百草枯对人胚胎神经祖细胞自噬作用的影响

目的通过观察百草枯（PQ）染毒后人胚胎神经祖细胞超微结构变化以及自噬相关基因表达情况，探讨PQ对人胚胎神经祖细胞自噬作用的影响。方法以永生化的人胚胎神经干细胞系（ReNcell CX细胞）为研究对象，设立1．00、10．00、100．00μmol／LPQ染毒组和对照组（0．00μmol／L）。采用CCK8法测定PQ染毒对ReNcell细胞活力的影响，透射电镜观察细胞超微结构变化；实时荧光定量一聚合酶链反应技术检测自噬相关基因mTOR、Beclinl、Atg5、Atg7、LC3、Atg12的mRNA表达情况以及凋亡相关基因Bc-2和Bax的mRNA表达情况。结果与对照组比较，100．00μmol／L染毒组人胚胎神经干细胞活力明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。1．00μmol／L染毒组可观察到自噬小体，但无细胞凋亡改变，而10．00μmol／L染毒组可同时可观察到自噬小体和细胞凋亡改变。自噬作用正向调节基因LC3、Atg12、Atg5、beclin1、Atg7 mRNA表达水平随PQ浓度的增加，呈现先增加后降低的趋势。1．00μmol/L染毒组beclinl mRNA表达水平达到峰值；10．00μmol／L染毒组LC3、Atg12、Atg5、Atg7 mRNA表达水平达到峰值。而自噬作用负调节基因mTOR mRNA表达水平随PQ浓度的增加呈现先下降后上升的趋势，与对照组比较1．00μmol／L染毒组mTOR mRNA表达水平明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）：100．00μmol／L1染毒组mTOR mRNA表达水平明显增加，差异有统计学意义（P〈0．01）。与对照组比较，10．00μmol／L染毒组促凋亡基因Bax mRNA表达水平明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01），100．00μmol/L染毒组Bax mRNA表达水平明显增加，差异有统计学意义（P〈0.01）。1．00、10．00、100．00μmol／L1染毒组抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达水平均明显低于对照组，但在10．00μmol／L染毒组Bcl-2 mRNA表达水平最低，差异有统计学意（P〈0．01）。结论在PQ染毒浓度较低时激活了自噬作用，自噬作用发挥神经保护的作用；PQ染毒浓度较高时，自噬作用被抑制并诱导细胞凋亡增加。