HBV感染对肝癌细胞脂类代谢相关蛋白表达的影响

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是非细胞病变的病毒,其持续感染造成的肝脏损伤逐步引起肝脏炎症,进而导致肝纤维化、肝硬化,最终引发了80%的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。肝脏是机体代谢的重要器官,癌基因的异常活化以及抑癌基因的抑制失活会造成细胞代谢水平以及代谢方式的改变,此过程被称为细胞代谢重编程(metabolism reprogramming),代谢重编程是肝脏炎症向癌症转化的关键步骤。本研究通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、多重荧光免疫组化等方法检测HBV阳性细胞(或组织)与对照细胞(或组织)中脂质代谢关键基因的表达,在此基础上分析其功能和脂代谢的关系。结果显示,在稳定表达HBV的HepG2.2.15及HBsAg的Hep3B细胞中,脂代谢相关基因HMGCR、SREBP-2以及PSCK9的mRNA表达量显著上调,且在肝细胞癌患者的临床病理结果中相应蛋白表达水平也同步提高,提示HBV感染导致了相应代谢基因的高表达,且HBsAg是调控脂质代谢酶基因紊乱的关键蛋白。通过分析365例大样本肝癌患者的病理资料,本文发现脂代谢相关基因在肝癌组织中的高表达有预后变差的趋势,提示脂质代谢的紊乱可能是影响肝癌患者总生存期的危险因素。

肝癌的局部区域治疗

局部区域治疗在影像学引导下靶向杀伤肿瘤,是原发性肝癌最主要的非手术治疗方法,包括放射介入治疗(主要为肝动脉化疗栓塞)和局部消融治疗(瘤内乙醇注射、射频、微波、激光、高强度聚焦超声、冷冻等治疗)。肝动脉化疗栓塞主要应用于不能手术切除的中晚期肝癌,局部消融治疗适用于直径5 cm以下的小肝癌。肝癌局部区域治疗强调针对具体病情选择合适的方法进行规范治疗。本文简要评述各种局部区域治疗方法的指征、治疗原则、技术要点和疗效,并讨论手术切除与局部消融治疗小肝癌的选择。

慢性乙型肝炎血清标志物和肝功能指标在不同性别患者间的差异分析

目的探索不同性别慢性乙型肝炎患者病毒学和血清学指标的差异。方法回顾性研究了155例慢性乙型肝炎初治患者的血清学指标。并在HBeAg是否发生血清学转换的情况下分别比较了不同性别患者:HBeAg或抗-HBe、HBsAg、抗-HBc和HBV DNA:ALT、AST和GGT:TBil、Alb、Glb、PT、INR和PLT的相关性。结果在HBeAg阴性患者中,男性血清中的HBsAg和HBV DNA显著高于女性患者(分别为1696 IU/mL比137.9 IU/mL,P=0.0294;1.84×10^(7)拷贝/mL比6.69×10^(7)拷贝/mL,P=0.0039)。HBsAg在男性患者中始终与HBV DNA存在显著正相关(P<0.01),女性患者的这一相关性在HBeAg发生血清学转换后消失(P=0.5506);在HBeAg未发生转换时,男性患者的HBsAg水平与TBil和PT水平负相关(P=0.0158及P=0.0317)。结论在慢性乙型肝炎疾病进展的不同时期,不同性别患者不仅HBV DNA和HBsAg水平存在不同,其他血清学指标中也存在显著区别。

Survivin在原发性肝细胞癌中的表达及其与侵袭、转移的关系

目的研究 Survivin 基因在原发性肝细胞癌中的表达水平及其与肝癌侵袭转移的相关性。方法收集4种肝细胞癌细胞株,35例原发性肝癌组织标本及相应的癌旁组织,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测 Survivin mRNA 转录情况;Western blot 法检测 Survivin 蛋白表达。结果在 mRNA 水平4株肝癌细胞株随侵袭转移能力升高 Survivin 表达依次升高(P<0.01),HC-CLM6细胞株中 Survivin 表达水平最高。肝癌组织 Survivin mRNA 表达均为阳性,而癌旁组织内无一例阳性表达,Survivin mRNA 的表达水平在肝内转移组(1.082±0.213)显著高于肝内无转移组(0.799±0.324,P<0.05)。Western blot 的结果与 RT-PCR 结果一致,肝内转移组 Survivin 蛋白表达(0.892±0.198)显著高于肝内无转移组(0.342±0.237,P<0.05)。结论 Survivin 在原发性肝细胞癌中表达,且与侵袭转移等肿瘤的恶性生物学行为有关,Survivin 基因高表达可作为判断 HCC 侵袭性和进展的一个潜在重要指标。

血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除

目的建立血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除方法并观察其去除效果。方法应用Agilent公司去除人14种高丰度蛋白的多重亲和排除系统（Human 14 Multiple Affinity Removal System），去除血清中白蛋白、IgG和抗胰蛋白酶等14种高丰度蛋白，并用SDS．PAGE评价去除的效果。结果建立血清中高丰度蛋白的去除方法，可去除白蛋白等14种高丰度蛋白。SDS—PAGE图谱中去除高丰度蛋白后条带更清晰，部分低丰度蛋白得以显现。结论成功建立血清中高丰度蛋白的去除方法，可为下游的蛋白质组学技术奠定基础。

