更年春方预防实验性原发性骨质疏松作用机理初探

为探讨更年春方(GNC)预防实验性原发性骨质疏松的作用机理,采用10～12月龄SD雌性大鼠去卵巢建立骨质疏松模型,用GNC灌药4个月,RT-PCR法检测胫骨骨骺ERα、ERβ、OPG、RANKL、osf2/cbfal与TRAP mRNA的表达.结果:大鼠去卵巢后,血清E2水平及胫骨骨骺ERα、ERβ、OPG及osf2/cbfal mRNA的表达均明显下降,RANKL与TRAPmRNA的表达明显增高.GNC治疗后,血清E2水平无明显变化,胫骨骨骺ERβ、OPG及osf2/cbfal mRNA的表达均明显增高,RANKL与TRAP mRNA的表达明显下降.提示GNC可能通过上调胫骨骨骺ERβ mRNA的表达,有促进成骨细胞、抑制破骨细胞的作用,从而对实验性原发性骨质疏松有预防功效.

三聚氰胺致大鼠泌尿系统组织损伤的实验观察

目的 为三聚氰胺泌尿系统组织损伤的研究建立动物模型. 方法 60日龄SPF级SD大鼠分为4组,3组分别给予三聚氰胺1.0、0.5、0.25 g/kg,连续灌胃6周;空白对照组每天灌胃10 g/L甲基纤维素溶液.于6周末处死动物,采用肉眼和体视显微镜观察大鼠肾脏、输尿管和膀胱形态改变,计算各脏器系数,同时检测大鼠血液生化指标,并利用小动物活体Micro CT对大鼠肾脏进行扫描,观察肾脏形态改变. 结果 给药6周末各组大鼠膀胱结石发生率为66.6%（20/30）,肾脏结石发生率为56.6%（17/30）.给药6周各组大鼠肾脏均肿大呈灰黄色,肾内均出现条索状黄色沉淀物,融合成片状或颗粒状,并在皮质和髓质之间形成黄色弧形光环,给药6周各组肾脏质量和脏器指数均显著性升高,血清CREA、BUN、磷、镁含量升高（P＜0.01）. 结论 使用0.5～1.0 g/kg三聚氰胺连续灌胃给药6周,可诱发部分SD大鼠产生不同程度的泌尿系统结石.

更年春方对切除卵巢大鼠学习记忆能力和海马胆碱能系统的影响

目的观察中药更年春方对卵巢切除大鼠学习记忆能力的影响,并探讨其对海马胆碱能系统的调节作用。方法选择10～12月龄SD雌性大鼠,切除双侧卵巢建立学习记忆能力下降的模型,分别用生理盐水、更年春方(高、低剂量)和尼尔雌醇灌药12周后行Morris水迷宫实验(MWM),化学发光法测血清雌二醇(E_2)水平,Real-time PCR法测定海马乙酰胆碱酯酶(AChE)mRNA的变化,免疫组化的方法测定海马乙酰胆碱(ACh)、AChE和乙酰胆碱转移酶(ChAT)的活性。结果大鼠切除卵巢后,血E_2水平和Morris水迷宫测定的学习记忆能力显著下降(P<0.01,P<0.05)。尼尔雌醇和高剂量更年春方可以改善大鼠切除卵巢后学习记忆能力下降的症状,提高海马ACh、AChE和ChAT的活性(均P<0.05)。结论更年春方可以改善卵巢切除大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能是通过调节海马胆碱能指标而发挥作用的。

BNX小鼠人胃癌原位移植模型的建立及其生物学特性的观察

目的 应用T、B、NK细胞联合免疫缺陷的BNX小鼠建立人胃癌原位移植高转移模型。方法 将MKN 4 5细胞株接种至BNX小鼠皮下 ,成瘤后将肿瘤组织剪成小块通过手术移植至BNX小鼠的胃壁 ,观察肿瘤生长与转移情况 ,8周后对动物进行解剖。结果 胃壁原位移植瘤浸润破坏胃壁各层组织结构 ,并直接扩散至周围脏器。肿瘤的移植成功率为 10 0 % ( 2 3/ 2 3) ,表现出很高的侵袭和转移特性 :原位肿瘤平均体积 2 837.0 7± 10 4 4 .0 4mm3 ,局部和远处淋巴结转移率达 83% ( 19/ 2 3) ,肝转移率为 83% ( 19/ 2 3) ,肺转移率为 6 5 % ( 15 / 2 3) ,膈转移率为 39% ( 9/ 2 3) ,发生腹腔种植与腹水的动物为 35 % ( 8/ 2 3) ,此外 ,还有个别脾转移。结论 通过T、B、NK细胞联合免疫缺陷的BNX小鼠建立人胃癌原位移植模型可以更好地模拟人胃癌侵袭与转移本身的自然过程 。

