小续命汤通过下调USP9X调控NLRP3泛素化水平干预急性肺损伤的机制研究

目的探究小续命汤通过下调泛素特异性蛋白酶9X(USP9X)干预脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)炎症反应机制。方法制备含药血清,使用10%小续命汤含药血清预处理Ⅱ型肺泡上皮细胞。(1)小续命汤对LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症及功能的影响:实验分为空白组、LPS诱导组、LPS+小续命汤组。ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)水平。qRT-PCR和Western blot检测紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin的表达。(2)小续命汤通过USP9X发挥改善ALI细胞模型的炎症及功能:实验分为空白组、LPS诱导组、LPS+小续命汤组。PCR和Westernblot检测USP9X的表达。(3)USP9X与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白相互作用:人肺泡上皮细胞内USP9X过表达后,Co-IP联合质谱检测USP9X与NLRP家族互作,通过Western blot验证确定NLRP3与USP9X的关系。(4)小续命汤缓解LPS导致的人肺泡上皮细胞焦亡:实验分为空白组、LPS诱导组、LPS+小续命汤组。Western blot检测NLRP3、IL-1β、Pro-IL-1β、Caspase-1、Pro-Caspase-1,PCR检测NLRP3、IL-1β、Caspase-1,CCK-8检测细胞焦亡。结果(1)与模型组比较,小续命汤预处理显著减少LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8的蛋白表达水平(P<0.05),显著增加紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin的蛋白和mRNA表达水平。(2)与模型组比较,小续命汤含药血清预处理显著降低USP9X的转录及蛋白水平的表达(P<0.05)。(3)Co-IP联合质谱检测USP9X与NLRP家族互作,通过Western blot验证确定NLRP3与USP9X存在互作。(4)与模型组比较,小续命汤预处理显著减少LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞NLRP3、IL-1β、Pro-IL-1β、Caspase-1、Pro-Caspase-1的蛋白和转录水平,缓解细胞焦亡的发生(P<0.05)。结论小续命汤能有效改善急性肺损伤,该作用可能与下调USP9X调控NLRP3泛素化水平的表达相关。

国外口腔及舌脱落细胞学研究概况

脱落细胞学研究是舌诊研究中常用的技术。国外在口腔及舌脱落细胞学方面进行了大量研究,这对中医舌诊研究具有一定的参考价值。