古DNA证据支持曹操的父系遗传类型属于单倍群O2

人类Y染色体是研究父系血缘的最佳材料。得益于近年来二代测序技术的发展,以及本实验室在东亚范围内大规模的遗传调查,我们获得了大量具有区分力的Y染色体新遗传标记,并构建了约20万份含有Y-STR和Y-SNP信息的遗传数据库,从而可以根据Y-STR单倍型推断出需要测试的样本的单倍群归属。因此,我们可以有针对性地选择较少的SNP组成"微检版"(mini-panel)去确定样本的真实遗传类型。本次对元宝坑一号墓曹操叔祖父曹鼎古DNA实验,证明曹操及其后人的遗传类型属于O2-M268+,F1462+,PK4-,弥补了之前通过现代人家系推测曹操遗传类型和Y-STR推测Y-SNP的缺陷。这一技术改进将使历史人类学的研究工具更加完善和有效。

WNT5B基因与人类神经管畸形(NTDs)的相关性

目的探讨WNT5B基因序列变异与人类神经管畸形(neural tube defects,NTDs)发生的相关性。方法应用PCR-Sequencing和SNaPshot技术在163例NTDs患者和357例对照人群中进行WNT5B基因突变扫描和关联分析。结果在NTDs患者的WNT5B基因中共检测到3个新发现的序列变异位点:c.-57-123G>A、c.622-38G>A和c.622-99C>T。其中,c.-57-123G>A位点变异在357例对照人群中未检测到,其为NTDs患者所特有的变异位点。对rs2270036(c.329-16T>C)、rs6489313(c.329-84G>A)和rs58317077(c.329-122T>C)这3个SNP位点的关联分析结果表明:在显性遗传模式下,rs58317077位点的C等位基因与NTDs的发生显著相关,携带C/C或C/T基因型的个体的患病风险是携带T/T基因型的个体的1.62倍(OR=1.62,95%CI=1.05～2.52,P=0.028);生物信息学预测结果表明:rs58317077位点的C等位基因会改变转录因子NF-kap和MZF1对该区域的结合。结论 c.-57-123G>A和rs58317077位点的C等位基因是人类NTDs发生的遗传性风险因子。

神经管畸形患者锌指蛋白ZIC2基因编码区罕见突变的分子遗传分析

目的筛选ZIC2外显子区域基因突变,分析突变对神经管畸形(NTDs)的影响。方法采用病例对照研究方法,收集来自山西省和江苏省苏州市经孕期B超或病理学解剖证实为NTDs的胎儿为NTDs组,以常规体检排除出生缺陷和重大疾病的胎儿和健康成年人为对照组。采用酚-氯仿法抽提基因组DNA,通过PCR扩增ZIC2的3个外显子及邻近的部分内含子序列,扩增产物采用ABI Prism Bigdye system进行测序,对于测序发现的基因突变进行反向测序验证。结果 NTDs组163例,对照组576例。在NTDs组中发现一个同义突变c.1140G>A,未发现错义突变或重复缺失。同义突变c.1140G>A位于第2外显子,为1例妊娠期37周诊断为枕部脑膜脑膨出的女性胎儿。KEGG数据库分析ZIC2结构发现该同义突变位于ZIC2的一个C2H2锌指结构中。在对照组中未检测到相同突变。结论 ZIC2是一个高度保守基因,其编码区不含有与NTDs相关的SNP和罕见突变。

江苏省某地区自然绝经女性月经初潮年龄与MS的相关性分析

目的探讨自然绝经女性月经初潮年龄与代谢综合征（Ms）的相关性。方法对江苏省泰兴地区7个行政村45～64岁已自然绝经的女性3204人进行问卷调查、体质测量和生化检测。将调查对象按照初潮年龄小于14岁、14～16岁、〉16岁分组，采用国际糖尿病联盟（IDF）（2005）的MS诊断标准，以及美国国家胆固醇教育计划成人治疗组第3次治疗报告（NCEPATPⅢ）2005年根据亚洲人改良的诊断标准，以Logistic回归分析初潮与MS的关联。结果该人群MS粗患病率为35．39％[IDF（2005）]和20．57％[-NCEP ATPIlI（2005）]；Logistic回归分析显示两种标准判断MS得出的结论一致，即月经初潮年龄较早（〈14岁）增加Ms的发生多因素调整后OR分别为1．41（1．10～1．82）和1．55（1．16～2．08））。月经初潮年龄较早显著增加女性中心型肥胖的风险，而月经初潮年龄较晚（〉16岁）与Ms无关。结论月经初潮年龄较早是MS风险因素，应对月经初潮年龄较早的已绝经女性加强健康宣教及防控。

