“医学免疫学”形成性评价实践

目的:探讨运用形成性评价促进深度学习策略。方法:期末考试成绩分析和调查问卷发布。对象为2014～2015学年和2016～2017学年修读《医学免疫学》课程的复旦大学基础医学院临床医学八年制和五年制学生以及基础医学专业本科生。2016～2017学年采用形成性和终结性评价相结合考评,2014～2015学年采用一次性终结性考核。结果:相对于2014～2015学年,2016～2017学年的期末考试试卷平均成绩虽无显著性差异,但期末考试试卷成绩高于85分的学生比例增加,有统计学意义。大部分学生认可形成性评价促进了深度学习。结论:开展形成性评价教学有助于应试教育向素质教育转变。

医学免疫学实践性教学探索

医学免疫学是医学本科生的核心主干课程,其理论和技术已渗透到生命科学研究的各个领域,尤其与生物医学、转化医学研究和临床医学等密切相关. 同时,免疫学又是一门发展快速的生命前沿学科,在高等教育日益全球化和多元化的21 世纪,医学免疫学教学应与时俱进,与国际接轨,方能达成我校＂医学基础扎实、临床技能规范、职业素质良好的国际通用型医学人才＂的培养目标. 基于研究的学习（ Research based learning ,RBL） ,是世界各国研究型大学本科教育培养创新型人才的一个重要特征[1]. 我们在改进实验教学内容的前提下,推进课程基于问题意识的创新力培养;在此基础上面向有创新力且对免疫学有浓厚兴趣的本科生开展学术研究,探索培养＂具有科学态度、创新和分析批判精神＂的高素质医学专业人才的有效途径.

免疫突触形成的生物学特点及其光学成像研究

免疫突触(immunological synapse,IS)是抗原提呈细胞与T细胞免疫识别时,多种分子参与、分阶段不断变化的过程,涉及黏附分子、细胞因子、信号传导分子、细胞骨架蛋白等多分子的聚集或离散.其形成不仅促进T细胞和抗原提呈细胞的稳定接触,而且激活T细胞信号传导途径,促进T细胞的活化和增殖.对IS的研究可以从分子水平解释免疫激活、免疫耐受、病原微生物感染与免疫细胞相互作用的机制,为进一步揭示疾病发生的分子机制,寻求疾病防治的靶向分子提供新的思路.近年来,光学成像的发展为可视化研究IS形成与T细胞活化的关系提供了有力帮助,为研究生理病理状态下的免疫应答提供了有力工具.

OX40/OX40L在免疫应答中的作用及与疾病关系的研究

随着对OX40OX40L的深入研究,发现这对重要的协同刺激分子除了能增强CD4+T细胞、B细胞、DC细胞的扩增、成熟和产生效应功能外,还能影响CD8+T细胞的杀伤效应,能使T细胞免于凋亡,并促进更多记忆T细胞的生成。OX40OX40L在许多疾病的发生发展中也起着关键的作用,通过干预其相互作用所进行的免疫治疗已在许多动物模型上取得非常好的疗效,这为今后的临床治疗提供了理论和实验基础。

调节性B细胞与肿瘤免疫逃逸

近年来,调节性B细胞(Breg)在肿瘤免疫研究中备受瞩目,多种实体肿瘤中均发现其大量浸润,直接或间接影响抗肿瘤免疫功能,发挥免疫调节效应。然而肿瘤浸润Breg的表型特征及其复杂的功能和机制尚有待系统解析。在此,基于现有研究成果,本文对肿瘤浸润Breg的表型、作用模式、驱动因素及临床相关性进行论述。

