)、红腰豆凝集素(phaseolus vulgariserythroagglutinin,PHAE)和欧曼陀罗凝集素(datura stramonium lectin,DSA)的亲和作用增强(P<0.05)。提示转移性肝癌血清糖蛋白出现了增多的唾液酸(sialic acid,sia)、N-乙酰葡萄糖胺(N-acetyl glucosamine,GlcNAc)、平分型GlcNAc及多天线、偏二天线糖链结构。结论血清糖蛋白聚糖链的变化与肿瘤侵袭和转移密切相关,为临床筛选肝癌侵袭及转移相关的糖标记提供了重要参考。

原发性肝癌二级预防可行性研究的成果和问题

原发性肝癌在我国有重大的疾病负担。经过30多年研究证明,筛查对肝癌的早期发现、早期诊断和早期治疗是一个有效的防治措施。肝癌二级预防的可行性研究取得了一定的成果,确定了适合筛查的肝癌高危对象,筛查方法的选择,筛查间隔的确定。并进一步讨论了在肝癌筛查实施过程中存在的问题及应对的策略。

肝癌研究的变迁与趋势

半个世纪以来肝癌研究发生了很大变迁,概述了主要变迁和今后趋势。(1)肝癌高危险因素已变为HBV与HCV感染、环境因素、生活方式、代谢内分泌和遗传因素,由此须调整预防措施。(2)美国、意大利和作者单位资料表明,肝癌预后的改善主要由于早诊早治,并继续成为提高疗效的重要途径。(3)保守治疗格局在变,分子靶向治疗是一个趋势。"杀癌+杀癌"的联合治疗仍有发展空间,而"杀癌+改造"的模式更值得关注。(4)癌转移观念已有更新,如转移乃全身性问题,转移不是晚期现象,免疫炎症微环境影响转移,转移主要与肿瘤干细胞有关,转移潜能可双向变。为此应重视全身性干预,包括神经、免疫、内分泌、代谢等;关注肿瘤干细胞的"改邪归正";关注抗炎剂的应用;关注中医中药。(5)杀癌疗法负面问题的干预是提高现有疗法疗效的一条捷径。"变"是绝对的,"不变"是相对的,站得高一点,看的远一点,有助推动事物发展。

维生素K_2干预肝癌的实验研究

目的:研究维生素K2对人肝癌细胞的凋亡诱导作用,并探讨其作用机制;研究维生素K2的干预对荷瘤裸鼠肝癌肺转移及生存期的影响。方法:用流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、bcl-2及bax的mRNA表达。建立人肝癌裸鼠原位移植模型,给予荷瘤裸鼠口服维生素K2(30mg·kg-1.d-1),另设对照组,观察两组裸鼠肝癌肺转移和生存期变化。结果:100μmol·L-1的维生素K2与细胞共育6h后细胞的凋亡率为(28.5±1.6)%,与对照组(2.8±4.8)%比较,有显著差异(P<0.05)。caspase-3 mRNA的表达随着维生素K2浓度及作用时间的增长而增强;当100μmol的维生素K2分别作用细胞24h和72h后,caspase-3 mRNA的表达分别为(0.495±0.250)和(0.603±0.098),与对照组比较(0.270±0.132)均有显著差异(P<0.05)。人肝癌细胞中未检测到bcl-2mRNA表达。bax mRNA的表达于用药前后无变化。维生素K2干预荷瘤裸鼠后,其生存期(83.6±5.18d)较对照组(58.2±9.47d)明显延长(P<0.05);其肺转移灶(4.6±1.95个)较对照组(12±6.6个)明显减少(P<0.05)。结论:维生素K2对人肝癌细胞有凋亡诱导作用,凋亡相关基因caspase-3参与了凋亡的调控;维生素K2能减少裸鼠肝癌肺转移率,能延长荷瘤裸鼠的生存期。

外周血循环核酸作为肝癌分子标志物的研究

原发性肝细胞肝癌（以下简称“肝癌”）是世界第五大肿瘤．但其死亡率居肿瘤导致死亡的第2位。肝癌起病隐匿，恶性程度高，早期无特异性症状。大多数肝癌病人就诊时已进入晚期。因此，寻找准确、有效的肝癌分子标志物对提高肝癌病人生存率有重要意义。甲胎蛋白（alphafetalprotein，AFP）是目前应用较广泛的肝癌诊断分子标志物．然而其灵敏度和特异度并不理想。