新生儿神经重症监护单元如何应用振幅整合脑电图

目前对危重新生儿需要脑电监测这一理念已经达成共识.全导联视频脑电图是脑电监护的金标准,根据10-20电极国际标准导联放置方法,一般至少要安放16个电极才能获得满意的新生儿脑电图,特别是对于惊厥的诊断[1].但该设备操作复杂,需要专业人员进行阅读,且不能随时进行检查和实时获得结果,因此只在大型新生儿中心应用.振幅整合脑电图（aEEG）的出现克服了全导联视频脑电图的限制,使新生儿脑功能长期连续监测成为可能.aEEG是一种简单化的脑电监护设备,

新生儿2q37缺失伴4q部分三体全基因组拷贝数变异(CNVs)分析

目的应用SNP芯片检测方法,对染色体结果为46,XX,add(2)(q37)的1例新生儿多发畸形患儿进行全基因组拷贝数变异(copy number variants,CNVs)的检测,分析其中罕见CNVs与表型的相关性。方法对于1例新生儿多发畸形病例,采用Affymetrix SNP芯片筛查全基因组CNVs,经过筛选得到罕见潜在致病性CNVs。将这些CNVs片段结合患儿的表型进行文献比对。结果本例患儿的主要表型包括:小耳畸形、外耳廓卷曲、小下颌、颈蹼、双手通贯掌、双足内翻、室间隔缺损、动脉导管未闭、卵圆孔未闭、肺动脉高压、二尖瓣狭窄、脊柱后凸畸形。本例患儿共得到潜在致病性CNVs片段4个,大小为4 282.936kb^17 912.863kb,集中在2号、4号染色体长臂,邻近合并后得到2个,分别为2q37.1~q37.3缺失和4q32.3~q35.2重复。文献回顾,发现本例患儿耳部、心脏、骨骼畸形等表型与2q37缺失综合征有关;而更多相应表型如耳部、下颌、颈部畸形和通贯掌、足内翻、心脏畸形、脊柱畸形则与4q部分三体综合征有交叉。结论本研究首次报道了1例罕见的2q37缺失综合征合并4q部分三体综合征的复杂染色体变异。

Toll样受体2和4在新生儿感染时的变化及其临床意义

目的观察 Toll 样受体2和4在新生儿不同感染时的变化,探讨它们在新生儿抗感染免疫中的作用。方法收集200例不同胎龄(26～43周)新生儿外周血,分为败血症组、细菌性肺炎组、细菌性脑膜炎组、尿路感染组、先天性梅毒组和非感染组。采用荧光定量 PCR 法测定 TLR2和4mRNA 转录水平(与β-actin 拷贝数比值),流式细胞仪检测外周血单核细胞表面 TLR2和 TLR4蛋白表达水平(荧光强度)以及 TLR2和 TLR4阳性细胞百分比。结果 1.TLR2 mRNA 在败血症组明显增加(6.14±0.80),在 G^+菌败血症组表达最为显著(6.43±0.74),细菌性肺炎组(5.49±0.62)、细菌性脑膜炎组(5.61±0.60)和先天性梅毒组(5.89±0.38)增加也很显著。细胞表面 TLR2蛋白表达与 mRNA 变化一致。2.TLR4 mRNA 在 G^-菌败血症组表达最高(6.78±0.79)。在细菌性肺炎组(5.33±1.07)、细菌性脑膜炎组(5.87±0.70)和尿路感染组(5.38±0.91)也明显增高。TLR4阳性细胞百分比在各感染组显著增加。3.G^+菌败血症组 TLR2 mRNA 显著高于 TLR4 mRNA 的表达,G^-菌败血症组 TLR4 mRNA 显著高于 TLR2 mRNA 的表达。TLR2阳性细胞百分比水平各组均明显高于TLR4。结论新生儿感染时 TLR2 mRNA/蛋白和 TLR4 mRNA 显著增高,特别是在严重感染败血症组。提示 TLR2和 TLR4信号传导途径参与新生儿抗感染免疫机制,为进一步深入了解新生儿感染免疫机制提供实验基础。