PA-MSHA抗肿瘤效应的免疫机制研究

目的研究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)处理树突状细胞(dendritic cells,DCs)后对其功能及激活T细胞杀伤肿瘤细胞效应的影响。方法取小鼠骨髓来源的DC,观察PA-MSHA体外处理后对DC表面分子、吞噬功能及T细胞杀伤功能的影响。结果 PA-MSHA处理的DC其表面分子CD40、I-E表达显著上升,吞噬功能显著下降,由DC诱导的活化T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应显著高于对照组。结论 PA-MSHA能有效促进DC成熟并增强抗肿瘤免疫效应。

环氧化酶-2(COX-2)抑制剂联合白细胞介素-2(IL-2)增强小鼠肾癌免疫治疗敏感性的研究

目的探讨环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂联合白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对小鼠肾癌免疫治疗的作用及其机制。方法以Renca细胞建立Babl/c小鼠异位肾癌模型,共28只,随机等分成4组,不同组别予以不同给药,分别为IL-2组、NS-398(一种COX-2抑制剂)组、IL-2+NS-398组和空白对照组。在第14天、28天提取各组荷瘤小鼠外周血,用流式细胞术检测调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的变化;切取荷瘤小鼠瘤体及脾脏,免疫组化检测小鼠脾脏和肿瘤局部Treg的变化。结果小鼠异位肾癌在不同药物处理后,肿瘤体积出现明显变化,联合用药组肿瘤体积减小明显,经多组t检验,与其他组相比差异有统计学意义(P<0.05)。同时,COX-2抑制剂能下调荷瘤小鼠外周血、肿瘤及脾脏中Treg的表达,且与IL-2联合有协同作用(P<0.05)。结论 COX-2抑制剂联合IL-2可显著抑制荷瘤小鼠异位肾癌的发展,说明Treg的下调是抑制肾癌生长的可能机制之一。

脑胶质瘤免疫微环境的研究进展

脑胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发性肿瘤,由于存在血脑屏障及其独特的组织器官区域免疫特性,对脑组织免疫微环境与疾病发生发展的相关性研究显得尤为重要。本文将聚焦于生理与病理状态下脑局部免疫微环境的改变,通过对脑胶质瘤局部的各类免疫细胞、免疫分子的作用及机制的介绍,阐明脑胶质瘤局部免疫微环境的抑制效应促进了肿瘤的生长;通过对脑胶质瘤局部免疫微环境的调控和干预,期望改善或逆转上述负性作用,为脑胶质瘤的免疫及综合治疗提供依据。

磷酸酶SHIP-1对T细胞分化、稳态和免疫应答的调控效应

T细胞是适应性免疫应答的重要调控者,对其发育、分化及稳态的调节一直是免疫学领域的研究重点和热点。含有SH2结构的5'肌醇磷酸酶-1(SH2-containing inositol phosphatase-1,SHIP-1)能够水解磷脂酰肌醇-3激酶(phosphafidylinositol 3-kinase,Pb3K)信号途径中的关键物质磷脂酰肌醇三磷酸(phosphatidylinositol3,4,5-triphosphate,PIP_3),从而参与T细胞免疫应答。SHIP-1对T细胞发育、分化及免疫稳态发挥重要调控作用,本文就SHIP-1对T细胞的分化和稳态的免疫调控作用及其机制的研究进展作一简要综述。

免疫细胞的脂肪酸代谢与肿瘤免疫

免疫细胞代谢是一个新兴的研究领域,旨在解析关键代谢途径对于免疫细胞发育、增殖和功能的影响。近年来,该领域取得了许多重要的研究成果。本文将聚焦肿瘤中脂肪酸代谢和免疫细胞功能相关的最新进展,阐述脂肪酸代谢通路中代谢物变化是如何在肿瘤微环境中精准调节免疫细胞的发育、分化和功能,解析肿瘤中免疫细胞功能的代谢调节机制,为肿瘤的免疫学作用及其机制研究提供新的思路和方法。

