从甲型H1N1流行性感冒防控中领略多学科间交叉、融合的重要性

2009 年3—4月, 墨西哥暴发了一次原因不明的肺炎, 仅墨西哥城就发生数百例, 其中59例死亡。同年4月15日美国首次出现了由新“猪流行性感冒（ 简称流感） ”病毒引起的感染病例, 证实为一种过去在人及猪中均未出现过的新甲型H1N1流感病毒 , 在墨西哥暴发流行的肺炎病原就是该新甲型H1N1流感病毒 , 现正式将其命名为2009 甲型H1N1 流感病毒。

结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度的相关性

目的 研究结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度强弱之间的关系。 方法 应用绝对浓度法测定 5 8株结核分枝杆菌对 4种一线抗结核药物的药敏特性 ,对耐利福平结核分枝杆菌的耐药谱进行分析。同时对含有核心突变区的结核分枝杆菌rpoB基因片段进行PCR扩增和DNA测序 ,分析rpoB基因突变与多重耐药的关系 ,以及突变位点和突变性质与利福平耐药强弱的相关性。结果 5 8株结核分枝杆菌中 ,利福平耐药株 36株 ,敏感株 2 2株。 36株耐药株均存在rpoB基因突变 ,其中 88.9% (32 / 36 )至少对利福平和异烟肼同时耐药。 90 .0 %的利福平高度耐药株 (18/ 2 0 )与rpoB基因 5 31位和 5 2 6位密码子突变相关。密码子 5 31位和 5 2 6位各有 1株双碱基突变 ,且均为多重耐药株。结论 结核分枝杆菌rpoB基因突变所致的利福平耐药株大部分对异烟肼耐药 ,因此单独检测rpoB基因突变即可初步筛选多重耐药的结核分枝杆菌 ;

氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞旁分泌活化途径的抑制作用

目的 观察氧化苦参碱对大鼠激活肝星状细胞 (HSC)这一旁分泌活化途径的影响。方法 分离正常及CCl4损伤肝库普弗细胞 (KC) ,进行体外培养 ,收集损伤肝KC条件培养液 (IKCM )及药物 (氧化苦参碱 ,Oxy)干预后的条件培养液 (Oxy IKCM ) ,以IKCM及Oxy IKCM添加于原代培养的未活化HSC培养体系中 ,观察Oxy对KC旁分泌激活HSC的影响 ,生物学方法检测Oxy对活化的KC分泌TGFβ1的影响。结果 急性损伤肝KC对HSC的增殖有促进作用 ,氧化苦参碱可抑制KC对HSC增殖的促进作用 ,并可抑制活化KC分泌的TGFβ1。结论 氧化苦参碱可通过抑制旁分泌途径抑制HSC活化及活化KC分泌的TGFβ1。

氧化苦参碱在鸭原代肝细胞中抗鸭乙肝病毒(DHBV)作用的研究

通过建立鸭原代肝细胞-DHBV感染模型研究氧化苦参碱抗DHBV的作用。分别在DHBV感染前、感染同时以及感染后给药，利用打点杂交、Southern印迹核酸杂交和荧光定量PCR方法分别检测培养细胞上清及细胞内病毒核酸，观察氧化苦参碱在病毒感染的各个环节所起的抗病毒作用。实验结果显示：1mg／mL氧化苦参碱处理细胞后，鸭原代肝细胞培养上清及细胞内的DHBV核酸明显低于病毒感染对照组，病毒抑制率达91．6％；在病毒感染同时加药对病毒的抑制率可达98．5％；感染后持续用药能使不同培养天数的鸭肝细胞内的DHBV核酸降低60．5％～96．6％；氧化苦参碱与DHBV共孵育后，可以使病毒感染力下降69．6％。结果说明氧化苦参碱可以在DHBV感染鸭原代肝细胞的多个环节，包括病毒吸附、进入细胞及细胞内复制等方面发挥抗病毒作用。