新生儿脑损伤与早产儿管理——第三届上海国际新生儿医学论坛会议纪要

为促进我国新生儿医学的蓬勃发展，增进国内新生儿医学工作者与发达国家的学术交流和国际合作，第三届上海国际新生儿医学论坛（3rdShanghaiNeonatalForum）于2011年4月7日至9日在复旦大学附属儿科医院隆重召开，并取得圆满成功。本次会议由复旦大学附属儿科医院、卫生部新生儿疾病重点实验室，郑州大学第三附属医院，瑞典哥德堡大学和加拿大新生儿协作网联合举办，国内外专家、学者及代表共350余位参会。会议围绕“新生儿脑损伤与早产儿管理”的主题，展开了深入交流和热烈讨论。现就主要内容报告如下。

PEX1基因变异致新生儿Zellweger综合征二例并文献复习

目的探讨PEX1基因变异致新生儿Zellweger综合征患儿的临床表型和基因型特点。方法对复旦大学附属儿科医院收治的新生儿Zellweger综合征患儿临床资料进行回顾性分析。并以“过氧化物酶体疾病”、“Zellweger综合征”、“Zellweger谱系障碍”、“PEX1基因”为关键词,检索中国知网、维普数据库和万方数据库,以“PEX1”为基因名称检索人类遗传变异数据库(human gene mutation database,HGMD),以“Zellweger syndrome”、“Zellweger spectrum disorder”、“PEX1 gene”为关键词检索生物医学文献数据库(PubMed)、Web of Science数据库和Embase数据库,检索时间自建库至2018年11月8日收录的文献,总结Zellweger综合征患儿的临床表型和基因型特点。结果本院共收治Zellweger综合征新生儿2例,男女各1例,均在生后即出现肌张力低下及喂养困难等临床表现,影像学检查均提示脑室扩张。临床全外显子组测序分析回报2例均为PEX1基因复合杂合变异,例1为外显子12终止变异c.2050C>T(p.Q684X)(NM_000466)和外显子20终止变异c.3043G>T(p.E1015X)(NM_000466),随访至2月龄有惊厥发作;例2为外显子5移码变异c.892_895dupTATA (p.Asn299IlefsTer2)(NM_000466.2)和外显子19剪切位点变异c.2927-2delA(NM_000466),患儿于新生儿期死亡。文献检索目前国内尚无PEX1基因变异所致新生儿Zellweger综合征的病例报道。检索国外文献共收集6篇13例患儿,加上本文2例共15例。主要临床表现为肌张力低下、肝功能异常、颅缝增宽(囟门增大)、眼距过宽及宽鼻梁等;携带的2个变异位点均为错义变异共2例,分别诊断为轻型Zellweger谱系障碍和非典型Zellweger综合征;携带2个非错义变异(移码变异、终止变异、剪切位点变异)的病例共10例,均诊断为Zellweger综合征。结论PEX1基因变异致新生儿Zellweger综合征主要表现为肌张力低下、肝功能异常、颅缝增宽(囟门增大)、眼距过宽及宽鼻梁,携带移码变异、终止变异或剪切位点变异的患儿具有较严重的临床表型。