更年春方对卵巢切除大鼠骨与子宫组织雌激素受体亚型的调节

目的探讨更年春方对卵巢切除大鼠骨与子宫组织雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型的调节.方法10～12月龄SD雌性大鼠卵巢切除建立骨质疏松模型.分别用更年春方、尼尔雌醇灌药4个月,RT-PCR法检测胫骨骨骺与子宫组织ER亚型mRNA的表达.结果大鼠卵巢切除后,血E2水平、椎骨骨密度、子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα、ERβmRNA的表达均明显下降.尼尔雌醇治疗后椎骨骨密度、子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα、ERβmRNA的表达均增高;更年春方组椎骨骨密度及胫骨骨骺与子宫组织ERβmRNA的表达增高,而子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα mRNA的表达无明显改变.结论更年春方对卵巢切除骨质疏松大鼠有防治作用,对子宫无不良反应.其机制可能与其选择性上调胫骨骨骺与子宫组织ERβmRNA的表达有关.

更年春方对卵巢切除大鼠学习记忆能力和海马ER亚型的调节

目的观察更年春方(GNC)对卵巢切除大鼠学习和记忆能力下降的预防和治疗作用,以及GNC对大鼠海马中雌激素核受体(ER)亚型的调节。方法采用10～12月龄SD雌性大鼠切除双侧卵巢建立学习和记忆能力下降的模型,用GNC灌药12周后行Morris水迷宫实验(MWM),实时荧光定量PCR法测定海马ERα和ERβmRNA的变化,免疫组化的方法测定海马CA3区ERα和ERβ蛋白的表达。结果大鼠切除卵巢后,血清E2和MWM成绩下降,海马中ERβmRNA与蛋白的表达均降低,而ERαmRNA和蛋白变化不明显。使用GNC者E2无明显变化,MWM成绩和海马中ERβmRNA与蛋白的表达提高,对ERαmRNA和蛋白无明显影响。结论提示GNC可能通过调节海马中的ERβ改善学习和记忆能力低下。

抗早熟中药对青春发育启动大鼠骨骼生长及相关基因的影响

目的:探讨滋阴泻火中药对青春期启动大鼠骨骼生长及相关基因的作用和机理。方法:将150只4周龄青春发育早期SD大鼠,随机分为空白对照组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组、Gn-RHa组,共5组,每组30只。每周测量大鼠身长,并分别在给药第4周、8周及停药4周时,每组各取10只大鼠处死,测量胫骨长度并留骺软骨标本。采用荧光定量PCR法,检测各组大鼠骺软骨IGF-1、IGF-1R、cbfα1基因表达。结果:中药中、大剂量组和GnRHa组身长生长速度及胫骨生长速度较空白对照组减慢,但停药后对大鼠成年期身长无影响。中药中、大剂量组及GnRHa组大鼠治疗后骨骼相关生长基因IGF-1、IGF-1R基因表达下调,但是停药后,成年期各组大鼠IGF-1、IGF-1R基因表达无差异。表明中药及西药对大鼠骺软骨cbfα1基因表达无明显影响。结论:滋阴泻火中药对青春期启动大鼠长骨生长有一定的抑制作用,这种作用与药物通过下丘脑-垂体-生长(骨骼)轴的调控,从而下调大鼠骺软骨IGF-1、IGF-1R基因表达有关,停药后,这种抑制作用是可逆的。

多柔比星叶酸隐形脂质体对HeLa229荷瘤裸鼠的抑瘤作用

考察多柔比星(1)叶酸隐形脂质体对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用。以pH梯度法分别制备了多柔比星叶酸隐形脂质体(1-FSL)和普通脂质体。比较两者在荷瘤裸鼠瘤旁给药后对瘤体动态变化趋势、瘤体组织病理学差异和瘤体中肿瘤细胞内DNA质量的影响等。结果表明,1-FSL对荷瘤裸鼠具有显著的抑瘤效果,1-FSL抑瘤率略高于普通脂质体,但两者抑瘤特性明显有别。

