OX40/OX40L在免疫应答中的作用及与疾病关系的研究

随着对OX40OX40L的深入研究,发现这对重要的协同刺激分子除了能增强CD4+T细胞、B细胞、DC细胞的扩增、成熟和产生效应功能外,还能影响CD8+T细胞的杀伤效应,能使T细胞免于凋亡,并促进更多记忆T细胞的生成。OX40OX40L在许多疾病的发生发展中也起着关键的作用,通过干预其相互作用所进行的免疫治疗已在许多动物模型上取得非常好的疗效,这为今后的临床治疗提供了理论和实验基础。

HER-2/neu胞外区的基因工程表达及其免疫避孕作用

目的:研究HER-2/neu胞外区部分片段重组蛋白疫苗在免疫避孕中的作用。方法:构建原核表达重组体pET-hECDu,在大肠杆菌中表达人HER-2/neu胞外区部分片段,经Hi-Trap亲和层析柱纯化得到重组蛋白(hECDu),以ELISA法检测其结合活性后免疫雌性小鼠。用ELISA法检测抗HER-2/neu体液免疫应答,3H-TdR掺入法检测细胞免疫应答。结果:经原核表达系统成功纯化得到与理论分子量77 ku(1 u=1 Da)相符的hECDu,并证实其可与抗HER-2/neu胞外区特异性单克隆抗体结合。该重组蛋白疫苗可诱导雌鼠产生较高水平体液及细胞免疫应答。其生育力(平均产仔数4.0±1.8)与对照组(7.8±1.3)相比明显降低,但免疫鼠产后4 d子宫及卵巢均无明显病理改变。结论:经原核表达系统成功纯化得到HER-2/neu胞外区部分片段重组蛋白,该蛋白疫苗可在小鼠中诱导产生免疫避孕效应。

未成熟树突状细胞诱导异基因嵌合体的形成

目的：证实供体来源的未成熟树突状细胞（ｉｍＤＣｓ）主动免疫受体小鼠后可诱导形成异基因嵌合体。方法：应用供体（Ｃ５７ＢＬ／６）来源的骨髓细胞在体外培养出ｉｍＤＣｓ，灭活后静脉输注受体小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ），并于输注后不同时间输注供体来源的骨髓细胞，检测异基因嵌合体的形成。同时比较ｉｍＤＣｓ一次免疫与多次免疫对诱导嵌合体形成的影响。结果：在ｉｍＤＣｓ免疫后３ｄ输注骨髓细胞可诱导异基因嵌合体的形成，并持续１００ｄ以上；在免疫后５ｄ注射骨髓细胞只能形成短暂的（＜２１ｄ）、低水平（＜１％）的嵌合状态；７ｄ后则完全不能形成嵌合。应用一次和多次ｉｍＤＣｓ免疫均能诱导形成异基因嵌合体，且维持时间均大于１００ ｄ，但其嵌合程度有显著性统计学差异（Ｐ＜０．０５）。结论：应用供体来源的ｉｍＤＣｓ主动免疫受体可诱导形成异基因嵌合体。

新发现的CXCL16趋化因子及其受体

一种新的免疫系统分子———由入侵部位的防御性免疫细胞产生的趋化因子CXCL16。这是迄今为止所发现的第二种可以膜结合方式合成的趋化因子。它属于CXC家族 ,同时具有CC家族和CX3C家族 (如Fractalkine)趋化因子的特征 ,它包含跨膜区和粘蛋白 (mucin)样结构 ,以膜结合型和分泌型两种形式存在 ,主要表达于APC表面。其受体为BONZO/CXCR6 /STRL33/TYMSR的“孤儿受体” ,该受体也是SIV/HIV的辅助受体 ,主要表达于Th1细胞、NK细胞和激活的CD8+ T细胞。CXCL16 /BONZO可能在效应T细胞的迁移、APC和CD8T细胞的相互作用。