三日龄新生大鼠缺血性脑白质损伤模型的实验研究

目的建立新生大鼠脑白质损伤动物模型,阐述脑白质损伤后脑室下区(SVZ)细胞凋亡的变化。方法3日龄新生大鼠随机分为实验组(n=40)、对照组(n=40),采用双侧颈总动脉结扎术(BCAO)制作缺血性脑白质损伤动物模型。电子天平测量术后不同时点体重、脑重变化;HE染色和快蓝染色观察脑组织病理形态改变;TUNEL方法检测SVZ细胞凋亡。结果实验组体重、脑重增长明显慢于对照组(术后7d体重15.89±0.82g比23.41±1.25g,t=40.51;脑重0.85±0.11g比0.98±0.09g,t=7.38,P<0.01)。HE染色可见实验组神经细胞变性、坏死,侧脑室面积较对照组明显增大(术后14d21.5±6.0mm2比13.8±2.9mm2,t=9.32,P<0.01)。快蓝染色可见实验组纹状体髓鞘数目较对照组明显减少(术后14d42.9±5.3比81.8±7.1,t=35.43,P<0.01)。术后48hSVZ细胞凋亡增多,72h达高峰,实验组较对照组明显增多(术后72h69.1±3.5比44.0±2.3,t=48.37,P<0.01)。结论BCAO制作新生大鼠脑白质损伤模型成功;脑白质损伤早期细胞凋亡明显。

口服益生菌预防早产儿严重坏死性小肠结肠炎疗效和安全性的Meta分析

目的评价口服益生菌预防早产儿严重坏死性小肠结肠炎(NEC)的疗效和安全性。方法制定原始文献的纳入标准、排除标准及检索策略,检索PubMed、EMBASE、Ovid、Springer、中国期刊全文数据库、万方数据库、维普中文科技期刊数据库及中国生物医学文献光盘数据库等。应用Cochrane协作网推荐的方法评价文献质量。采用RevMan 4.22软件对满足纳入标准的有关口服益生菌预防早产儿严重NEC(Ⅱ期及以上)的RCT研究进行Meta分析。主要观察指标为严重NEC的发生率、总病死率、NEC相关病死率和院内感染导致脓毒症的发生率。结果共检索到107篇文献,符合纳入标准的10项RCT研究(共2 117例早产儿)进入Meta分析,文献质量评价8篇为A级,1篇为B级,1篇为C级。各研究间的基线水平差异较大,出生体重,胎龄,益生菌应用的种类、剂量、开始应用时间和治疗持续时间等均有差异。Meta分析结果表明,益生菌组可显著降低严重NEC的发生率和总病死率,OR分别为0.34(95%CI:0.22～0.55,P<0.000 1)和0.36(95%CI:0.22～0.58,P<0.000 1)。无证据表明预防性口服益生菌可减少院内感染导致脓毒症的发生率和NEC相关的病死率,OR分别为0.94(95%CI:0.62～1.42)和0.48(95%CI:0.16～1.47)。所有研究均未见口服益生菌导致相应菌株全身感染的发生。结论预防性口服益生菌可显著降低早产儿严重NEC的发生率和总病死率。对低出生体重儿可给予口服益生菌预防NEC的发生。现有的研究尚不能证实预防性口服益生菌对超低出生体重儿的疗效和安全性。有关超低出生体重儿预防性口服益生菌的安全性和疗效仍有待大规模的临床多中心RCT研究予以明确。

血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子-2及雌激素受体在早产儿视网膜病发病机制中的作用

目的 测定新生小鼠视网膜正常发育及视网膜病时血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）和雌激素受体（ER）表达的改变,了解它们在早产儿视网膜病（ROP）发病机制中的作用.方法 选择7日龄（P7）C57BL/6J新生小鼠474只,雌雄各半,分为吸氧组和对照组两大组,再按性别分成4小组,用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）测定VEGF、FGF-2和ER的mRNA水平,用免疫组化测定它们的蛋白水平.具体分组及取材时间为：组1（n=126）,吸氧组,雌性;组2（n=126）,吸氧组,雄性,两组均自吸氧后每天分离视网膜至P21（P8～P21）行RT-PCR,每天摘眼石蜡包埋后行免疫组化;组3（n=111）,对照组,雌性;组4（n=111）,对照组,雄性,均自P7起每天分离视网膜至P17（P7～P17）行RT-PCR,自P7起每天摘眼至P21（P7～P21）行免疫组化.结果 （1）VEGF mRNA在正常小鼠自P7起上升,P9达高峰,P11起下降并始终维持低水平;在吸氧组自P8起显著下降,且在整个吸氧阶段持续降低,至出氧箱后缓慢上升,自P15起显著上升,并和对照组形成显著差异,受氧浓度的调节非常明显.FGF-2 mRNA在正常小鼠始终维持相对稳定的低水平;在吸氧组,吸氧期间无明显变化,出氧箱后3 d开始上升.ER mRNA在正常小鼠自P7起上升,P9达高峰,P11起下降并始终维持低水平;在吸氧组,吸氧期间变化与对照组相似,出氧箱后5 d开始上升,并维持较高水平直至P21.这3个细胞因子的蛋白水平变化均晚于其基因水平变化,但变化趋势基本相同.（2）性别和吸氧都不能单独影响上述细胞因子的表达（P＞0.05）;日龄可独立地影响它们的表达;吸氧和日龄两因素结合起来可显著影响它们的表达（P＜0.000 1）.结论 引起ROP发病的根本原因是早产,吸氧是其重要的外因;VEGF、FGF-2和ER参与血管的形成,在视网膜血管正常发育和ROP的发病机制中起重要作用;VEGF直接受氧浓度调节,在众多细胞因子中可能起关键性作用.

