电喷雾质谱研究甲醇诱导的溶菌酶构象变化

为了研究甲醇诱导对溶菌酶构象的影响,用电喷雾质谱(ESI-MS)结合圆二色性光谱(CD)在pH 2.0的条件下测定不同甲醇浓度的溶菌酶构象。在甲醇浓度上升到70%前,溶菌酶的ESI质谱图中电荷状态分布没有太大的变化。然而,当甲醇浓度超过75%,以16+为中心的高电荷态分布开始出现,并可以观察到两簇离子峰,表明溶菌酶的三级结构已发生变化。与此同时,圆二色性光谱显示溶菌酶的螺旋变性态的百分率明显上升,其二级结构也部分发生变化。由此可见,当甲醇浓度超过75%,溶菌酶构象将会由折叠态转变为非折叠态。差示扫描量热曲线(DSC)结果显示,固体溶菌酶溶解于5%甲醇溶液后,峰顶温度Tm将由固体的79.6℃上升到81.8℃,表明固体溶菌酶溶解于水后,热稳定性略有升高。

电喷雾质谱研究气相中环糊精与锂离子的非共价复合物

为了探索环糊精和锂离子的非共价相互作用，一定计量比的α-环糊精（α-CD）、β-环糊精（β-CD）、七-（2，6-二-氧-甲基）-β环糊精（DM-β-cD）和七-（2，3，6-三-氧-甲基）-β-环糊精（TM-β-CD）分别与氯化锂混合，在室温下反应10min使达到平衡．溶剂组成为含70％乙腈的水溶液，甲酸含量为0．1％．正离子模式下，电喷雾质谱的结果表明环糊精可以和锂离子结合，并生成1：1化学计量比的非共价复合物．碰撞诱导解离观察到一系列带有锂的环糊精的碎片，表明碰撞后复合物失去了葡萄糖单元，进一步确认了该复合物的生成．质谱滴定法测定了四种复合物Li＋α-CD、Li＋β-CD、Li＋DM-β-CD、Li＋TM-β-CD的解离常数Kd1分别为1．87×10^-5、2．67×10^-5、3．36×10^-5、3．05×10^-5mol／L．Li＋和β-CD复合物的解离常数小于Li＋和DM-β-CD复合物，其原因为部分甲基化的DM-β-CD具有较大的空间位阻．Li＋和TM-β-CD复合物的Kd1接近于Li＋和DM-β-CD复合物，表明β-CD疏水腔的大口完全甲基化的TM-β-CD，与β-CD疏水腔的大口部分甲基化的DM-β-CD与锂离子结合能力相接近，该结果意味着锂离子与DM-β-CD疏水腔的结合位点很可能位于DM-β-CD疏水腔的小口．密度泛函理论计算结果表明，-个Li＋可以和α-CD的四个相邻的氧原子结合，四个相邻的氧原子分别来自于伯羟基和糖苷键，它确认了Li＋位于α-CD疏水腔的小口．对[α-CD＋Li]＋复合物而言，一个Li＋可以通过静电作用，在小口与α-CD疏水腔作用，并形成非特异性结合的主客体复合物．

电喷雾质谱研究乙腈诱导的溶菌酶的构象变化

首次采用电喷雾质谱结合圆二色性光谱以及荧光光谱,研究不同浓度的乙腈诱导对溶菌酶构象变化的影响.在pH2.0的酸性环境下,随着乙腈浓度的上升,电喷雾质谱的谱图中溶菌酶电荷状态分布会变宽,当乙腈浓度达到70%时,会出现15+的高电荷离子峰,电荷中心也从纯水溶剂的10+到了12+,表明其三级结构发生了变化,即由天然构象转变为部分非折叠的构象.圆二色光谱显示在溶菌酶水溶液中加入乙腈,二级结构中无规卷曲的百分含量在增加.荧光光谱进一步证明在乙腈的作用下,溶菌酶由天然构象转变为部分非折叠的构象.