代谢综合征相关基因多态性研究进展

代谢综合征(metabolic syndrome,MS)是一组复杂的代谢紊乱疾病,近年其逐渐成为对居民健康影响较大的公共卫生问题。MS的发生是由遗传和环境因素共同作用导致的,其遗传异质性和表型异质性强,许多基因及其多态性都与MS或其组分的发生有关。有关MS及其组分相关基因多态性的研究主要集中在脂联素编码基因(ADIPOQ)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因(PPARγ)、转录因子7类似物2基因(TCF7L2)、脂肪含量和肥胖相关基因(fat mass and obesity-associated gene,FTO)和载脂蛋白基因等。而目前针对女性的遗传研究尚未引起广泛关注,尚需进一步研究以寻找其致病的特异性基因,为改善女性健康提供帮助。综述近年MS相关的基因多态性的研究热点。

江苏泰兴农村人群牙周病与慢性肾脏病关联分析

目的 探讨农村人群牙周病与慢性肾脏病的相关性。方法 对江苏省泰兴地区4个行政村35-65岁居民进行问卷调查、体质测量及生化检测。使用社区牙周指数评判牙周病及其严重程度,根据血清肌酐计算肾小球滤过率评价肾脏功能,采用回归分析评价牙周病与慢性肾脏病的相关性。结果 该地区人群牙周病、慢性肾脏病的患病率分别为45.3%和1.4%。单因素Logistic回归分析显示牙周病增加了慢性肾脏病的患病风险,OR及95%置信区间为2.62（1.06-6.47）。经多因素校正,牙周病与慢性肾脏病关联无统计学意义。线性回归分析结果显示,多因素校正后肾小球滤过率随着牙周病严重程度的增加而逐渐下降（P〈0.05）。结论 牙周病可能是慢性肾脏病的风险因素,需进一步开展前瞻性研究确定因果关系。

血清七种自身抗体联合癌胚抗原和糖类抗原199检测对肺癌的诊断价值

目的探讨血清七种自身抗体(seven autoantibodies,7-AABs)联合癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖类抗原(carbohydrate antigen,CA)199检测对肺癌的诊断价值。方法选择肺癌43例作为肺癌组,同期健康体检者18例作为对照组,均采集空腹外周血样本,采用酶联免疫吸附试验法检测血清7-AABs,化学发光法检测血清CEA和CA199,评价血清7-AABs、CEA、CA199以及3种联合检测(7-AABs+CEA、7-AABs+CA199、7-AABs+CEA+CA199)诊断肺癌的灵敏度并绘制受试者工作特征(ROC)曲线。结果肺癌组血清抑癌基因产物p53、蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP 9.5)、性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2)、肺癌组肿瘤/睾丸抗原G抗原7(G antigen 7,GAGE7)、ATP结合RNA解旋酶GBU4-5、黑色素瘤抗原A1(melanoma antigen 1,MAGEA1)、肿瘤相关基因(cancer associated gene,CAGE)的表达均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组血清7-AABs检测阳性率74.42%高于对照组血清7-AABs检测阳性率16.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。血清7-AABs、CEA和CA199检测诊断肺癌的灵敏度分别为74.42%、60.47%、46.51%,血清7-AABs+CEA、7-AABs+CA199、7-AABs+CEA+CA199 3种组合检测诊断肺癌的灵敏度增加至86.05%、76.74%、86.05%。血清7-AABs、CEA和CA199检测诊断肺癌的ROC曲线下面积分别为0.789、0.733、0.570,血清7-AABs+CEA、7-AABs+CA199、7-AABs+CEA+CA199 3种组合检测诊断肺癌的ROC曲线下面积提升至0.903、0.865、0.907。结论血清7-AABs检测对于肺癌诊断有一定参考价值,血清7-AABs联合CEA和CA199检测可提高肺癌检出率。

肝细胞癌中转录因子E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响

探讨肝细胞癌(HCC)中非典型性E2F家族成员E2F7在肝癌细胞生长、分化中的作用及可能涉及的分子机制.本研究运用实时荧光定量PCR检测38例原发性肝细胞癌及对应的癌旁组织中E2F7基因mRNA的表达情况;分别通过基因过表达和RNA干扰技术上调或下调E2F7基因表达,并运用实时荧光定量PCR和Western印迹检测肝癌细胞株MHCC-H中β-catenin及其靶基因cmyc的表达情况;双荧光素酶报告基因系统检测E2F7对Wnt/β-catenin信号通路活性的影响;核浆分离实验检测过表达E2F7基因对β-catenin入核的影响;免疫共沉淀实验检测异位表达E2F7与内源β-catenin的相互作用.结果显示,肝细胞癌组织中E2F7基因的表达量显著高于相应的癌旁组织(P<0.001);转录因子E2F7可与β-catenin相互作用并促进β-catenin进入细胞核.转录因子E2F7可以促进Wnt/β-catenin信号通路的活性.

