可溶性组织因子的基因克隆、表达与性质研究

组织因子是外源性凝血途径的启动因子,为膜受体蛋白,胞外区的促凝血功能几乎与完整分子相同,因此采用重组DNA技术制备组织因子的胞外区分子,并对其活性进行研究,以便替代兔脑粉用于PT检测。以人胎盘总RNA为模板,用RT-PCR扩增组织因子胞外区cDNA基因,经序列分析证实后在大肠杆菌中表达,产物形成包涵体。表达产物经复性、离子交换和凝胶过滤色谱纯化后与磷脂结合,进行促凝血试验。结果表明在磷脂存在下,可溶性TF有明显的促凝血活性,可以取代兔脑粉用于PT检测。

大鼠局灶性脑缺血早期脑内HO-1蛋白的表达

目的 研究局灶性脑缺血血红素氧合酶 (HO)在脑内的表达。方法 采用大鼠大脑中动脉栓塞致脑缺血 ,对缺血早期不同时间点进行HO 1免疫组化及病理学研究 ,并应用计算机图像分析技术计算HO 1表达的强弱。结果 栓塞后 3 0min皮质及海马即有HO 1阳性神经元和胶质细胞 ,且随着时间推移 ,HO 1的表达逐渐增强 ,HO 1主要分布在灶周皮质、梗死皮质区、梨状皮质内的神经元及胶质细胞 ,丘脑、下丘脑、海马齿状回的神经元及对测海马也出现HO 1的表达。结论 脑缺血时脑内HO

尿激酶受体反义RNA抑制人乳腺癌细胞的侵袭作用

将尿激酶受体 u PAR反义 RNA表达质粒 p URAS以脂质体法转染高侵袭性人乳腺癌细胞株 MDA- MB- 2 31 ,G41 8筛选抗性克隆 .Northern印迹法检测 u PAR反义 RNA的表达 ,RT- PCR法检测 u PAR的表达 ,牛奶板法测定细胞培养上清中纤溶活性 .改良 Boyden小室模型和裸小鼠乳房脂肪垫接种试验分别检测肿瘤细胞体外和体内侵袭能力 .反义克隆细胞能表达 u PAR反义RNA,其 u PAR表达水平及培养上清中纤溶活性明显降低 .反义细胞克隆体外侵袭能力比原代细胞 MDA- MB- 2 31和转染载体细胞克隆显著降低 .裸小鼠体内侵袭实验表明 ,反义细胞克隆的成瘤性、生长性和侵袭性均显著受到抑制 .u PAR至少在一部分恶性乳腺癌侵袭行为中发挥重要作用 ,反义 RNA可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段 .

尼莫地平对阿尔茨海默病大鼠脑组织NO、NOS含量及行为学的影响

目的 :探讨尼莫地平对阿尔茨海默病 (AD)大鼠脑组织一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)浓度及行为学改变的影响。方法 :SD大鼠 30只 ,随机分为空白对照组 ,AD模型组和尼莫地平组 ,采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术 ,尼莫地平组和AD模型组用鹅膏蕈氨酸 (IBO) 1μl(5 μg)损毁大鼠双侧迈内特基底核 (nbM )建立AD动物模型 ,空白对照组以 0 .1mol/LpH7.4PB液代替IBO。尼莫地平组给予尼莫地平 0 .5mg/kg ,空白对照组和AD模型组以生理盐水代替尼莫地平 ,连续灌胃 6 0d ,每d 2次 ,每次 2ml。做迷宫试验及跳台试验测学习记忆能力 ,然后将大鼠断头处死 ,分离海马及大脑皮质 ,分别检测NO、NOS含量。结果 :AD模型组较空白对照组学习记忆能力显著降低 ,海马及大脑皮质NO、NOS含量显著升高 ;尼莫地平组较AD模型组学习记忆能力显著升高 ,海马及大脑皮质NO、NOS含量显著降低。结论 :用IBO损毁大鼠双侧nbM可建立AD动物模型 ,尼莫地平可显著改变AD模型大鼠的学习记忆能力 ,降低海马及大脑皮质NO、NOS含量。