全身轻度降温对窒息新生猪血流动力学的影响

目的明确体温下降3～5℃的全身低温脑保护治疗是否对窒息新生猪的血流动力学存在负面影响。方法生后7 d龄上海种白猪25只,双侧颈总动脉阻断,同时机械通气,吸入低氧气体(FiO_2 6%)持续30 min,制备缺氧缺血脑损伤模型。研究对象随机分成A组(常温39℃,n =9)、B组(亚低温36℃72 h,n=8)和C组(亚低温34℃72 h,n=8)。采用超声心动图评估左、右心室收缩和舒张功能。应用SPSS统计软件进行统计学处理。结果与缺氧缺血后4 h相比,降温72 h各组心率明显下降(P<0.05),各组左室射血前期时间(LPEP)/左室射血时间(LVET)、右室射血加速时间(RACT)/右室射血时间(RVET)以及每分输出量无明显差别;二尖瓣E/A、三尖瓣E/A值与缺氧缺血前、缺氧缺血后4 h比较差异均无统计学意义。治疗后各组间平均动脉压、LPEP/LVET、RACY/RVET、每分输出量、每搏输出量、二尖瓣E/A、三尖瓣E/A值比较差异无统计学意义。结论体温下降3～5℃维持72 h的全身轻度降温未加重窒息新生猪血流动力学异常。

持续吸入不同浓度氧气对新生大鼠肺血管内皮生长因子及其受体mRNA表达的影响

目的探讨持续吸入不同浓度氧气对新生大鼠肺血管内皮生长因子（vEGF）及其受体1（VEGFRl）和受体2（VEGFR2）mRNA表达的影响。方法新生足月SD大鼠32只，随机分为对照组和实验组。实验组生后12h开始持续吸入氧气，按不同的吸入氧浓度，将实验组又分为30％O2组、50％O2组和75％O2组。对照组吸入空气。每组8只。于实验开始后21d处死实验大鼠，取出右肺下叶，RT—PCR技术检测VEGF、VEGFRl和VEGFR2mRNA表达，根据2^-△△CT的计算方法，实验组基因表达差异用实验组相对于对照组基因表达量的倍数表示。结果与对照组相比，30％O2对新生大鼠肺VEGF及其受体mRNA表达无影响。75％O2组VEGFmRNA表达是对照组的0．48倍；50％O2组、75％O2组VEGFR1 mRNA分别为对照组的0．18倍和0．06倍；VEGFR2mRNA分别为对照组的0．22倍和0．10倍，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论长时间吸入低浓度氧对新生大鼠肺VEGF及其受体mRNA影响不明显，而持续吸人中等浓度及较高浓度氧可降低VEGF及其受体mRNA的表达。

