古籍纸张表面微生物群落组成的初步研究

纸张表面的微生物直接或间接地影响古籍的保存和使用年限,全面认识纸表微生物的组成有助于古籍保护.本研究对手抄本《周本纪摘要》中的纸张表面菌斑处(stain组)和洁净处(clean组)共9处,以及环境空气进行了样品采集,并对样品进行了高通量测序,对测序结果进行了生物信息学分析.10个样品共得到高质量的细菌16S序列和真菌ITS序列共485 989条.序列数据分析表明,纸表真菌可以划分为650个OTU,分属6个门,细菌可以划分3 465个OTU,分属15个门,其中丰度最高的分别是细菌的糖多孢菌属(Saccharopolyspora)和真菌的曲霉属(Aspergillus).相比于clean组,stain组有显著多的糖多孢菌属和假诺卡氏菌属(Pseudonocardiaceae)细菌,以及显著多的牛肝菌目(Boletales)和爪甲团囊菌目(Onygenales)真菌.在聚类分析上,无论是细菌还是真菌部分,stain组和clean组的样品都能很好的分开,但在Alpha多样性指数上,组间差异趋势不显著.这些结果说明无论是否有菌斑,纸表微生物群落多样性程度是稳定的,但群落组成和结构有很大差异.

日本血吸虫钙蛋白酶基因的原核表达及功能分析

目的克隆表达日本血吸虫钙蛋白酶(Sjcalpain),了解Sjcalpain在尾蚴内的分布及其在尾蚴侵染中的作用。方法根据SjCalpain基因全序列(GenBank登录号为AB016726)设计引物,PCR分别扩增Sjcalpain的催化位点区域和Ca2+结合位点区域的基因片段,克隆入pET-28a原核表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中进行原核表达,组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达和纯化情况。纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔多克隆抗体,ELISA和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测多克隆抗体的效价和特异性。利用免疫荧光定位技术观察Sjcalpain在尾蚴组织中的分布情况。将尾蚴和钙蛋白酶抑制剂孵育后感染小鼠,计算血吸虫减虫率。结果成功构建了Sjcalpain的催化位点/pET-28a和Ca2+结合位点/pET-28a原核表达重组质粒,在E.coli BL21(DE3)中成功表达目的蛋白,相对分子质量(Mr)约为43 000和39 000,与预期大小一致,且均为包涵体表达。组氨酸标签亲和层析成功纯化得到目的重组蛋白。间接ELISA结果显示,多克隆抗体的效价超过1∶80 000。免疫定位结果显示,Sjcalpain在日本血吸虫尾蚴头部分布较多。尾蚴侵染抑制实验中,钙蛋白酶抑制剂作用组平均获虫19条,对照组平均获虫23条,减虫率为17.4%。结论 Sjcalpain蛋白产物主要分布在日本血吸虫尾蚴的头部;Sjcalpain被抑制后可以减少入侵宿主的尾蚴数量,说明Sjcalpain在尾蚴感染宿主皮肤过程中发挥一定的作用。

禽流感蔓延给人类敲响警钟

"流感病毒传播快、感染力强,病毒可以通过空气传播,其传染力是 SARS病毒的数倍到数十倍。在现代高度流动性的社会中,一种新的高致病性的流感病毒一旦产生,预计会在很短的时间内传播到世界各地。"

慢病毒介导的绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫体内的表达和检测

目的验证外源绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫(Schistosoma japonicum)体内能否成功表达并产生绿色荧光。方法采用荧光显微镜观察日本血吸虫不同虫期虫体的背景荧光情况。利用含有由巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的绿色荧光蛋白zs Green基因的慢病毒载体感染体外培养的14 d童虫,未感染对照组采用不含慢病毒的RPMI 1640培养液(含10%胎牛血清)培养。感染后48 h,提取童虫基因组DNA和总RNA,合成c DNA,PCR检测zs Green基因是否整合入基因组以及绿色荧光蛋白m RNA的转录表达情况。在感染后24和48 h,以及换为不含慢病毒的RPMI 1640培养液后的不同时间点,使用荧光显微镜观察被感染童虫发出的绿色荧光,并判断其是否为绿色荧光蛋白基因在虫体内表达而产生的绿色荧光信号。结果荧光显微镜观察可见,日本血吸虫童虫无明显自发荧光现象,成虫可自发明显荧光。感染组童虫基因组DNA和总c DNA PCR检测结果显示,均扩增出大小为173 bp的阳性条带,与zs Green基因片段一致,且测序结果正确。荧光显微镜观察可见,而感染组童虫在感染后24 h,肠道内出现绿色荧光亮点,但疑似食物残渣。感染后48 h,童虫肠道发出均匀的绿色荧光,其亮度高于慢病毒培养液的背景荧光亮度。更换为不含慢病毒的RPMI 1640培养液3 d后,童虫肠道内绿色荧光变弱,一周后绿色荧光消失。重新更换为含慢病毒的RPMI 1640培养液感染童虫,2 d后在肠道内再次发现均匀绿色荧光。未感染对照组童虫未出现绿色荧光。结论外源绿色荧光蛋白可在日本血吸虫体内表达,但荧光显微镜下观察到的绿色荧光信号还有待进一步确认。

