石蒜碱对裂殖酵母生长的抑制作用

目的研究石蒜碱对裂殖酵母生长周期的影响,分析石蒜碱的抗肿瘤机制,推测用裂殖酵母作为模型筛选抗肿瘤药物的可行性。方法在不同浓度石蒜碱条件下培养裂殖酵母,测量生长曲线;流式细胞术检测细胞周期分布;光学显微镜观察形态,DAPI及Calcofluor染色观察细胞核、细胞间隔变化;Real-time PCR检测细胞周期相关基因的表达。结果在试验条件下,石蒜碱显著抑制裂殖酵母生长,并呈现时间浓度依赖性,作用20.5 h后IC50值为212μmol/L;酵母细胞变长、细胞核及细胞间隔增多,G2/M期细胞比例增加,部分细胞周期相关基因在mRNA水平有所变化。结论石蒜碱对裂殖酵母生长具有明显抑制作用,可引起细胞表型变化,影响部分细胞周期相关基因的表达。

介导含硫多肽类抗生素耐药的23S rRNA甲基转移酶NHR的生化功能

目的研究23S rRNA甲基转移酶-硫链丝菌肽抗药性RNA甲基转移酶(thiostrepton-resistance-RNA methyltransferase,TSR)和23S rRNA甲基转移酶-那西肽抗药性RNA甲基转移酶(nosiheptide-resistance-RNA methyltransferase,NHR)的生化功能,探讨细菌对含硫多肽类抗生素产生耐药性的分子机制。方法构建克隆,体外表达并纯化TSR和NHR蛋白;利用T7聚合酶体外转录系统体外转录生成23S rRNA底物片段;构建RNA甲基转移酶活性的体外检测体系,在14C-SAM存在的情况下,利用液体闪烁计数仪测定相应底物RNA被甲基化的程度;通过Gel shift方法观察RNA底物与TSR或NHR蛋白的体外相互结合作用。结果得到体外表达的纯化TSR、NHR蛋白及RNA底物;TSR蛋白和NHR蛋白均能将RNA底物甲基化,且NHR甲基转移酶的活性更强;TSR和NHR蛋白与RNA底物均有结合,结合强度均随蛋白浓度增加而增强。结论 TSR和NHR蛋白都能将23S rRNA的特异位点1067A甲基化,并能诱导细菌的抗生素耐药性。