口服和经皮肤途径雌激素替代治疗对手术绝经妇女围绝经症状和T淋巴细胞雌激素受体亚型表达的影响

目的研究口服和经皮肤途径的雌激素替代治疗(ERT)对手术绝经妇女围绝经症状和T淋巴细胞雌激素受体(ER)亚型表达的影响。方法手术绝经妇女随机分为使用雌二醇口服片1 mg/d(口服组)和雌二醇贴片1.5 mg/w(皮贴组),用药3个月。评估用药前后围绝经症状、血雌二醇(E_2)和卵泡刺激素(FSH)水平,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测T淋巴细胞ERα、ERβ mRNA表达,免疫荧光法和免疫印迹法检测ERα、ERβ蛋白质表达。结果口服组和皮贴组用药后围绝经症状均明显改善,血清E_2水平明显升高,FSH水平明显降低,两组间无明显差异。两组用药后T淋巴细胞ERαmRNA和蛋白质表达均明显高于用药前,ERβ mRNA和蛋白质表达有增加趋势,两组间无明显差异。结论口服和经皮肤途径的ERT均能改善手术绝经妇女的围绝经症状,推测雌激素是通过与人T淋巴细胞ERα结合后影响绝经后的T淋巴细胞功能。

肝素抑制T细胞活化及机制研究

目的:长期临床实践及动物实验研究发现肝素具有一定抗炎作用,本文旨在阐明其机制是否与抑制T细胞活化过程,以及影响T细胞与抗原递呈细胞间的免疫突触的形成有关。方法:本研究通过氚掺入法检测肝素对T细胞活化增殖的影响,包括丝裂原ConA,超抗原SEA作为刺激剂,此外还有特异性抗原肽;加入外源性IL-2检测肝素抑制T细胞活化与IL-2作用的关系。流式细胞术检测T细胞活化表面标志CD62L的变化;肝素干预下T细胞与抗原递呈细胞间的相互作用,以及T细胞肌动蛋白的聚集情况。结果:在肝素干预下,ConA活化T细胞增殖明显降低并体现出剂量依赖关系,另外SEA、混合淋巴细胞反应以及特异性抗原肽刺激T细胞的增殖也不同程度受到肝素的抑制,外源性IL-2不能挽救被抑制的T细胞。流式细胞检测结果提示肝素干预组T细胞上CD62L表达明显高于对照组。肝素不影响T细胞与抗原递呈细胞之间的作用,也不影响T细胞骨架重排,即免疫突触的形成。结论:肝素抑制T细胞活化及增殖,可能是其抗炎机制的一部分,但并非通过影响T细胞与抗原递呈细胞之间的作用或T细胞活化过程中骨架重排及突触形成。

趋化因子在病毒感染中的作用及意义

趋化因子是近年发现的一大类结构相似、功能多样的新型分子。其不仅与淋巴细胞迁移、炎症反应、新生血管生成、造血、肿瘤有关,越来越多的证据表明趋化因子在病毒感染的发生、发展中扮演着重要角色。病毒感染宿主细胞后可导致组成性和诱导性趋化因子表达谱的改变,这些表达水平改变了的趋化因子通过直接和间接的方式参与了病毒的致病过程;同时某些病毒可编码趋化因子样或趋化因子受体样分子,从而干扰趋化因子网络功能。研究趋化因子在病毒感染中的作用和意义,将有利于阐明病毒性疾病的发病机制和抗病毒感染新策略的制定,具有重要的理论和应用价值。

Toll样受体与动脉粥样硬化

固有免疫应答与动脉粥样硬化斑块形成有关。固有免疫识别中的模式识别受体 Toll样受体信号通路与动脉粥样硬化发病机理的关系,解释了针对外来病原体的非特异性防御以及内源性炎症分子导致动脉粥样硬化的可能机制。

终末期肾病患者血清镁与左心室质量指数的回顾性分析

目的:探讨终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)未透析患者血清镁与左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)的相关性。方法:根据研究需要随机选取我院肾脏内科212例未行透析的ESRD患者,测定其血清镁、钙、磷、全段甲状旁腺激素(intact parathyroid hormone,iPTH)等,同时行超声心动图检查,依据Devereux公式计算LVMI并根据左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)的诊断标准将研究对象分为LVH组151例和非左心室肥厚(N-LVH)组61例。结果:单因素分析显示:LVH组在磷、钙磷乘积及收缩压、舒张压、LVMI上均高于N-LVH组(P<0.05),而LVH组血红蛋白、血镁低于N-LVH组(P<0.05);LVMI与钙(r=0.171)、磷(r=0.177)、钙磷乘积(r=0.232)、舒张压(r=0.598)和收缩压(r=0.596)均呈正相关(P<0.05);与血清镁(r=−0.805)、血红蛋白(r=−0.314)呈负相关;多因素分析显示,血清镁及血红蛋白是影响LVMI升高的重要因素。结论:ESRD未透析患者血清镁与LVMI密切相关。

