VEGF特异siRNA对骨肉瘤细胞凋亡和仿血管发生的影响

目的:探讨VEGF特异siRNA在骨肉瘤细胞株(MG63)增殖、凋亡以及仿血管发生中的作用。方法:以pSilienc-er载体构建VEGF特异siRNA质粒pSilencer-VEGF siRNA,并转染骨肉瘤细胞MG63;将细胞分为pSilencer-VEGF siRNA质粒组(试验组)和空siRNA质粒组(对照组),Western blotting在蛋白水平检测转染重组质粒后MG63细胞VEGF表达情况;MTT比色法、光镜、流式细胞仪结合Annexin V-FITC/PI染色和H-E染色观察质粒转染后骨肉瘤细胞增殖、凋亡和仿血管发生情况。结果:测序证实成功构建了针对VEGF的siRNA重组质粒。转染pSilencer-VEGF siRNA重组质粒后的试验组培养液中及骨肉瘤细胞内VEGF蛋白表达下降;转染后48、72、96h骨肉瘤细胞的增殖抑制率分别为41.67%、43.92%、35.32%,并发生了早期凋亡,凋亡率为28.27%。转染pSilencer-VEGF siRNA重组质粒的骨肉瘤细胞未见仿血管发生,转染空质粒的对照组骨肉瘤细胞则有仿血管发生。结论:RNA干扰VEGF基因能抑制骨肉瘤细胞增殖,促进骨肉瘤细胞早期凋亡,干扰骨肉瘤细胞仿血管发生,为临床基因治疗骨肉瘤提供了新的思路。

EPHA2-siRNA质粒对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨骨肉瘤细胞中EPHA2基因表达对细胞增殖、凋亡以及仿血管发生的影响。方法应用pSiliencer质粒构建靶向EPHA2的siRNA质粒;脂质体转染siRNA质粒人骨肉瘤细胞,Western blot在蛋白水平检测转染前后细胞基因表达情况;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪结合Annexin V-FITC和PI染色以及HE染色观察转染前后骨肉瘤细胞增殖、凋亡及仿血管发生情况。结果成功构建了针对EPHA2的siRNA表达质粒;将质粒转染入骨肉瘤后,EPHA2基因在蛋白表达水平下调;骨肉瘤细胞增殖能力下降,并发生了早期凋亡,骨肉瘤细胞的仿血管发生受到抑制。结论EPHA2参与了骨肉瘤细胞增殖、早期凋亡和仿血管发生;利用RNA干扰技术靶向EPHA2基因治疗可能为骨肉瘤治疗提供新方法。