葡萄球菌肠毒素B突变体的纯化及其活性

目的 从基因重组菌中纯化葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体及其野生型蛋白 ,研究其毒力及抗原性。方法 表达野生型SEB蛋白 (SEB N)和SEB突变体 (SEB M2 3、SEB 1 50 )的 3株重组菌经IPTG诱导 ,反复冻融后 ,制备细菌裂解液。将初步纯化的抗SEB抗血清与CNBr活化的Sepharose 4B作共价偶联 ,制成亲和层析柱。分柱纯化SEB N、SEB M2 3和SEB M1 50蛋白。用SDS PAGE和酚试剂改良法对纯化蛋白作纯度鉴定和定量 ;用双向免疫扩散试验和ELISA法作抗原性鉴定 ;用小鼠致死性试验作毒力鉴定。结果 SDS PAGE和双向免疫扩散试验表明 ,3种纯化蛋白均为单一条带 ,且都能与抗SEB抗体形成明显的沉淀线。ELISA表明SEB N、SEB M2 3、SEB M 1 50与抗SEB抗体有相似的结合力 ,提示 2 3位突变和 1 50位突变并未改变SEB的抗原表位。小鼠致死性试验表明 ,LPS激发的 3组小鼠 ( 6只 /组 ) ,分别用上述纯化蛋白攻击 ( 1 0 μg/只 ) ,SEB N组死亡率为 5/6;SEB M1 50组死亡率为 4 /6;SEB M2 3组死亡率为 0 /6;即使SEB M 2 3剂量增至 2 0 0 μg ,小鼠仍无死亡。结论 获得了SEB N、SEB M2 3和SEB M1 50 3种纯化蛋白 ,其中SEB突变体都保留了抗原性 ;SEB M 2 3与野生型SEB相比 ,毒力明显下降。为进一步研究其作为新型淋巴细胞激?

抗CD4单抗增强抗CD3单抗/IL-2活化的肿瘤特异性T细胞的抗瘤活性

目的探讨抗CD4mAb增强抗CD3mAb刺激的肿瘤特异性T细胞增殖和杀瘤活性的作用。方法将肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞,采用4种不同的方案培养1单独加2×104U/LrIL2IL2组2单独加抗CD3mAb抗CD3组3加抗CD3mAb48h后,再加入抗CD3mAb和2×104U/LrIL2抗CD3+IL2组4同时加抗CD3mAb和抗CD4mAb48h后,再加入抗CD3mAb、抗CD4mAb和2×104U/LrIL2抗CD3+IL2+抗CD4组。然后分别检测4组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果抗CD3+IL2组细胞的3HTdR掺入量在第6,12和20d分别为:22045、13986和1931;抗CD3+IL2+抗CD4组细胞的3HTdR掺入量在第6、12和20d,分别为46193、31047和7443,后者明显高于前者P0.05。在培养12d时,抗CD3+IL2组的细胞对FBL3细胞株的最大杀伤率为83.6%;抗CD3+IL2+抗CD4组细胞的最大杀伤率为91.7%。细胞表型:FACS分析表明,抗CD3+IL2+抗CD4组培养12d的细胞,99%以上为Thy1.2+细胞,且CD4+、CD25+细胞的百分率均高于抗CD3+IL2组。结论抗CD4mAb对抗CD3mAb刺激、IL2诱导的肿瘤特异性T细胞的增殖和杀瘤活性具有增强作用。

