模式生物斑马鱼在衰老生物学中的研究初探

目的对模式生物斑马鱼的衰老及相关表型进行初步研究。方法运用SA-β-Gal染色、转基因荧光示踪和定量基因转录分析对衰老相关的细胞学现象和基因表达水平进行观测。结果 (1)下丘脑和心脏是年老斑马鱼体内出现衰老细胞较多的器官;(2)衰老相关的基因表达变化具有器官间和性别间的显著差别。结论调控个体衰老的分子细胞运行机制在进化中具有一定的保守性,斑马鱼可作为研究脊椎动物衰老的新工具。

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法:绝处逢生的利剑

癌症，因癌细胞的内源性、异质性和突变抗药性而难以治愈，被称为“不可逆转的细胞损伤”。目前癌症治疗的常规方法包括手术、放疗和化疗，都不能达到彻底治愈的效果。同时，放疗和化疗都会对机体的正常细胞，尤其是生长分裂旺盛的细胞，如造血干细胞造成损伤。癌症干细胞（cancerstemcell，CSC）的存在，也给术后的复发增添了风险。作为一种针对人体免疫系统而非针对肿瘤的疗法。

利用大肠杆菌工程菌生产2,3-二磷酸甘油酸的研究

通过基因工程的方法,将表达人源BPGM(bisphosphoglycerate mutase二磷酸甘油酸变位酶,E.C.2.7.5.4.)的质粒转化入大肠杆菌内,并进行培养条件的优化摸索,通过向培养基内加入葡萄糖使大肠杆菌大量发酵生产2,3-BPG(2,3-bisphosphoglycerate,2,3-二磷酸甘油酸).结果表明,当培养基中葡萄糖质量浓度为10 g/L,诱导时间为4 h,大肠杆菌工程菌表达的2,3-BPG含量最高.如果诱导后加入终质量分数为0.5%的Tween 80可以有效促进2,3-BPG分泌到培养基中.诱导后4 h添加新培养基,补加葡萄糖可以使2,3-BPG的产量提高1倍,达到7.5 mmol/L.

20℃和25℃条件下秀丽隐杆线虫衰老过程中磷酸化蛋白质组学的研究

衰老过程受到包括温度在内的众多环境因素的影响。蛋白质磷酸化是重要的翻译后修饰,调控多种生命活动,在衰老过程中也起着重要作用。秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)是经典的衰老研究的模式生物。为了探究蛋白质磷酸化修饰在不同温度下衰老过程中的作用,我们对20℃(常温)和25℃(高温)培养条件下成年时期第1天、第5天、第10天的秀丽隐杆线虫样品进行了磷酸化组学分析工作。我们采用基于DIA的非标定量分析方法,系统地比较了不同样品间的磷酸化组学差异。共9145条高可信度的磷酸化肽段被鉴定到,对应3317个磷酸化蛋白质。经过筛选,最终6624条磷酸化肽段被定量到,其中有1093条显著变化的磷酸化肽段,来自于858个磷酸化蛋白质,包含1426个磷酸化位点,通过进一步的生物信息学分析,揭示了衰老过程中的磷酸化变化规律。

重组根瘤农杆菌葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶性质

目前已发现的葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶均来源于真菌,尚无原核细胞来源的相关报道。从根瘤农杆菌LBA4404中克隆β-葡萄糖苷酶基因bg1,将其构建在表达载体pET-28b上,转化Escherichia coli RP(DE3),IPTG诱导表达。重组β-葡萄糖苷酶的比活高达36.7μmol/(min·mg)。对经过Ni柱纯化的重组酶进行酶学分析发现:该酶是糖基水解酶家族1的成员,底物亲和力高,专一性低,在温度为40℃和pH在5-8之间时具有较高的酶活,在低于40℃和pH5-10之间时可稳定保存。以pNP-β-Glc为底物,该酶的最适pH为6.4,最适温度为60℃,在37℃和pH6.4的反应体系中,该酶的Km为0.09mmol/L,竞争性抑制剂葡萄糖酸-δ-内酯和葡萄糖的Ki分别为0.03mmol/L和75mmol/L,具有很高的葡萄糖耐受性,当金属离子Ag+和Zn2+存在时,酶活被明显抑制。该酶对pNP-β-Gal和pNP-α-Glc的Km分别为3.61mmol/L和14.31mmol/L。