不同T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异

目的 在体内和体外研究SEA再次刺激后Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群的免疫反应 ,探讨CD4+ 和CD8+ T细胞亚群对超抗原SEA反应性的差异。方法 分离小鼠超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)应答性Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ 两个T细胞亚群 ,检测其对SEA再次刺激的增殖反应及产生IL 2活性。结果 Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群对SEA再次刺激所诱导的增殖反应以及产生IL 2活性的能力有显著差异 (P <0 .0 1)。结论 SEA单次刺激时Vβ3+ CD4+ 和Vβ3+ CD8+ T细胞亚群反应性相似 ,再次刺激时Vβ3+ CD8+ 呈显著低反应性。

RANTES的多聚化及其意义

RANTES可以单体、双体和多聚体等形式存在,单体和双体形式的RANTES受体为CCRI、CCR3、CCR4和CCR5,而多聚体为GAG。Glu26和Gln66在RANTES的多聚化过程中起着重要的作用。多聚体的RANTES与Jak2、Jak3和Src kinase p56(lck)等酪氨酸磷酸化有关,活化T细胞、单个核细胞及巨噬细胞,并可增强HIV的复制。

Th17细胞对调节性B细胞的分化和IL-10分泌的影响

目的:探讨Th17细胞对体外调节性B(Breg)细胞分化的调控作用。方法:分离小鼠脾脏单个核细胞,进一步分选初始T细胞,利用转化生长因子(TGF)-β和白细胞介素(IL)-6诱导其向Th17细胞分化后,与初始B细胞共培养,体外利用脂多糖(LPS)或抗-IgM抗体诱导初始B细胞向Breg分化。检测Th17细胞对CD19^+CD5^+CD1d^+和CD19^+CD11b^+Breg细胞分化的影响,以及对其分泌IL-10等细胞因子和免疫球蛋白的影响。结果:Th17细胞可抑制CD19^+CD5^+CD1d^+Breg细胞分化,并抑制IL-10的分泌,对TGF-β、免疫球蛋白IgG、IgM和IgA分泌并无明显影响。结论:Th17细胞体外可抑制Breg细胞分化和IL-10的分泌。

电转染技术结合初免后加强免疫策略增强结核杆菌核酸疫苗免疫原性的研究

目的研究电转染技术结合初免后加强免疫策略能否增强结核杆菌核酸疫苗的免疫原性。方法将编码结核杆菌的Ag85A和ESAT-6蛋白抗原的基因分别插入到质粒pVAX1载体中，构建成HG85和HG6两种核酸疫苗。每只BALB／c小鼠肌肉注射10μg核酸疫苗，同时于注射部位施加方型波电脉冲促进质粒DNA体内转染；进行3次初免，再用相应蛋白质抗原或卡介苗加强免疫。结果肌肉注射10μg核酸疫苗加电转染能诱导出与不用电转染接种100μg核酸疫苗相似或更强的抗体免疫应答。初免后采用相应蛋白加强后小鼠产生的免疫应答偏向于TH2型，血清特异性抗体的几何平均滴度比加强前提高5—76倍。而用卡介苗加强免疫，产生的免疫应答偏向TH1型。结论采用电转染技术结合蛋白质或卡介苗加强免疫策略，能显著增强结核杆菌核酸疫苗在动物体内的免疫原性。