两性霉素B所致肾小管酸中毒的临床分析

目的 :观察长期应用两性霉素B所致肾小管酸中毒 (RTA)的发生率 ,探讨其影响因素及防治原则。方法 :1995年～ 2 0 0 1年间我院应用两性霉素B治疗的隐球菌性脑膜炎病人 5 8例 ,观察其用药前后的临床表现、尿量、尿 pH值以及血、尿电解质变化 ,不典型者通过氯化铵试验证实RTA的存在。结果 :5 8例病人中有 8例发生RTA ,两性霉素B相关性RTA的发生率为 14 % ,出现RTA时累积剂量为 (2 915±s 2 30 4 )mg ,72 8～ 8135mg ,通过两性霉素B减量或停药 ,或者肾毒性药物如甘露醇、磺胺和氨基糖苷类药物的减量或停药 ,可使肾小管酸化功能好转。结论 :RTA的发生和两性霉素B的剂量、肾毒性药物的合用有关。减少或停用上述药物 。

基于丙型肝炎病毒NS5B基因序列分析的基因分型

目的 :建立基于丙型肝炎病毒 (HCV)NS5B基因序列分析的基因分型方法 ,对上海地区慢性丙型肝炎进行基因分型。方法 :用HCVRNA实时荧光定量检测试剂盒对慢性丙型肝炎患者血清标本的HCVRNA水平进行定量分析。用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和套式 PCR扩增HCVRNA阳性的 4 1份标本的部分HCVNS5B区基因 ,PCR产物经回收、纯化后直接进行测序分析。从GenBank中下载 2 5份不同基因型的HCV原型序列 ,用NS5B区 2 2 2bp的基因片段构建系统进化树 ,对临床标本相应的HCVNS5B区序列进行分析。结果 :基于HCVNS5B基因序列的系统进化树分析 ,可成功地对本组 4 1份标本进行基因分型。分型结果显示 ,1b型占 85 .4 % (35 / 4 1) ,2a型占 12 .2 0 % (5 / 4 1) ,3a型占 2 .4 4 % (1/ 4 1)。结论 :基于HCVNS5B区基因序列的系统进化树分析是一种可靠和方便的HCV基因分型方法。上海地区的HCV基因型以

耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变位点的分析

目的 研究上海地区耐利福平结核分支杆菌rpoB基因的突变特点 ,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义。方法 对 5 8株结核分支杆菌rpoB基因片段 (约 2 13bp)进行PCR扩增 ,其中包括核心突变区的 6 9个碱基 ,并对PCR产物进行DNA测序。其中耐药株 36株 ,敏感株 2 2株。结果 所有 5 8株中 ,36株耐药株均存在rpoB基因突变 ,氨基酸突变率 5 31位为 47.2 % ,5 2 6位为 2 5 .0 % ,2 2株敏感株均无突变。 结论 rpoB基因核心突变区发生突变是结核分支杆菌对利福平耐药的主要原因 ,其中 5 31位丝氨酸和 5 2

聚乙二醇干扰素治疗丙型肝炎的新进展

慢性丙型肝炎是一种严重威胁人类健康的疾病。聚乙二醇干扰素作为一种最近进入临床应用的药物 ,由于其独特的药动学特点在治疗慢性丙型肝炎的临床试验中显示出比普通干扰素更好的疗效。而聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗目前被证明是治疗慢性丙型肝炎的最佳疗法。

恩替卡韦耐药乙型肝炎病毒株的出现和消失

目的1例拉米夫定耐药患者在接受恩替卡韦治疗过程中出现恩替卡韦耐药相关性变异,继续治疗后恩替卡韦耐药株自动消失,并发生HBeAg血清学转换,对该例患者HBV耐药株的动态变化进行了动态观察。方法收集该患者的系列血清标本及血清HBV DNA、转氨酶等系列临床数据,采用血清HBV DNA的PCR扩增与直接测序,限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析,RT序列的克隆与测序等方法,检测HBV耐药株的比例及动态变化。结果该患者在应用恩替卡韦治疗前就已经存在拉米夫定耐药株(rtL180M+rtM204V),在恩替卡韦治疗后拉米夫定耐药株一度被抑制,随着治疗时间的延长,拉米夫定耐药株的比例又占主导地位。在此基础上,于恩替卡韦治疗第128周,选择出恩替卡韦耐药株(rtL180M+rtM204V+rtT184L),临床上伴随有ALT和HBV DNA水平的反弹。该例患者在发生恩替卡韦耐药后继续接受恩替卡韦治疗,恩替卡韦耐药株自行消失,HBV DNA转阴(套式PCR方法),ALT复常,并出现HBeAg血清学转换。结论恩替卡韦可有效地治疗拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者,但长期单药治疗可出现恩替卡韦耐药;在出现恩替卡韦耐药后,继续应用恩替卡韦仍然有效,甚至可发生HBeAg血清学转换和HBV DNA的清除。在恩替卡韦治疗过程中,在出现恩替卡韦变异株之前,可能需要先出现拉米夫定耐药株,在此基础上再选择出恩替卡韦耐药株。