地西他滨联合半量HAG方案治疗骨髓增生异常综合征及急性髓系白血病

目的探讨地西他滨治疗骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)和急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia,AML)的临床疗效及不良反应。方法收集马鞍山市人民医院血液科收治的12例MDS及AML患者,给予地西他滨联合半量HAG方法治疗,观察疗效及不良反应。结果 4例完全缓解,5例部分缓解,总有效率75%(9/12),平均无疾病进展生存时间为10.33月,3例死亡;8例出现IV度骨髓抑制,发生率为66.7%(8/12),6例并发感染,发生率为50%(6/12)。其他不良反应未发现。结论地西他滨联合半量HAG方案可以有效地治疗MDS及AML,主要不良反应为骨髓抑制及感染。

地塞米松调节T细胞免疫应答保护小鼠急性炎性肝损伤的作用

背景:在小鼠急性炎性肝损伤中,地塞米松(Dex)可通过抑制天然免疫细胞功能抑制肝损伤进展,然而T细胞是否参与此保护作用尚少见报道。目的:探讨Dex在急性炎性肝损伤中对T细胞免疫应答的调节效应。方法:6只雄性C57BL/6J小鼠随机分为实验组和模型组,在以脂多糖诱导急性炎性肝损伤模型前1 h,两组分别腹腔注射Dex5 mg/kg和等体积PBS。建模12 h后处死小鼠,行临床评分并检测肝功能;分离脾脏单个核细胞,分析T细胞活化情况以及各T细胞亚群的细胞因子表达、分泌和转录因子表达。结果:实验组小鼠临床评分和血清转氨酶水平均明显低于模型组,脾脏CD44+CD62L-T细胞(活化或记忆性T细胞)比率显著降低,Th1型细胞因子IFN-γ表达、分泌减少,Th2型细胞因子IL-4表达、分泌增加,调节性T细胞(Treg细胞)比率、Th2/Th1、Treg/Th1比值增加;同时,Th1细胞特异性转录因子表达下调,Th2、Treg细胞特异性转录因子表达上调。结论:Dex通过抑制T细胞活化并调节T细胞亚群分化(抑制Th1细胞分化,促进Th2、Treg细胞分化),在急性炎性肝损伤中起一定保护作用。

HER-2/neu胞外区的基因工程表达及其免疫避孕作用

目的:研究HER-2/neu胞外区部分片段重组蛋白疫苗在免疫避孕中的作用。方法:构建原核表达重组体pET-hECDu,在大肠杆菌中表达人HER-2/neu胞外区部分片段,经Hi-Trap亲和层析柱纯化得到重组蛋白(hECDu),以ELISA法检测其结合活性后免疫雌性小鼠。用ELISA法检测抗HER-2/neu体液免疫应答,3H-TdR掺入法检测细胞免疫应答。结果:经原核表达系统成功纯化得到与理论分子量77 ku(1 u=1 Da)相符的hECDu,并证实其可与抗HER-2/neu胞外区特异性单克隆抗体结合。该重组蛋白疫苗可诱导雌鼠产生较高水平体液及细胞免疫应答。其生育力(平均产仔数4.0±1.8)与对照组(7.8±1.3)相比明显降低,但免疫鼠产后4 d子宫及卵巢均无明显病理改变。结论:经原核表达系统成功纯化得到HER-2/neu胞外区部分片段重组蛋白,该蛋白疫苗可在小鼠中诱导产生免疫避孕效应。