病毒性心肌炎小鼠心肌组织中趋化因子表达谱的改变及其意义

目的 研究病毒性心肌炎 (VMC)小鼠心肌组织趋化因子 (ChKs)表达谱变化 ,探讨ChKs在VMC发病中的可能作用及意义。方法 B3型柯萨奇病毒 (CVB3)腹腔注射雄性BALB c小鼠 ;RT PCR定性和实时定量分析心肌组织MCP 1、IP 10、Ltn和FKN等 12种ChKs表达。病理切片和血清CK MB分析判定病变和病损程度。结果 ( 1)在所检测的 12种ChKs中 ,VMC组呈阳性表达的有 9种 ,显著多于正常组心肌组织的 6种 ,有 3种ChKs(BLC、Eot和LARC)两组均未检出 ;( 2 )VMC组 9种阳性表达的ChKs中CVB3诱导性表达的为MIP 2、MIG和IP 10 ,6种组成性表达的ChKs在VMC时上调表达的有MIP 1β、MCP 1、MCP 2、Ltn等 4种 ,下调表达的有RANTES ,与正常对照相比未呈现明显差异的为FKN。 ( 3)ChKs的表达消长存在一定的差异 ,感染 4d后MIP 2等达高峰 ,随后下降 ;9d后出现MCP 1和RANTES表达上升峰 ;FKN在感染 9d内表达较稳定。 ( 4)亚急性早期、中期、中后期和晚期心肌组织ChKs表达谱有明显区别 ,各期ChKs表达谱中优势表达的ChKs分别为IP 10、IP 10、MCP 1、MCP 1。结论 VMC心肌组织ChKs呈成簇性方式改变 ,表达谱改变的复杂性可能与发病机制的复杂性有关 ,优势表达的ChKs可能在病毒性心肌炎发病中扮演着更重要的角色。

雌二醇对去卵巢小鼠脾细胞雌激素受体表达和辅助性T细胞1和2平衡的影响

目的研究不同浓度雌二醇（E2）对去卵巢小鼠脾细胞雌激素受体（ER）及辅助性T细胞1（Th1）和辅助性T细胞2（Th2）之间平衡的影响。方法将小鼠脾细胞分为7组：青年组、假手术组、去卵巢对照组及去卵巢＋E2（10^-11mol/L、10^-10mol/L、10^-9mol/L、10^-8mol/L）组。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测ERα、ERβmRNA的表达;酶联免疫吸附法（ELISA）法检测细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-4（IL-4）水平,以了解Th1与Th2的平衡关系。结果去卵巢对照组ERα、ERβmRNA水平分别为0．68±0．15和0．70±0．17,较青年组（0．95±0．21和0．93±0．1 9）及假手术组（0．98±0．28和0．94±0．20）下降（P＜0．05和P＜0．01）;去卵巢＋E2（10^10mol/L）组ERα、ERβ的表达分别为0．95±0．19和0．90±0．29,较去卵巢对照组升高（P＜0．05和P＜0．01）。去卵巢对照组IFN-γ、IL-2分别为（360．36±8．64）ng/L和（1485．49±5．01）ng/L,较青年组[（93．46±4．81）ng/L和（704．37±5．32）ng/L]及假手术组[（92．47±2．95）ng/ L和（716．84±1 6．48）ng/L]升高（均为P＜0．01）;而去卵巢对照组IL-4水平[（258．11±6．00）ng/L]低于青年组[（269．77±8．44）ng/L]和假手术组[（270．18±10．34）ng/L]（均为P＜0．05）。去卵巢＋ E2（10^10mol/L）组的IFN-γ、IL-2分别为（94．05±7．17）ng/L和（712．15±13．84）ng/L,低于去卵巢对照组（均为P＜0．01）,IL-4为（269．76±2．05）ng/L,高于去卵巢对照组（P＜0．05）。结论不同浓度E_2对去卵巢小鼠脾细胞ERα、ERβ基因表达起不同的调节作用：在生理范围内为正向调节,超生理范围为负向调节。小鼠去卵巢后影响脾细胞Th1和Th2的平衡,表现为Th1漂移。生理浓度的E2能部分逆转Th1漂移,部分恢复Th1和Th2的平衡。

苦瓜蛋白诱导A549肺癌细胞凋亡及对相关蛋白的影响

[目的]观察苦瓜蛋白对A549非小细胞肺癌细胞凋亡的影响,探讨苦瓜蛋白对PI3K/AKT细胞信号传导通路中相关蛋白分子的作用影响。[方法]以梯度浓度苦瓜蛋白处理A549细胞48h,流式细胞术(TUNEL方法)检测A549细胞凋亡;10μg/ml苦瓜蛋白处理A549细胞,分别作用不同时间(0h、6h、12h、24h、48h、72h)后,提取细胞总蛋白,Westernblot检测AKT信号通路中AKT及p-AKT等信号分子表达的变化。[结果]苦瓜蛋白可以明显诱导A549细胞凋亡,以10μg/ml苦瓜蛋白处理组A549细胞凋亡率最高(50.15%)。苦瓜蛋白处理A549细胞12h后,p-AKT及AKT表达明显下调,呈现时间—效应依赖关系。[结论]苦瓜蛋白可以诱导A549细胞发生显著凋亡,其机制可能是部分通过抑制AKT蛋白的表达及其磷酸化,抑制AKT信号传导通路,导致肿瘤细胞凋亡。