关于头孢菌素类药物皮试问题的探讨

目前在医疗单位中,对头孢菌素类药物是否应进行皮肤过敏试验一直存在争议,为此华山医院传染科张永信教授从临床实际出发,对这一问题提出了自己的看法,呼吁卫生管理部门应正视头孢菌素类药物的安全性问题,拟定相关规定,以保障患者用药安全。

多位点酶切联合SSCP方法检测结核杆菌inhA基因突变

目的 建立一种简便而有效的方法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药基因inhA突变。方法 收集结核杆菌临床菌株48株,其中异烟肼敏感株25株,耐药株23株。抽提临床菌株DNA和H37Rv标准株DNA,聚合酶链反应(PCR)方法扩增inhA基因,产物纯化后用限制性内切酶Hae Ⅱ酶切,酶切片段用单链多态构象分析(SS-CP)方法检测其单链构象。发现单链构象改变的PCR产物进行DNA测序。结果 48株菌株中,25株敏感株中未见inhA基因单链构象差异,23株耐药株中inhA基因突变率为21.8％。新发现的错义突变有:A26E、R27K、V28A、Q32A、L54V和S72T。结论 应用限制性内切酶Hae Ⅱ改良的聚合酶链反应—单链多态构象分析(PCR—SSCP)技术适用于结核临床菌株inhA基因突变的筛选。inhA基因突变位点呈多样性。

磷酸奥司他韦治疗流行性感冒疑似患者的临床研究

目的研究流行型感冒(流感)季节磷酸奥司他韦治疗临床诊断的流感疑似患者的安全性和耐受性。方法采用随机、对照、开放性研究,入选病例52例,随机分为2组。治疗组(26例)服用磷酸奥司他韦75mg,bid,共5天;对照组(26例)服用症状缓解药物复方盐酸伪麻黄碱缓释胶囊。结果治疗前两组患者的病情严重程度无显著性差异(P>0.05)。治疗后:(1)治疗组发热持续时间比对照组平均缩短25h,平均缓解时间分别为39.49±21.87h和63.63±29.47h,有显著性差异(F=255.60,P<0.0001)。(2)两组其他症状总评分AUC有显著性差异(F=86.83,P<0.0001),治疗组比对照组症状总评分减少160.21分(30.21%)。(3)其他流感症状持续时间治疗组比对照组平均缩短达20h。平均缓解时间分别为41.45±28.58h和61.78±35.24h(F=108.22,P<0.0001)。(4)治疗组应用抗生素治疗的比例低于对照组(分别为21.53%和43.01%,χ2=61.18,P<0.0001)。应用抗生素总天数治疗组少于对照组。(5)密切接触人群第二代发生率治疗组低于对照组(分别为6.59%和12.88%,F=19.73,P<0.0001)。(6)两组观察期间并发症发生率无显著性差异(分别为3.23%和4.47%,χ2=1.209,P=0.272)。以气管-支气管炎为主要并发症,另外还包括鼻窦炎、化脓性扁桃体炎、肺炎等。(7)两组观察期间不良反应发生率无显著性差异,分别为3.7%和4.2%,χ2=0.680,P=0.410。治疗组以胃肠道反应恶心、呕吐、上腹部不适等为主要症状。结论磷酸奥司他韦治疗临床诊断的流感疑似患者可以快速有效缓解症状,减少抗生素的应用,有效降低第二代的发病率,且不良反应少,应用安全。