脑缺血对新生大鼠脑室下区神经新生的影响

目的观察3日龄新生大鼠缺血性脑损伤后脑室下区（subventricular zone，SVZ）新生细胞的变化，探讨未成熟脑缺血性损伤后的内源性修复机制。方法3日龄新生SD大鼠32只随机分为实验组和对照组，每组16只。实验组结扎双侧颈总动脉，对照组不结扎。两组大鼠均于术后5～7d给予5-溴脱氧尿嘧啶（5-bromodeoxyufidine，BrdU），每次50mg／kg腹腔注射，每12h1次×6次。两组大鼠分别于术后14d、28d处死取脑，采用免疫荧光染色方法检测BrdU、Ⅲ型β-微管蛋白（class Ⅲβ—tubulin，TuJ1）、少突胶质细胞O抗原-4（oligodendrocyte O antigen-4，O4）以及胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）的表达变化，观察SVZ各类新生细胞的变化。结果实验组术后14d和28d新生神经元（BrdU＋／TuJ1＋双标阳性细胞）分别为（7800±800）个／视野和（10700±1400）个／视野、新生少突胶质细胞（BrdU＋／O4＋双标阳性细胞）分别为（6100±1000）个／视野和（7300±1400）个／视野，新生星形胶质细胞（BrdU＋／GFAP＋双标阳性细胞）分别为（4500±700）个／视野和（6700±1100）个／视野，均随着时点的延长而增加（P〈0．01）；且各新生神经元数目较同时点对照组明显增多，差异有统计学意义（P均〈0．01）。结论新生大鼠缺血性脑损伤后，SVZ新生神经元、新生少突胶质细胞、新生星形胶质细胞增多，提示未成熟脑SVZ在缺血性损伤后有修复作用。

早产儿脑病的研究现状

近年来,国内外早产发生率呈不断增加的趋势。由于新生儿救治水平的提高,早产儿的存活率也在显著提高,然而幸存的早产儿容易发生脑损伤,已经成为一个严重的公共健康问题。围产期缺氧缺血、感染/炎症是早产儿脑病发生的重要因素,造成少突胶质前体细胞与皮层等处神经元的损伤。脑室周围白质的弥漫性损伤与神经元/轴突的破坏是当前早产儿脑病的重要特点,导致认知、行为障碍、脑瘫等后遗症。近年来,影像学特别是磁共振在临床诊断及随访早产儿脑病中起非常重要作用。本文总结了早产儿脑病的特点及诊断方式,以期为早产儿脑病的临床防治策略提供新的方向。

早产儿视网膜病危险因素的前瞻性多中心队列研究

目的通过多中心调查，前瞻性研究早产儿视网膜病（ROP）发病相关危险因素。方法将2005年1月1Et至2006年2月28日在ROP协作网内11家医院出生或收治的出生体重〈2000g的早产儿或低出生体重儿纳入研究，按时进行ROP筛查，并记录完整的临床资料，调查ROP发病率，分析相关危险因素。结果882例早产儿纳入研究，完成ROP随访752例，123例发生ROP（16．4％）。ROP组出生时平均胎龄为（30．82±0．20）周，平均出生体重（1430±25）g，平均吸氧时间为（11．6±1．4）d；无ROP组出生时平均胎龄（32．56±0．09）周，平均出生体重（1636±10）g，平均吸氧时间为（4．4±0．3）d。单因素分析提示窒息[相对危险度（RR）=1．462]、吸氧时间〉5d（职=2．644）、肺表面活性物质的应用（RR：1．880）、肺炎（RR=2．138）、贫血（RR=3．039）、呼吸窘迫综合征（NRDS，RR=2．325）和酸中毒（RR=1．507）与ROP相关（均P〈0．05），多因素分析提示出生体重[比值比（OR）=0．998]、呼吸暂停（OR=1．653）和输血（OR=1．763）是ROP独立作用的因素（均P〈0．05）。结论在诸多因素中，窒息、吸氧、贫血、NRDS、酸中毒与ROP相关，出生体重、呼吸暂停、输血是ROP独立危险因素。