不同浓度雌二醇对去卵巢小鼠T淋巴细胞凋亡的影响及作用机制

目的研究不同浓度雌二醇（E2）对去卵巢小鼠脾脏T淋巴细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法分离出小鼠脾脏T淋巴细胞，分为10组，分别为青年组、假手术组、去卵巢对照组、去卵巢＋E2（10^-11mol／L）组、去卵巢＋E2（10^-10mol／L）组、去卵巢＋E2（10^-8mol／L）组、去卵巢＋E2（10^-6 mol／L）组、去卵巢＋E2（10^-10mol／L）＋雌激素受体拮抗剂ICI182 780（10^-7mol／L）组、去卵巢＋E2（10^-10mol／L）＋1甲基4-苯基-四氢吡啶（MPP，10^-6mol／L）组、去卵巢＋E2（10^-10mol／L）＋四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC，10^-6mol／L）组。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，Western blot方法检测各组细胞雌激素受体（ER）α、ERβ、Bax、Bcl-2蛋白表达及细胞核中P65蛋白水平。结果去卵巢对照组细胞凋亡率为（19．4±2．5）％，高于青年组（14．6±2．4）％和假手术组（14．5±2．3）％，Bcl-2、核内P65蛋白水平分别为0．25±0．05、0．09±0．01，低于青年组（0．40±0．07、0．15±0．02）和假手术组（0．38±0．05、0．15±0．02），均P〈0．01；去卵巢＋E2（10^-10mol／L）组凋亡率为（16．6±1．8）％，低于去卵巢对照组（P〈0．05），Bcl-2及核内P65蛋白水平高于去卵巢对照组（P〈0．01），而去卵巢＋E2（10^-8mol／L、10^-6mol／L）组凋亡率高于去卵巢对照组（分别为P〈0．05、P〈0．01）。去卵巢对照组ERα、ERβ蛋白水平分别为0．23±0．01、0．22±0．03，低于青年组（0．27±0．02、0．29±0．04）和假手术组（0．28±0．03、0．29±0．02），去卵巢＋E2（10^-11mol／L、10^-10mol／L、10^-8mol／L）组ERα、ERβ蛋白水平均高于去卵巢对照组，而去卵巢＋E2（10^-6mol／L）组（0．09±0．01、0．14±0．02）低于去卵巢对照组（均P〈0．01）。去卵巢＋E2（10^-10mol／L）＋ICI182 780组及去卵巢＋E2（10^-10mol／L）＋PDTC组凋亡率与去卵巢对照组差异无统计学意义，去卵巢＋E2（10^-10mol／L）＋MPP组凋亡率与去卵巢＋E2（10^-10mol／L）组比较，差异无统计学意义。结论去卵巢小鼠T淋巴细胞凋亡增多，E2对去卵巢小鼠T淋巴细胞的凋亡呈剂量依赖的双相调节作用，生理范围内可部分逆转去卵巢小鼠T淋巴细胞凋亡，而超过生理范围则增加其凋亡。生理剂量E2可能通过ERβ及核因子-κB途径抑制去卵巢小鼠的T淋巴细胞凋亡。

补体在ANCA相关性血管炎中作用的研究进展

抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)相关性血管炎(ANCA-associated vasculitis,AAV)是一组影响中小血管的、严重危及生命的系统性自身免疫性疾病。AAV的病因和发病机制是多因素的,最初人们并不认为补体系统与AAV的发展有关。然而,动物及临床研究表明补体系统的激活,特别是旁路途径,对AAV的发展至关重要,补体激活产物C5a具有核心作用。本文主要对补体系统在AAV发病机制中的研究进展进行综述。