斑马鱼视网膜感光细胞的发育及视蛋白的表达

目的研究斑马鱼视网膜感光细胞的发育和视蛋白的表达,明确利用斑马鱼研究视网膜和感光细胞的可行性。方法制备斑马鱼视网膜感光细胞视蛋白(视杆细胞视紫质、视锥细胞紫外线视蛋白和视锥细胞蓝色视蛋白)的RNA探针。收集受精后72,96,120h的斑马鱼眼球组织进行切片、电镜观察和整体原位杂交。结果斑马鱼的神经视网膜分层排列,包括3个细胞层和2个丛状层。随时间发展,视网膜的发育逐渐成熟,3个细胞层的细胞排列更加整齐,感光细胞的外节盘发育更加成熟,3种视蛋白的表达逐渐增强,范围扩大。结论利用斑马鱼进行视网膜和感光细胞的研究是可行的,视蛋白可作为感光细胞的标记。

手部慢性特殊感染病灶中分支杆菌的检测

目的探讨应用Nest PCR检测技术对普通细菌培养阴性的手部慢性特殊感染患者提供有效的诊治依据。方法对15例手部慢性特殊感染病灶,除一般的病理、普通及特殊细菌培养、直接抗酸染色检查外,应用Nest PCR技术来检测感染病灶中的分支杆菌,并对分支杆菌进行核酸测序分型。结果15例中普通及特殊细菌培养、直接抗酸染色均呈阴性。病理检查结核性肉芽肿1例,结核样肉芽肿3例,结节性肉芽肿4例,慢性肉芽肿性炎7例。应用Nest PCR检测技术,测出9例为非结核分支杆菌(Non tuberculousmycobacterium ,NTM)阳性,结核杆菌为0。经核酸测序分型属海分支型5例,堪萨斯/胃型2例,鸟分支型1例,龟/脓肿型1例。结论Nest PCR检测弥补了肺外分支杆菌培养阳性率低下的缺陷,证实了NTM感染,尤其是海分支杆菌远比结核菌常见,是沿海地区手部慢性特殊感染的主要致病因素。

应用Nest-PCR/核酸测序技术检测手部慢性肉芽肿性炎症的病原体

目的探讨手部慢性肉芽肿性炎症的病因,其病理改变的鉴别诊断意义及PCR测序在诊断中的价值。方法以16S-rDNA为靶序列,采用Nest-PCR/核酸测序法直接检测37例病理表现为手部慢性肉芽肿性炎症的新鲜标本中的分枝杆菌。结果24例PCR扩增出阳性条带,测序结果为海分枝杆菌17例,鸟分枝杆菌2例,龟脓肿分枝杆菌1例,堪萨斯/胃分枝杆菌2例,结核杆菌2例。结论PCR直接检测手部标本中的分枝杆菌可确定病因,非结核分枝杆菌是手部慢性肉芽肿性炎症的主要病因,病理改变不足以区别结核与非结核,应进一步找出细菌学证据。

视锥-视杆同源盒基因对斑马鱼光感受器细胞发育的影响

目的 观察斑马鱼受精卵CRX基因表达下调后，视网膜光感受器细胞外节盘的发育和视蛋白的表达。方法 实验研究。斑马鱼受精卵内显微注射CRX-寡核苷酸，使CRX基因的表达下降。通过眼球的组织学切片、电镜标本和视蛋白RNA探针的原位杂交观察光感受器细胞以及外节盘的发育和视蛋白的表达。结果 视网膜组织学观察，CRX组与对照组、空白组比较，视网膜和光感受器细胞的发育都没有明显差别。电镜观察，对照组和空白组光感受器细胞都有外节盘形成，但是CRX组未发现明显的外节盘结构。对照组和空白组斑马鱼均可在鼻侧视网膜区域观察到视紫红质（rhodopsin，Rho），视锥细胞蓝色视蛋白（SWS1）和紫外线视蛋白（SWS2）3种视蛋白的表达，CRX组3种视蛋白的表达明显减少。结论 CRX基因影响斑马鱼光感受器细胞外节盘的发育和视蛋白的表达。