二甲基苯蒽诱发家兔卵巢肿瘤及其生物学特性的初步观察

目的 以二甲基苯蒽 (DMBA)原位埋线法诱发家兔卵巢肿瘤 ,并初步观察其生物学特性。方法 棉线浸入加热熔化的DMBA中 ,取雌性家兔 5只 ,分别在其双侧卵巢埋入含有DMBA的棉线 ,连续观察 8个月 ,处死荷瘤家兔 ,通过大体、光镜、电镜以及流式细胞技术等方面进行肿瘤生物学特性的初步观察。结果 1只家兔因术后感染而死亡 ,2只观察 8个月无肿瘤发生。 2只分别发生未分化癌及腺癌 ,组织学特点与相应的人卵巢肿瘤很相似 ;流式细胞分析S期细胞含量分别为 4 0 .72 %和2 9 .87%。结论 二甲基苯蒽能原位诱发较大型动物家兔的卵巢肿瘤 。

更年春方对卵巢切除大鼠学习记忆的影响

目的探讨更年春方对卵巢切除大鼠学习记忆的影响。方法10b12月龄SD雌性大鼠切除卵巢建立学习和记忆能力受损的模型，分别用更年春方、尼尔雌醇灌药12周后Morris水迷宫测定各组大鼠学习记忆能力。结果大鼠切除卵巢后，血清雌二醇（E2）水平和Morris水迷宫测定的学习和记忆能力显著下降。尼尔雌醇和高剂量更年春方可以改善大鼠切除卵巢后的学习记忆能力下降的症状，而对血清E2无明显影响。结论更年春方对卵巢切除导致的学习和记忆能力下降有改善作用，高剂量效果显著，其效果与尼尔雌醇效果相似。更年春方不提高卵巢切除大鼠血清E2水平。

孕激素对去势雌性大鼠骨密度及骨形态计量作用的初步研究

目的 了解孕激素对去势雌性大鼠骨密度及骨形态计量作用。方法 5 0只 6月龄Wistar雌性大鼠随机分为 5组 :假手术组和卵巢切除组、卵巢切除后分别加安宫黄体酮 2mg组、安宫黄体酮 2 0mg组和倍美力组。手术后 7d喂药 ,用药后 3个月处死。测定各组大鼠子宫湿重、全身及股骨骨密度并取大鼠椎骨、胫骨组织切片进行形态计量分析。结果 两组孕激素组子宫湿重与卵巢切除组相同 ,均显著低于假手术组与倍美力组 (P <0 0 0 1)。假手术、雌、孕激素组全身骨密度测定均大于卵巢切除组 (P <0 0 5 )。各组股骨骨密度无显著差异。组织切片观察显示 ,假手术与倍美力组骨小梁粗壮、饱满、结构完整 ;卵巢切除组则纤细、断裂、完整性差。孕激素组骨小梁结构优于卵巢切除组但不及假手术及倍美力组。计量分析显示孕激素组椎骨骨小梁面积明显大于卵巢切除组(P <0 0 5 ) ,但低于倍美力组 (P <0 0 5 )。胫骨骨小梁面积与卵巢切除组相仿 ,均明显低于假手术和倍美力组 (P <0 0 5 )。孕激素 2mg与 2 0mg组间无明显差异。结论 两种剂量的安宫黄体酮对卵巢切除大鼠骨质疏松均有一定防治作用 ,但从骨组织形态计量分析 ,其作用较弱 ,与结合雌激素相比 。

更年春方对去卵巢大鼠骨密度与骨生物力学参数的影响

为探讨更年春方对去卵巢大鼠骨密度与骨生物力学参数的影响,采用10～12月龄SD雌性大鼠去卵巢建立骨质疏松模型,分别用更年春方、尼尔雌醇灌药4个月,观察有关指标的改变.结果:大鼠去卵巢后,子宫湿重、子宫形态学、椎骨的骨密度及骨生物力学参数和股骨的骨密度均有明显改变.经更年春方或尼尔雌醇治疗后,椎骨的骨密度及骨生物力学参数和股骨的骨密度均有显著改善.尼尔雌醇组子宫湿重明显增加,子宫组织腺体数目增加,柱状上皮增厚,内膜间质和肌细胞有丝分裂增加;更年春组子宫湿重与子宫形态学均无明显改变.提示更年春方可以改善实验性原发性骨质疏松大鼠的骨密度与椎骨生物力学参数,没有刺激子宫增生肥大的副作用.