检测GPC3和GP73两种方法的比较及与临床的相关性

采用ELISA法检测70例标本(肝癌组39例、肝硬化组31例)血清中磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)和高尔基体蛋白73(GP73)的水平,qRT-PCR法检测相同标本外周血单个核细胞(PBMC)中GPC3 mRNA和GP73 mRNA的相对表达量。结果显示肝癌组血清中GPC3和GP73表达量显著高于肝硬化组(P<0.0 001);两组间PBMC中GPC3 mRNA和GP73 mRNA水平差异无统计学意义;相关性分析结果显示,肝硬化组和肝癌组血清中GPC3、GP73含量均有正相关性(P<0.01)。血清中GPC3和GP73的水平均能预测原发性肝癌,且GPC3和GP73的水平具有一定的相关性;PBMC中GPC3 mRNA和GP73 mRNA的表达水平不能很好的区分肝癌组与肝硬化组,提示ELISA法检测血清中GPC3和GP73的表达水平是临床预测原发性肝癌的首选方法。

苦参素对大鼠纤维化肝脏组织金属蛋白酶抑制因子-1、α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的 观察苦参素对大鼠纤维化肝脏组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨苦参素对肝纤维化的干预作用及可能的机制。方法 将32只大鼠随机分为4组,制备四氯化碳(CCL_4)性大鼠肝纤维化模型,并给予苦参素干预。应用免疫组化技术检测肝组织TIMP-1和α-SMA的表达,并作网状纤维及HE染色,观察肝脏胶原及组织病理学变化。结果 苦参素干预组的肝脏胶原表达量显著低于模型组,且干预组的TIMP-1表达量较模型组显著下降(P<0.05),但两组间的α-SMA表达则无显著差异(P>0.05)。结论 苦参素可以抑制大鼠CCL_4性慢性肝损伤所致的胶原合成而具有抗肝纤维化作用,其机制可能是通过抑制TIMP-1的合成。

乙型肝炎的流行病学和防治现状

型病毒性肝炎目前仍是全球急、慢性肝病的主要原因.据估计[1],全球有3～3.5亿人感染乙型肝炎病毒(HBV),每年约有100万人死于乙型肝炎及其并发症.

HIV-1 vif基因的RNA干扰体外研究

目的利用RNAi技术对HIV-1 vif基因的转录后水平进行下调,达到抑制vif蛋白表达的目的,为新的抗HIV治疗和预防研究提供理论基础。方法通过体外转录法合成siRNA,与转接有vif基因的表达质粒共同转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,并利用Real-time PCR和Western blot对HIV-1 vif分别从转录和表达水平进行验证。结果将pEGFP-N1-vif重组载体转染HEK 293T细胞后,结果显示vif蛋白可以在细胞中高水平表达;针对vif设计的3段特异的siRNA可以有效且特异地降低vif蛋白的表达。结论RNAi技术可以下调HIV-1蛋白的表达,此技术可以作为一项新的治疗和预防HIV-1的方法用于进一步的研究。

感染性心内膜炎43例临床分析

目的:分析我院近10年所收治的43例感染性心内膜炎(IE)的临床资料特点。方法:回顾分析43例IE的诊治经过.并将所得结果与1994年报道的1983—1993年的IE的相应资料进行比较。结果:43例中有心脏基础疾患者37例(其中先天性心脏病6例.风湿性心脏病16例,冠心病5例,老年退行性心瓣膜病3例,左房室瓣脱垂1例,既往有IE史者6例)。43例中人工瓣膜的心内膜炎(PVE)占27.9％(12/43)。发热为IE最常见的临床表现和首发症状,共42例(98.9％),其次为贫血和心功能不全,分别为25例(占58.1％)和18例(41.9％)。超声心动图检查发现赘生物26例(62.8％),自然瓣膜心内膜炎(NVE)和PVE的赘生物检出率没有统计学差别。赘生物好发部位依次为左房室瓣(16例),主动脉瓣(7例)以及左房室瓣和主动脉瓣均受累(3例)。43例中细菌培养阳性率为48.8％(21/43),其中,最常见的虽然仍是草绿色链球菌,共5例(11.6％),但所占比例已明显下降。值得重视的是金黄色葡萄球菌、嗜麦芽窄食单胞菌及铜绿假单胞菌等引起的IE。结论:在抗生素治疗的基础上。探讨更有效的诊断和治疗方法,应该是目前针对IE的重点。