恶性肿瘤与Lumican的关系研究进展

基膜聚糖（Lumican）是一种蛋白聚糖，隶属于富含亮氨酸低分子蛋白聚糖（SLRP）家族，最早在牛角膜基质中发现。和其他SLRP蛋白一样，Lumican在结构上主要由4个结构域组成：（1）16个氨基酸残基构成的信号肽；（2）N端结构域，包含硫化酪氨酸及二硫键；（3）用于蛋白质相互作用的亮氨酸高度重复的分子结构；（4）羧基端结构域，包含两个保守半胱氨酸残基。

高淋巴道转移潜能人肝癌单克隆细胞株的优化和裸鼠移植模型的建立

目的从淋巴道转移潜能的人肝癌细胞株中分离出高转移潜能的单克隆细胞株并建立相应的裸鼠移植模型。方法采用有限稀释法，对高淋巴转移潜能的人肝癌细胞株HCCLY—H进行单克隆培养，得到25个单克隆细胞株（编号1～25）。取能在体外连续增殖的9个细胞株接种于4周龄裸鼠爪垫进行第1轮筛选，再取其中淋巴转移率为100％的4个细胞株进行肝脏原位移植，5周后解剖观察体内淋巴转移情况并进行病理学检查，筛选出不同转移潜能的细胞株。结果筛选出高淋巴转移、低肺转移的人肝癌单克隆细胞株，命名为HCCLYM—H2，该细胞株的肺转移率为20％，淋巴转移率为100％。结论成功建立人肝癌高淋巴道转移细胞株和裸鼠移植模型，同时证实了肿瘤细胞的异质性。

糖芯片技术在肿瘤研究中的应用

糖基化修饰是蛋白质常见的翻译后修饰之一,通过与糖结合蛋白如凝集素、抗体等相互作用调节肿瘤细胞侵袭、转移的能力及肿瘤异质性。通过化学合成法、化学-酶合成法或释放天然聚糖构建的糖芯片是分析聚糖与糖结合蛋白相互作用的重要工具。文中综述了常见的点制糖芯片的技术及糖芯片在癌症疫苗、单克隆抗体及诊断标志物中的广泛运用。由于肿瘤发生的各个环节都伴随着聚糖结构的改变,利用糖芯片探究肿瘤细胞特异表达的聚糖所参与的生理病理过程具有重大意义。

糖蛋白质在肝癌中的临床诊断价值

原发性肝癌是我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因,研发新型生物标志物应用于肝癌患者的早诊早治对于提高生存率十分重要。目前临床上常见的肿瘤标志物大多是糖蛋白质,组学技术对于探索糖蛋白质在肝癌中的临床诊断价值具有重要作用。本文基于肿瘤临床诊断中的糖蛋白质标志物,分析了其诊断方法、问题与挑战;介绍针对糖蛋白质研究的相关技术,包括高通量组学和单一糖蛋白质检测方法,以及基于这些技术发现肝癌潜在的糖蛋白质标志物;并且展望糖蛋白质在肝癌临床诊断中的潜力与应用价值。

革命性的ALPPS术治疗传统手术不能切除的巨大肝癌

联合肝脏分隔和门静脉结扎二步肝切除术(ALPPS)是肝癌领域近十年来的革命性技术,它可以在短时间内使剩余肝脏体积迅速增大,使原本因剩余肝脏体积不足而无法手术切除的肝肿瘤(特别是巨大肝癌)患者获得手术切除的机会。给晚期不可手术切除的巨大肝癌患者带来巨大生存获益。作者回顾分析了ALPPS的发展过程和特点,并从ALPPS的适应证选择、手术的风险及安全性因素、技术的改良以降低胆漏的发生等,多方面详细介绍了目前ALPPS应用于巨大肿瘤的治疗前景和优势。

大鼠肝脏非实质细胞的分离与培养、鉴定

目的肝脏非实质细胞主要包括肝星状细胞、肝窦内皮细胞和巨噬细胞，上述3种细胞在肝硬化、肝癌等疾病的发生和进展中起重要作用；本研究旨在建立上述3种肝非实质细胞的分离方法，培养并鉴定其纯度。方法采用体外酶灌注消化肝脏，将肝脏组织剪碎并进一步消化成单细胞悬液，密度梯度离心技术结合贴壁培养分离法分离肝脏非实质细胞，以锥虫蓝染色检测分离所得细胞的存活率，采用自发荧光、细胞形态观察、免疫荧光以鉴定所获得细胞。结果从大鼠肝脏分离出的3种非实质细胞纯度较高，大于90％；其中肝星状细胞、肝窦内皮细胞存活率在85％以上，可传代培养7～10代。结论本研究采用体外酶灌注消化法结合密度梯度离心技术，从大鼠肝脏成功分离肝星状细胞、肝窦内皮细胞和肝巨噬细胞，该方法相对简单、易操作。

肝脏腺瘤规范化诊治

肝脏腺瘤是一种少见的肝脏良性肿瘤,多发生于青年女性。据报道,发病与长期应用口服避孕药密切相关。肝脏腺瘤无特异性的临床表现,诊断主要依靠影像学检查及活检。肝脏腺瘤具有易出血、易恶变的特点,临床上需积极干预处理。近来通过分子生物学技术,将肝脏腺瘤分为特点明显的3个大类:炎性肝脏腺瘤、肝细胞核因子1α变异性肝脏腺瘤和β连环蛋白激活肝脏腺瘤。3个亚类在病理学特征、癌变预后等方面均不相同,为进一步个体化治疗提供了依据。