反相高效液相色谱荧光法测定大鼠脑组织中氨基酸类神经递质

目的 建立并改良反相高效液相色谱法,测定大鼠不同脑组织分区氨基酸类神经递质含量。方法 改良使用K2 CO3 缓冲溶液作为稀释液,反相高效液相色谱洗脱,高丝氨酸作为内标,邻苯二甲醛柱前衍生和荧光检测器检测大鼠大脑皮质、海马、纹状体和小脑中4种氨基酸类神经递质:天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)和γ氨基丁酸(GABA)的含量。结果 4种氨基酸在18min内洗脱完全,分离效果良好;在0 .5～4 0 μmol/L浓度范围有较好的线性关系,其相关系数不低于0 .9997;4种氨基酸天内精密度范围为0 .70 %～4 .0 1% ,天间精密度为2 .78%～9.5 8% ;Asp、Glu和GABA的最低检测限为0 .0 1μmol/L ,而Gly为0 .0 2 μmol/L ;海马组织4种氨基酸绝对回收率不低于89.39%。结论 改良后的反相高效液相色谱荧光法灵敏度高、重复性好,能有效分离检测大鼠脑组织分区中氨基酸类神经递质。

乐果急性染毒对大鼠海马抑制性氨基酸神经递质的影响

目的研究乐果急性染毒对大鼠海马抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)和甘氨酸(Gly)含量的影响以及它们的剂量-时程-效应关系。方法大鼠38.9、83.7、180mg/kg乐果腹腔注射后于0.5、2、8、24h断头取海马,对照组注射生理盐水。Asch-DTNB法测定全血及海马中乙酰胆碱酯酶活性,高效液相色谱荧光法测定海马匀浆液中GABA、Gly的含量。结果全血及海马中胆碱酯酶活性显著下降,同对照相比,各剂量组各时间段全血AChE活性均低于50%,海马低于75%,存在剂量依赖性并在24h后活性有所恢复。海马GABA及Gly含量都有不同程度增加,其中海马低剂量组各时间段,中剂量组0.5、2、8h,高剂量组0.5、24h GABA含量与对照组相比都有统计学差异。Gly低剂量组在染毒8h,中剂量组0.5h,高剂量组0.5、24h的含量可见有统计学差异的升高。结论乐果急性染毒后,大鼠海马抑制性氨基酸GABA及Gly有代偿性升高,GABA存在剂量-时程-效应关系,Gly存在时程-效应关系,同传统的有机磷胆碱能中毒机制一起,发挥乐果的毒作用。

乐果亚慢性染毒对大鼠自发活动的影响

目的探讨有机磷农药乐果90d染毒对大鼠自发活动的影响。方法48只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别使用生理盐水(对照),5mg/kg(低剂量)、10mg/kg(中剂量)和20mg/kg(高剂量)的乐果灌胃给药,每周染毒5d,每天1次,实验周期90d。定期尾静脉采血,测定全血AChE活性,实验结束时随机取半数动物,用DigBehv-LR型自发活动视频分析系统测定其自发活动;其余动物均断头处死,测定脑AChE活性。结果实验期间,各乐果染毒组动物全血AChE活性明显抑制,实验后期有所恢复。实验结束时,低、中、高剂量组脑组织AChE活性分别为对照组的78%、63%和42%,存在剂量-效应关系。大鼠自发活动测试结果显示,随染毒剂量的增加,低、中、高剂量大鼠的总路程、活动时间、平均速度有下降趋势,而休息时间有升高趋势。其中高剂量组的变化最为明显,总路程、活动时间、平均速度同对照组相比分别下降了54.6%、55.3%、54.7%,而休息时间增加了41.3%,同对照组相比都有显著性差异(P<0.05)。对大鼠自发活动指标和全血及脑AChE活性的相关性进行分析,发现染毒大鼠的总路程、活动时间、平均速度和休息时间和脑AchE活性呈显著相关(P<0.05),而与全血AchE活性在统计学上无相关性(P>0.05)。结论乐果亚慢性染毒会使大鼠自发活动降低,这可能同脑组织AChE活性受到长期抑制有关。