地塞米松诱导骨髓来源抑制细胞对同种异系小鼠皮肤移植排斥反应的作用

目的探讨地塞米松诱导骨髓来源抑制细胞(MDSCs)在同种异系小鼠皮肤移植模型中的表达及免疫负调节作用。方法以雌性BALB/c小鼠皮肤为供体,雄性C57BL/6小鼠为受体,建立同种异系小鼠尾—背皮肤移植模型(n=40)。受体小鼠随机分为实验组和对照组(n=20),实验组每日地塞米松磷酸盐溶液5 mg/kg腹腔注射,对照组等体积生理盐水腹腔注射,观察小鼠移植皮肤排斥反应情况,确定移植皮肤排斥时间;术后第7日切取小鼠移植皮肤行病理学检查;术后第9日处死部分小鼠,获取脾脏及移植皮肤引流淋巴结,行流式细胞术检测。结果实验组小鼠移植皮肤的中位生存期为(24±3.062)d,显著长于对照组小鼠的(9±0.816)d(P<0.05)。石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色可见,与对照组比较,实验组移植皮肤的排斥反应显著减轻。流式细胞术检测结果显示:在脾脏组织,与对照组比较,实验组CD11b+GR1+细胞比例明显增高(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达下调(P<0.05)、白介素-10(IL-10)表达上调(P<0.05),并伴有趋化因子受体CXCR2和黏附分子CD44、CD62L表达增加(P<0.05);在引流淋巴结,与对照组比较,实验组CD11b+GR1+细胞比例显著增高(P<0.05),而CD4+T细胞比例及γ干扰素(IFN-γ)表达显著减少(P<0.05)。结论地塞米松可能通过诱导产生MDSCs,使其向移植物局部迁移并作用于CD4+T细胞,抑制其功能,从而达到减轻移植物排斥反应及延长移植物生存的效应。

糖皮质激素诱导移植耐受的免疫细胞调控效应及机制

糖皮质激素(Glucocorticoid;GC)是强有效的甾体类抗炎药和免疫抑制剂,在重症感染、休克、自身免疫病和器官移植等疾病中广泛应用。在器官移植领域GC一直发挥着基础性作用,它是器官移植围手术期免疫诱导必不可少的药物,是经典免疫抑制维持三联方案的重要组成部分,也是治疗急性排斥的首选用药。其作用广泛,能调节代谢、细胞发育和分化;作用机制复杂,不仅有经典的细胞核糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor;GCR)信号通路调节DNA的转录,还有其他多种快速作用机制调节细胞功能。本文对GC诱导移植免疫耐受的免疫细胞学调控效应及其机制做以简要综述。

未成熟树突状细胞诱导异基因嵌合体的形成

目的：证实供体来源的未成熟树突状细胞（ｉｍＤＣｓ）主动免疫受体小鼠后可诱导形成异基因嵌合体。方法：应用供体（Ｃ５７ＢＬ／６）来源的骨髓细胞在体外培养出ｉｍＤＣｓ，灭活后静脉输注受体小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ），并于输注后不同时间输注供体来源的骨髓细胞，检测异基因嵌合体的形成。同时比较ｉｍＤＣｓ一次免疫与多次免疫对诱导嵌合体形成的影响。结果：在ｉｍＤＣｓ免疫后３ｄ输注骨髓细胞可诱导异基因嵌合体的形成，并持续１００ｄ以上；在免疫后５ｄ注射骨髓细胞只能形成短暂的（＜２１ｄ）、低水平（＜１％）的嵌合状态；７ｄ后则完全不能形成嵌合。应用一次和多次ｉｍＤＣｓ免疫均能诱导形成异基因嵌合体，且维持时间均大于１００ ｄ，但其嵌合程度有显著性统计学差异（Ｐ＜０．０５）。结论：应用供体来源的ｉｍＤＣｓ主动免疫受体可诱导形成异基因嵌合体。