快速诊断幽门螺杆菌感染的研究

目的 比较几种诊断幽门螺杆菌 (H .pylori)感染的快速检测方法 ,并探讨其临床应用价值。 方法 131份胃黏膜活检标本 ,依次应用快速尿素酶试验、直接涂片镜检、聚合酶链反应 (PCR)扩增ureA基因片段等 4种方法检测H .pylori。用配对资料的 χ2 检验对各方法的检出阳性率进行两两比较。结果 4种方法的检出阳性率分别为 :快速尿素酶试验 76 .6 % ,分离培养 71% ,直接涂片 4 8.1% ,PCR 78.5 %。相关 χ2 检验结果表明PCR的阳性率高于分离培养 ,但其与尿素酶试验无差别。结论 PCR的敏感性和特异性均高于其他检测方法 ;可作为H .pylori感染的可靠分子诊断方法 :快速尿素酶试验虽特异性较差 ,但其具有简便和敏感的特点 ,仍可作为常规检查H .pylori感染的初筛试验 ;直接涂片染色阳性率过低 ,一般不适合单独作为H .

幽门螺杆菌感染BALB/c小鼠模型的研究

目的 建立稳定的Hp感染BALB/c小鼠模型 ,用于Hp致病、免疫和防治的研究。 方法 选用临床分离株 ,应用外科手术法向小鼠胃内直接接种Hp菌液 0 2ml(10 9CFU/ml) ;接种后不同时间取小鼠胃粘膜组织进行细菌学和病理学检查。结果 接种后 2～ 8周 ,小鼠胃内均可分离到Hp ,Hp分离阳性率为 95 %。病理学检查显示鼠胃粘膜明显炎症。感染鼠用阿莫西林治疗后 ,鼠胃组织Hp培养均转阴性。结论 使用Hp鼠胃接种法 。

幽门螺杆菌毒力因子的研究进展

幽门螺杆菌与多种胃部疾病有密切的关系,人群感染率在50％以上。幽门螺杆菌可表现为多重感染,感染后治愈较为困难,可能与其复杂的多因素致病机制相关。虽然疾病的发生和严重程度与宿主、环境因素有关,但其各种毒力因子的遗传多样性亦起到重要作用。现已发现幽门螺杆菌有多种毒力因子,分别由不同的基因编码。对该菌全基因测序工作的完成,为探讨毒力基因及其相关功能提供了研究基础。cagA、vacA、ure是非常重要的毒力基因,分别编码细胞毒素相关蛋白、细胞空泡毒素和尿素酶。在不同菌株中,几种基因的表达各不相同,从而表现出不同的毒力,引起不同的临床表现。

小鼠CTL体外非特异性扩增对其杀瘤活性的影响

目的 在体外用抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和白细胞介素 2 (IL 2 )扩增肿瘤特异性CTL ,为肿瘤过继治疗提供足够数量的、具有高度杀瘤活性的效应细胞。方法 采用两种方案培养肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞。 (1)抗CD3单抗刺激 48h后 ,加入抗CD3单抗和 2 0U mlrIL 2 (抗 CD3+IL 2组 ) ;(2 )抗CD3单抗和抗CD2 8单抗同时刺激 48h后 ,加入抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和 2 0U mlrIL 2 (抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组 )。分别检测 2组效应细胞的增殖水平、杀瘤活性及表型。结果 抗 CD3+IL 2组细胞的3H TdR掺入量在第 6天、12天、2 0天分别为 2 2 12 6、5 42 6、2 0 72 ,抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组细胞的3H TdR掺入量在第 6天、12天、2 0天分别为 32 16 8、12 92 2、32 6 5 ,后者明显高于前者。在培养 12d时 ,抗 CD3+IL 2组细胞对FBL 3的最大杀伤活性为 6 6 .4% ,抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组细胞对FBL 3的最大杀伤活性为 77.8%。细胞表型FACS分析结果表明 ,抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组培养 12d后的细胞 90 %以上为Thy1.2 + 细胞 ,且CD2 5 + 细胞在抗 CD3+抗 CD2 8+IL 2组、抗 CD3+IL 2组分别为 2 3.0 0 %、8.15 %。结论 抗CD3单抗、抗CD2 8单抗和低剂量IL 2同时非特异性刺激 ,可获得大量扩增的、具有高度杀瘤活性的肿瘤特异性CTL。