血吸虫转录因子研究现状

血吸虫病是一种危害严重的全球性人兽共患寄生虫病。新药和疫苗开发是血吸虫病防治工作中的一项重要环节。了解血吸虫转录调控机制及转录因子具体功能将有助于理解血吸虫生长发育的分子机制,为筛选新药和疫苗作用靶点提供参考。本文主要就血吸虫转录因子研究现状及研究方法进行综述。

血吸虫尾蚴侵染分子机制研究进展

尾蚴穿透宿主皮肤是血吸虫成功感染终宿主的第一步。尾蚴钻腺分泌的蛋白酶在穿透宿主皮肤过程中发挥了重要作用。目前对于血吸虫感染分子机制的研究主要集中在包括丝氨酸蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶在内的尾蚴分泌蛋白酶上。已有研究表明,曼氏血吸虫主要靠尾蚴分泌的弹性蛋白酶穿透宿主皮肤,日本血吸虫则主要利用组织蛋白酶B2侵入宿主体内。尾蚴入侵分子机制的阐明有助于新型血吸虫病疫苗的研制和药物靶点的发现。

蚊龄对斯氏按蚊感染伯氏疟原虫能力的影响

目的 研究不同日龄斯氏按蚊（Anopheles stephensi）传播伯氏疟原虫（Plasmodium berghei）能力的变化以及可能机制。 方法 选取4日龄和25日龄雌性斯氏按蚊，用原虫血疟为4%～8%的伯氏疟原虫感染BALB/c小鼠饲喂蚊虫，感染后8 d解剖蚊虫肠道，镜检计数蚊虫肠道中疟原虫卵囊数，比较4日龄和25日龄蚊虫对疟原虫易感性的变化。选取感染前4日龄和25日龄雌性斯氏按蚊，采用LB平板培养法检测其体内可培养共生菌的量，用实时定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）方法检测其体内的共生菌总量。选取感染前4日龄和25日龄雌性斯氏按蚊，采用qPCR检测其体内天蚕抗菌肽1（cecropin，CEC1）、CEC3、防御素（defensin，DEF；gambicin，GAM）、攻击素（attacin，ATT）以及一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）、双氧化酶（dual oxidase，DUOX）和含硫酯蛋白1（thioester protein 1，TEP1）等主要免疫效应因子的表达水平。 结果 感染伯氏疟原虫后8 d，4日龄斯氏按蚊中肠道疟原虫卵囊中位数是139，25日龄按蚊卵囊数中位数是3，4日龄按蚊伯氏疟原虫的感染密度是25日龄的46倍（P〈0.01）。qPCR结果显示，25日龄蚊虫体内共生菌总量为4日龄蚊虫的1.5倍，差异有统计学意义（P〈0.05 ）；LB平板培养法结果显示，25日龄肠道可培养共生菌平均为28 889个菌落形成单位（colony forming units，cfu），是4日龄（3 200 cfu）的9倍，差异有统计学意义（P〈0.01）。25日龄斯氏按蚊体内NOS基因表达量是4日龄的2.4倍（P〈0.01），抗菌肽ATT、DEF、CEC3、CEC1的表达量分别为4日龄的27%、48%、14%、61%，差异均有统计学意义（P〈0.05）；4日龄与25日龄斯氏按蚊体内GAM、DUOX、TEP1的表达量均未发生显著变化。 结论 随斯氏按蚊日龄增加，斯氏按蚊抗菌肽水平发生显著下调，体内共生菌增多，NOS表达量上调，按蚊抵抗疟原虫的能力增强。

人体中一个新的乙肝表面抗原结合蛋白SBP的免疫组化及ELISA分析

对人体中一个新的乙肝表面抗原结合蛋白SBP(HBsAg Binding Protein)进行了组成和结构分析.利用免疫组化的方法检测了人脑、肝、前列腺、肌肉、胃以及睾丸等组织的SBP的表达情况,并利用ELISA方法测定了慢性乙型肝炎病人、乙肝康复者以及健康人血清中SBP的含量并作统计学分析.免疫组化结果显示SBP存在于包括肝组织在内的多种组织中.ELISA结果表明,慢性乙肝病人、乙肝康复者以及健康人血清中SBP含量存在显著差异,推测SBP可能与人体对乙肝病毒的易感及耐受有关.

媒介锥蝽的研究进展及媒介潜能预测

锥蝽是一种重要的传播媒介,可以携带克氏锥虫,从而引起美洲锥虫病,该病多发于拉丁美洲,近年来开始在世界各地流行。随着全球经济一体化的进程,我国对外国际交流和合作不断深化。在此背景下,境外输入传染病的风险也将增高。由于我国也存在美洲锥虫病的传播媒介锥蝽,因此具有通过境外输入而引起我国继发传播的风险,可能严重威胁我国人民的身体健康和生命安全。本文主要回顾了国内外对媒介锥蝽的研究进展,探讨了我国本地锥蝽的媒介潜能,为我国输入性美洲锥虫病的防控提供参考。面对这些新问题、新挑战,在寄生虫病防控方面对我们提出新要求,本综述以"同一健康(one health)"理念开展寄生虫病的监测、防控和研究。