重组葡激酶在大鼠静脉注射给药后的药代动力学

目的 研究重组葡激酶 (r Sak)在大鼠静脉注射后的药代动力学。方法 大鼠静注r Sak 10 0、30 0与90 0 μg·kg-1,采用生物免疫发色底物法和牛奶板溶圈法测定活性 ,以单抗测定含量。结果 r Sak静注后 ,在大鼠体内过程符合二室模型。测定活性表明 ,3种剂量r Sak的T1/2α分别为 (1.79± 0 .76 )、(1.99± 0 .6 0 )及(2 .2 2± 1.0 1)min ;T1/2 β分别为 (2 0 .2 4± 11.15 )、(2 5 .32± 9.2 6 )及 (2 6 .45± 11.6 4)min ;AUC0 T 分别为(182 .88± 6 4.0 7)、(376 .2 6± 71.14)及 (1311.4± 36 9.4)HI·min·mL-1;测定含量表明 ,3种剂量r Sak的T1/2α分别为 (1.5 8± 0 .86 )、(1.2 2± 0 .5 7)及 (1.49± 0 .47)min ;T1/2 β分别为 (16 .5 8± 6 .75 )、(12 .94± 3.13)及 (15 .5 4± 3.88)min ;AUC0 T分别为 (2 .0 5± 0 .75 )、(5 .6 5± 2 .5 3)及 (13.18± 5 .43) μg·min·mL-1。结论 r Sak在大鼠体内过程符合二室模型 ,经方差检验 ,各剂量间药代动力学参数均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。

胰岛素、地塞米松、甲基异丁基黄嘌呤对脂肪细胞分化过程及PAI-1基因表达的影响

目的 通过体外培养的 3T3 L1细胞分化模型 ,研究胰岛素 (Ins)、地塞米松 (Dex)和甲基异丁基黄嘌呤(Mix)对脂肪细胞分化过程及纤溶酶原激活剂抑制剂 1(PAI 1)基因表达的影响。方法 观察Ins与Dex及Mix加入前后脂肪细胞形态的变化 ,并应用RT PCR方法 ,在不同浓度的Ins、Dex和Mix及其不同组合的条件下 ,对3T3 L1细胞分化为脂肪细胞过程中PAI 1mRNA表达水平进行相对定量分析。结果 Ins与Dex及Mix显著促进了 3T3 L1细胞向脂肪细胞分化 ,Ins、Dex及其组合Ins加Dex对PAI 1基因的表达有促进作用 ,其中尤以0 .15 μmol/LIns加 0 .1μmol/LDex的作用最为显著 ,且有叠加效应。 结论 Ins与Dex加Mix对 3T3 L1细胞分化为脂肪细胞起重要作用 ,同时Ins、Dex对PAI 1基因表达也有显著影响 。

Miyabenol C和Kobophenol A促MCF-7细胞生长作用途径

目的 检测miyabenolC(MiyC)和kobophenolA(KobA)是否通过依赖雌激素受体 (ER)发挥促雌激素受体阳性细胞MCF 7生长的作用。方法 构建雌激素受体反义表达质粒 (pCASER) ,转染MCF 7细胞株 ,经G418筛选 ,PCR、Westernblot鉴定筛选出阳性表达克隆 (MTASER)。运用MTT法检测药物对细胞生长状况的影响。运用放射竞争结合实验检测药物与ER的结合。结果 MiyC和KobA对MCF 7细胞的促生长作用大于对MTASER细胞的作用 ;MiyC和KobA均可竞争性抑制ER与 17β 雌二醇的结合。 结论 在一定浓度范围内 ,MiyC和KobA依赖ER发挥促细胞生长的作用。

尿激酶受体反义核糖核酸抑制肺癌细胞的侵袭转移

目的 用反义核糖核酸 (ＲＮＡ)封闭尿激酶受体的表达 ,抑制人肺癌细胞株 95Ｄ的侵袭转移能力 ,验证反义ＲＮＡ技术在抗肿瘤中的作用。方法 将尿激酶受体 (ｕＰＡＲ)反义核糖核酸表达质粒转染具有高度侵袭转移能力的人肺癌细胞株 95Ｄ ,利用改良Ｂｏｙｄｅｎ小室分析转染细胞的体外侵袭能力 ,并将转染细胞接种裸小鼠以观察其体内转移能力。结果 Ｇ41 8筛选后 ,鉴定出 2个表达ｕＰＡＲ反义ＲＮＡ细胞克隆 ,ｕＰＡＲ蛋白质水平相应降低。表达ｕＰＡＲ反义ＲＮＡ的细胞克隆的体外侵袭能力及在裸小鼠体内的肺转移能力较亲本细胞和空载体对照细胞均有显著性降低 (Ｐ < 0 .0 5)。结论 抑制尿激酶受体的表达 ,能够有效抑制肺癌的侵袭转移 ,反义ＲＮＡ技术在抗肿瘤治疗中有良好的应用前景。

GABA_B受体及其临床意义

GABA_B 受体是一种GABA受体亚型 ,它存在于外周组织和中枢神经系统 ;