人参皂苷Rd高产突变株Paecilomyces bainier sp229-7的生长特性和生物转化

目的通过研究突变株拟青霉菌sp229-7(Paecilomyces bainiersp229-7)的生长及转化底物情况,探讨突变株转化三七茎叶总皂苷的高效性。方法在不同条件下,运用摇瓶转化法考查菌株生长和转化底物特性;分别采用静息态细胞、胞外酶以及粗酶液,测定其对底物转化情况。结果菌体12～48 h之间生长最旺盛,36 h加入底物转化率最高,加入底物后72 h转化基本结束,转化产物只有人参皂苷Rd,底物投料量至少可以达到20 mg/mL,克分子转化率达80%以上,转化温度27℃～32℃之间最佳。静息态细胞、胞外酶以及粗酶液都可以将人参皂苷Rb1转化为人参皂苷Rd。结论与文献报道相比,Paecilomyces bainiersp229-7突变株具有良好的底物耐受性和专一性,快速生长的后期是底物投料的最佳时机,Rb1转化为Rd的时间缩短为3 d,投料量至少增加20倍,显著提高了转化效率,可望应用于工业生产。突变株的高转化效率可能与转化酶由细胞内产生并部分分泌到胞外有关,增加了酶与底物接触机会,避免了产物在胞内过量积累。

抗病毒前体药物的研究进展

前体药物 (简称前药 )为一类在体外活性较小或无活性 ,在体内经过酶或非酶作用 ,释放出活性物质而发挥药理作用的化合物。与母体药物相比 ,前药具有提高生物利用度 ,增加水溶性 ,延长作用时间 ,减少不良反应 ,克服首过效应 ,定位到达靶器官等特性。本文对抗病毒前体药物研究进展作介绍。

酶抑制剂类抗病毒药物的研究进展

综述了逆转录酶抑制剂、DNA聚合酶抑制剂、RNA聚合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、神经氨酸酶抑制剂、S-腺苷L-高半胱氨酸水解酶抑制剂、单磷酸次黄嘌呤核苷脱氢酶抑制剂和HIV-1整合酶抑制剂的研究进展。

基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化

目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U／mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50％硫酸铵沉 淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90％,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40％。

D-氨基酸氧化酶在毕赤酵母中的表达及快速纯化

目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌。结果高表达重组菌(PHD12)摇瓶发酵单位达到2 000 IU/L,发酵罐内达到22 500 IU/L。并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60%的总收率获得纯化产物。纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性。结论利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序。

芩连胶囊抗流感病毒活性的体内外实验

目的研究芩连胶囊在体内外的抗流感病毒活性。方法采用MTF法检测芩连胶囊对体外模型NDCK细胞的毒性浓度。采用CPE法测定芩连胶囊体外抑制流感有效浓度。动物模型为昆明种小鼠,口服给药,qd,共给药6 d。通过观察小鼠病死率、生命延长率及肺病变程度指标判定其抗流感病毒作用。结果芩连胶囊在体外能有效抑制流感A3病毒CPE的产生;口服芩连胶囊,能减少流感病毒FM1感染小鼠的病死率,延长存活时间,减轻小鼠肺组织病变程度。结论芩连胶囊在体内外均有良好的抗流感病毒活性。

阿昔洛韦脂质体的制备及其体外抗乙肝病毒的研究

目的制备阿昔洛韦脂质体并进行体外抗乙肝病毒作用研究。方法以反相蒸发法制备阿昔洛韦脂质体,同时考察其包封率的影响因素。以HPLC测定阿昔洛韦含量,透射电镜观察其形态,激光散射法测定其粒径大小,HepG2 2.2.15细胞模型检测阿昔洛韦脂质体对乙肝病毒HBs Ag和HBe Ag的抑制率。结果反相蒸发法中4℃时的包封率高于37℃时的包封率; 在本实验的PBS缓冲液离子强度范围内,随着离子强度升高,阿昔洛韦脂质体的包封率降低。脂质体中阿昔洛韦质量浓度为10.0,20.0,40.0,80.0 mg·L-1时对HBs Ag和HBe Ag的抑制率分别达到(7.5±1.2)%,(18.2±2.1)%,(52.6±2.7)%,(60.3±1.9)%和(8.3±0.8)%,(40.5±3.2)%,(47.4±1.2)%,(50.4±0.6)%。结论反相蒸发法可以制备阿昔洛韦脂质体;阿昔洛韦脂质体时HBs Ag和HBeAg有较好的抑制作用且明显优于游离阿昔洛韦。

那西肽产生菌S.actuosus选育及发酵条件的优化

目的 提高那西肽产量。方法 介绍那西肽产生菌活跃链霉菌S .actuosus(Z10 ) 的诱变育种 ,诱变的方法有紫外线、亚硝基胍及两者的联合诱变 ,并对高发酵单位菌种优化发酵条件和测定其生化曲线。结果 通过紫外线及亚硝基胍联合诱变获得高产菌株Z12 ,该菌种进行 4次传代试验显示稳定 ,经发酵条件优化后在培养基中添加 2 %黄豆粉 ,0 .0 1%硫酸锰可以提高那西肽产量。菌种Z12 相对于出发菌种Z10 提高那西肽产量达 5 8.9%。

重组肝靶向高密度脂蛋白-药物纳米粒的制备及处方优化

高密度脂蛋白(HDL)可逆向转运血浆中胆固醇至肝脏代谢,在肝靶向传递系统方面具有较大的开发潜力和、应用价值。载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)是HDL的主要组成部分。以apoA-Ⅰ为载体,水溶性抗肿瘤药盐酸多柔比星为模型药,采用薄膜分散法或硫酸铵梯度法制备重组高密度脂蛋白-盐酸多柔比星纳米粒,并以平均粒径或包封率为指标进行优化。结果表明,优化后的薄膜分散法所得制品平均粒径为(48.3±16.1)nm,包封率为(20.2±4.2)%。优化后的硫酸铵梯度法所得制品平均粒径为(113.8±10.3)nm,包封率为(83.3±8.5)%,且无溶血性。采用5%蔗糖为冻干保护剂制得的冻干,品于-20℃放置8个月,稳定性较好。