目的研究连接蛋白43(Cx43)基因敲除小鼠胚胎心脏近端流出道组织中转录因子的改变,从分子水平探讨 Cx43基因敲除小鼠胚胎心脏近端流出道发育异常的原因。方法以胎龄13.5 d 和14.5 d 的 Cx43基因敲除、Cx43杂合子和 Cx43野生型鼠胚心脏近...目的研究连接蛋白43(Cx43)基因敲除小鼠胚胎心脏近端流出道组织中转录因子的改变,从分子水平探讨 Cx43基因敲除小鼠胚胎心脏近端流出道发育异常的原因。方法以胎龄13.5 d 和14.5 d 的 Cx43基因敲除、Cx43杂合子和 Cx43野生型鼠胚心脏近端流出道部分为研究对象。分别提取总 RNA,反转录成 cDNA;并在体外转录为 cRNA,同时进行生物素标记及片段化;再与Affymetrix 430 2.0小鼠全基因组芯片进行杂交。杂交信号经扫描后,应用相关生物信息软件分析基因表达情况。用实时定量逆转录(RT)PCR 的方法对基因芯片筛选出的与心脏发育相关的部分转录因子进行验证。结果与 Cx43野生型组相比,Cx43基因敲除组表达差异的基因中,有6个是与心脏发育相关的转录因子。实时定量 RT-PCR 验证了其中3个基因:Sox11、Foxp1和 Tbx20。在胎龄13.5 d,Cx43基因敲除鼠胚 Sox11、Foxp1的表达量均明显低于 Cx43野生型组(4.76±0.19 vs 5.34±0.25,5.08±0.28 vs 5.64±0.15,均 P<0.01);Tbx20在各组间差异不明显。胎龄14.5 d,各基因Sox11、Foxp1以及 Tbx20的表达量在基因敲除组均明显低于 Cx43野生型组(4.71±0.27 vs 5.00±0.19,5.25±0.31 vs 5.77±0.16,7.05±0.17 vs 7.43±0.25,均 P<0.05)。其变化趋势与基因芯片结果基本一致。结论心脏特异性的转录因子 Foxp1、Sox11和Tbx20等的表达异常可能与 Cx43基因敲除小鼠流出道的异常发育有关。展开更多