重组人生长激素缓释微球.Ⅱ.大鼠体内的药物动力学研究

考察重组人生长激素(rhGH)可生物降解微球在动物体内的缓释效果,探讨蛋白稳定剂对微球体内药物动力学行为的影响。大鼠皮下注射rhGH-PLGA微球后,利用放射免疫吸附分析法测定血药浓度。结果表明,rhGH-PLGA微球具有明显的缓释作用,给药后d30,动物体内的rhGH浓度仍维持在正常生长激素水平之上。而大鼠同等剂量给予rhGH溶液24h后,其体内的生长激素浓度即恢复至正常水平。微球内水相中加入泊洛沙姆407(F127),使rhGH的相对生物利用度增加约12.5%,进一步证实了F127对rhGH具有稳定作用。

Fas/FasL系统在邻苯二甲酸二丁酯睾丸毒性机制中的作用

目的探讨细胞凋亡Fas/FasL系统在邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的雄性生殖毒性机制中的作用。方法在大鼠多代繁殖实验的基础上,运用免疫组织化学染色的方法,通过对睾丸组织损伤的观察和细胞凋亡相关蛋白(Fas/FasL)的检测和分析,探讨不同剂量DBP对成年F1代大鼠(PND70天)睾丸损害的情况及可能的作用机制。结果与对照组相比较,随着DBP染毒剂量的增高,PND70天F1代雄性大鼠睾丸曲细精管生精上皮退化变性,生精细胞脱落至曲细精管管腔面,甚至有部分曲细精管内的生精细胞耗竭;免疫组织化学染色结果表明,与对照组相比,中、高剂量组(每天250和500mg/kg)大鼠睾丸组织Fas/FasL染色范围扩大,着色细胞数量增多,且存在剂量-反应关系。结论DBP对大鼠睾丸生精细胞损伤可能是由于DBP启动了睾丸支持细胞Fas/FasL系统,阻抑生精过程造成的,Fas/FasL系统在DBP的雄性生殖毒性中起一定作用。

慢性高眼压猴眼的视盘形态血流评价

目的评价猕猴慢性高眼压模型眼视盘结构的相关生物学特性。方法成年猕猴7只,采用半导体倍频532激光和氩激光光凝猕猴单眼小梁网建立高眼压模型,使用海德堡视网膜断层成像仪和视网膜血流分析仪检测双眼的视盘形态和筛板血流参数。结果 7例猕猴模型眼光凝成功后2个月内平均眼压为44.9±11.6mmHg(1 mmHg=0.133 kpa)。模型眼的视盘形态参数,除视盘面积外,视杯形态指数、视杯面积、杯/盘面积比、盘沿面积、视网膜神经纤维层的平均厚度等,与对照眼相比差异有显著性意义(P<0.01);模型眼的筛板血流量、血流速度和红细胞移动速率与对照眼相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论两种激光均成功建立了猕猴慢性高眼压模型,模型眼较对照眼出现视杯凹陷性扩大、视网膜神经纤维层变薄等青光眼特征的眼底形态学改变。

人黑色素瘤SCID小鼠高转移模型的筛选和建立

利用人黑色素瘤 scid小鼠皮下移植实验中偶尔发现的肺转移瘤组织 ,接种至 scid小鼠皮下 ,经体内反复筛选 ,成功建立了一株人黑色素瘤高转移模型 SCI-3 75,至今在体内筛选 2年共 2 1代 ,表现为移植瘤局部侵润、1 0 0 %自发肺转移合并 79%腋下淋巴结转移 ,组织病理学观察和染色体分析表明 ,该模型保持了人黑色素瘤的基本特征。同时 ,利用筛选的肿瘤组织在体外初步建立了一个相应的细胞系 ,经体内移植实验证实 ,细胞系保持了原模型的高转移特性。本模型的建立 。

链脲佐菌素诱发豚鼠糖尿病模型的研制

为建立人类糖尿病的动物模型 ,将实验组豚鼠腹腔注射链脲佐菌素 ( STZ)枸橼酸缓冲液 2 0 0 mg/ kg,2 4h后每天定时皮下注射 2 U长效胰岛素 ,维持一定水平的血清胰岛素 ;对照组注射等量空白缓冲液。 6周后两组豚鼠空腹称重 ,并用眼眶后静脉丛穿刺法采血 5 ml/只 ,测定血糖及血清胰岛素含量。结果 :实验组豚鼠血糖明显提高 ,血清胰岛素明显减少。该模型对研究 I型糖尿病及其它相关疾病可能具有一定的价值。

低叶酸饲料对小鼠血清叶酸浓度及生长的影响

目的考察低叶酸饲料对小鼠血清叶酸浓度和生长的影响。方法采用放射免疫法检测国产市售实验动物饲料(颗粒饲料、繁殖料)和自制低叶酸饲料中的叶酸含量,观测低叶酸饲料喂养后小鼠的血清叶酸浓度和生长情况。结果食用低叶酸饲料后,小鼠血清叶酸浓度显著降低(P<0.001),但能维持在正常范围内,且不影响小鼠体重和正常生长。结论低叶酸饲料可替代颗粒饲料用于与叶酸受体相关研究的实验动物饲养。