MECP2基因甲基化和羟甲基化水平的性别差异研究

目的探讨MECP2在不同性别脑组织中是否有表达差异,从而与孤独症等疾病的性别差异相关。方法利用4例非疾病流产胎儿脑标本,采用酚氯仿方法提取基因组DNA。在Meth Primer在线软件上检测MECP2基因-1 000 bp至+1 200 bp区间的CpG岛。甲基化检测采用亚硫酸氢盐修饰后测序法(使用EZ DNA Methylation-gold^(TM)Kit试剂盒)。对于超声断裂后的基因组DNA,用基因组羟甲基化试剂盒(diagenode,h Me DIP kit)进行ChIP反应。反转录cDNA采用Fast Quant RT Kit(With gDNase)试剂盒,定量PCR检测MECP2表达量采用SuperReal PreMix Plus(SYBR Green)试剂盒。结果标本1男,重量106 g,长度17.4 cm;标本2女,重量100 g,长度19.1 cm;标本3男,重量500 g,长度28.3 cm;标本4女,重量510 g,长度31.5 cm。MECP2表达量男性胚胎(标本1=0.0367,标本3=0.0155)高于女性胚胎(标本2=0.0177,标本4=0.0088)。MECP2的甲基化水平女性个体平均1条X染色体上MECP2的甲基化程度显著高于男性,特别是在启动子的核心区域-309 bp至-179 bp,男性MECP2上几乎没有甲基化,而羟甲基化水平男性高于女性。结论男性MECP2基因的DNA修饰促进其表达,可能提高了男性胚胎对MECP2基因突变的易感性,从而影响MECP2基因突变导致的患病人群的性别差异。

慢病毒介导的Jab1基因表达干扰在乳腺癌细胞中功能的初步研究

在乳腺癌细胞MDA231中,成功建立了慢病毒介导的Jab1基因表达干扰系统,并通过MTT细胞增殖实验和体外细胞侵袭能力实验证实Jab1基因表达的干扰使得MDA231细胞的增殖和体外侵袭能力发生显著的下降;此外,通过Western blot实验证实Jab1对于Fra1的表达可能存在调控,并且Fra1和Jab1在MDA231细胞中的表达干扰会使细胞形态发生相似的改变,提示Jab1和Fra1在乳腺癌细胞MDA231中可能通过调控共同的信号通路影响细胞的形态.

叶酸代谢通路关键酶基因多态性的肝癌易感性分析

探讨叶酸代谢通路关键酶基因多态位点与肝细胞性肝癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）发生的相关性.采集205例HCC患者和200例对照人群的血液样本,提取DNA后用SNaPshot技术对叶酸代谢基因多态MTHFRc.677C〉T,c.1298A〉G;MTR-186T〉G,c2756A〉G,＋905G〉A;MTRRc56＋781A〉G,c66A〉G,CBS-551C〉G进行基因分型及遗传易感性研究.关联分析结果表明：在隐性遗传模式下,MTR启动子区-186G等位基因与肝癌患病风险增加相关（P=0.028）,携带G/G基因型的个体患肝癌的风险是G/T和T/T等位基因型个体的1.71倍（OR=1.71,95%CI：1.06~2.78）.MTR-186T〉G是肝癌发生的遗传性风险因子.

抗体免疫脂质磁球法检测肺癌循环肿瘤细胞初探

目的初步探索抗体免疫脂质磁球法在肺癌循环肿瘤细胞(CTCs)检测中的应用。方法采用反向蒸发法制备上皮细胞粘附分子(Ep CAM)和表皮生长因子受体(EGFR)抗体免疫脂质磁球。在磷酸盐缓冲溶液(PBS)和外周血肺癌CTCs模型中,评价Ep CAM和EGFR抗体免疫脂质磁球对A549细胞的捕获效率;在此基础上,用上述两种抗体免疫脂质磁球法检测肺癌患者外周血中CTCs;并将Ep CAM免疫脂质磁球法与CellsearchTM系统进行比较。结果 Ep CAM和EGFR免疫脂质磁球法在PBS溶液CTCs模型中对A549细胞的中位检出率分别为92%和90%,在外周血模型中分别为85%和81%;两种磁球法在13例肺癌患者中均检测出了CTCs,中位检出个数均为5个,而在健康对照者中中位检出个数均为0个(P<0.05)。用Ep CAM免疫脂质磁球法和CellsearchTM系统检测3例肺癌患者的CTCs,前者对其中2例患者的CTCs检出量高于后者,另外1例相等。结论 Ep CAM和EGFR免疫脂质磁球法均能有效检出肺癌CTCs,两种磁球法检出率相当。Ep CAM免疫脂质磁球法对肺癌患者CTCs检出量有高于CellsearchTM系统的趋势。