TLR1/2信号促CD8^+T细胞功能及其机制

目的:探讨Toll受体1/2(Toll like receptor1/2,TLR1/2)信号对荷瘤小鼠来源的CD8^+T细胞功能的影响及其可能机制。方法:利用小鼠Lewis肺癌细胞株3LL建立小鼠肺癌荷瘤模型,MACS分选小鼠脾CD8^+T细胞;体外经PBS或TLR1/2激动剂BLP刺激后,Real-time PCR和流式细胞术分别从基因和蛋白水平检测CD8^+T细胞的TLR分子表达;用ELISA和流式细胞术检测经PBS或BLP刺激后的CD8^+T细胞分泌细胞因子和增殖的能力,并用关键信号分子抑制剂分析可能的分子机制。结果:与PBS对照组相比,TLR1/2激动剂BLP不但有效上调荷瘤机体CD8^+T细胞TLR1和TLR2分子的基因水平[TLR1:(0.353±0.015)vs(0.101±0.017),P<0.01;TLR2:(0.232±0.031)vs(0.080±0.004),P<0.05]及蛋白水平(P<0.05),而且显著促进CD8^+T细胞分泌功能性细胞因子[IFN-γ:(2 375±305)vs(850±50),P<0.05;IL-2:(1 600±200)vs(350±50),P<0.05]和增殖的能力(P<0.05),这一效应依赖于NF-KB和P38通路。结论:TLR1/2信号直接作用于荷瘤小鼠的CD8^+T细胞并促进其功能,该研究既丰富了TLR的作用范围,也为基于TLR激动剂的肿瘤生物治疗提供了实验依据。

COX-2抑制剂联合舒尼替尼增强对荷瘤小鼠肾癌抑制作用的机制

目的通过COX-2抑制剂与舒尼替尼联合用药,观察其对荷RenCa肾癌BALB/c小鼠移植瘤的抑制作用,以及对小鼠外周血、脾脏、淋巴结的骨髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)与调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的影响。方法建立BALB/c小鼠RenCa肾癌皮下移植瘤模型。模型动物分为4组,每组10只,分别为舒尼替尼治疗组、COX-2抑制剂(塞来昔布)治疗组、舒尼替尼+COX-2抑制剂治疗组和空白对照组。各组按时给药并绘制肿瘤生长曲线;流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏中Treg、MDSC数目的变化;流式细胞术分选MDSC,提取蛋白质,Western blot检测STAT-3水平。结果联合用药组相较于对照组,脾脏MDSC数目明显降低(1.22%±0.15%vs.9.34%±0.58%,P<0.01),外周血MDSC数目明显降低(12.7%±0.85%vs.23.0%±1.68%,P<0.01),脾脏Treg明显降低(11.3%±1.69%vs.22.4%±2.31%,P<0.01),外周血Treg明显降低(3.30%±0.64%vs.11.9%±1.53%,P<0.01)。经流式细胞术分选后的脾脏MDSC中,联合用药组较单用药组STAT-3水平明显下降(P<0.01)。结论 COX-2抑制剂与舒尼替尼联合用药对肾透明细胞癌的抗肿瘤作用优于任何单独用药,其机制可能是通过减少免疫抑制细胞,调节机体肿瘤免疫环境,从而增强分子靶向药物的抗肿瘤效果。

口服和经皮肤途径雌激素替代治疗对手术绝经妇女围绝经症状和T淋巴细胞雌激素受体亚型表达的影响

目的研究口服和经皮肤途径的雌激素替代治疗(ERT)对手术绝经妇女围绝经症状和T淋巴细胞雌激素受体(ER)亚型表达的影响。方法手术绝经妇女随机分为使用雌二醇口服片1 mg/d(口服组)和雌二醇贴片1.5 mg/w(皮贴组),用药3个月。评估用药前后围绝经症状、血雌二醇(E_2)和卵泡刺激素(FSH)水平,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测T淋巴细胞ERα、ERβ mRNA表达,免疫荧光法和免疫印迹法检测ERα、ERβ蛋白质表达。结果口服组和皮贴组用药后围绝经症状均明显改善,血清E_2水平明显升高,FSH水平明显降低,两组间无明显差异。两组用药后T淋巴细胞ERαmRNA和蛋白质表达均明显高于用药前,ERβ mRNA和蛋白质表达有增加趋势,两组间无明显差异。结论口服和经皮肤途径的ERT均能改善手术绝经妇女的围绝经症状,推测雌激素是通过与人T淋巴细胞ERα结合后影响绝经后的T淋巴细胞功能。