磷酸酯酶和张力蛋白同源物基因的生物学特性及其在中枢神经系统中的作用

在10号染色体上缺失的磷酸酯酶和张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homolog，PTEN）是1997年克隆出的一个新基因，在多种人类肿瘤中都发现存在PTEN基因的突变或表达水平的异常，因此PTEN被认为是重要的肿瘤抑制基因。

感染／炎症与早产儿脑白质损伤

感染，炎症是引起早产儿脑白质损伤的重要原因。其机制涉及炎症因子诱发的一系列级联反应，包括自由基损伤、兴奋性氨基酸释放、钙稳态失衡、细胞凋亡等。该文就它们在早产儿脑白质损伤中的机制及其治疗进展加以综述。

重组人色素上皮衍生因子在真核细胞SP2／0中的瞬时表达及活性鉴定

目的构建抑制早产儿视网膜病新生血管形成的重组人色素上皮衍生因子（pigment epithelium—derived factor，PEDF）真核表达载体，检测其在小鼠骨髓瘤细胞SP2／0中的瞬时表达。方法根据已知的GenBank中人PEDFcDNA成熟蛋白编码区序列设计特异性引物，以全基因合成的pUC57-PEDF质粒为模板，经聚合酶链反应技术扩增人PEDF基因，定向克隆至真核表达载体pIRESneo3中，获得重组表达质粒pIRESneo3-PEDF。将重组质粒pIRESneo3-PEDF与脂质体转染试剂Lipofectamine^TM 2000混合后转染小鼠骨髓瘤细胞SP2／0，采用酶联免疫吸附试验及Western印迹对表达产物进行鉴定。收集转染细胞培养液上清，采用四甲基偶氮唑盐比色法检测重组PEDF活性。结果聚合酶链反应技术、酶切鉴定和测序结果表明，pIRESneo3PEDF表达载体构建成功。脂质体法将表达质粒成功转染到SP2／0中，经培养，可分泌表达PEDF，且经Western印迹检测证明为人PEDF，分子量为50000。转染36h上清液中PEDF浓度最高，为（0．92±0．04）ug／ml。转染36h细胞培养液上清对人脐静脉内皮细胞的抑制作用最强（P〈0．05）。结论成功构建人PEDF真核表达质粒pIRESneo3PEDF，转染细胞可瞬时分泌表达有活性的人PEDF，对人脐静脉内皮细胞增殖有抑制作用，为开展下一步稳定转染表达及蛋白纯化奠定基础，为早产儿视网膜病的防治带来新的希望。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因致病变异谱及表型谱的单中心分析

目的 分析葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）基因的热点致病变异和新生儿中携带G6PD基因致病变异人群的表型谱.方法 整理人类基因突变数据库中G6PD基因已知致病变异,分析2016年1月至2017年6月复旦大学附属儿科医院（以下简称复旦儿科）分子诊断中心测序数据库中的7 966例（2 357例为新生儿,5 609为非新生儿）临床怀疑遗传性疾病患儿的全外显子检测和临床外显子检测数据,获得携带G6PD基因已知致病变异的阳性样本集,分析G6PD基因热点致病变异.并分析G6PD基因致病变异阳性样本集中新生儿患儿的葡萄糖-6-磷酸酶活性特点和临床表型谱.结果 （1）在复旦儿科7 966例二代测序数据中,共检出86例（1.1％）携带G6PD基因已知致病变异,为阳性样本集.阳性样本集中有新生儿患儿共51例（男33例,女18例）,其43例有葡萄糖-6-磷酸脱氢酶酶活性检测数据（男26例,女17例）.（2）86例中,检出最多的前四位致病变异为Arg463His、Arg459Leu、Leu342Phe、Val291Met,共72例（84％）.（3）携带相同致病变异的男性新生儿患儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性水平各异：携带Arg463His的13例患儿中有9例酶活性为Ⅲ类,1例酶活性为Ⅳ类,3例酶活性数据缺失;携带Arg459Leu的10例患儿中有4例酶活性为Ⅱ类,4例酶活性为Ⅲ类,2例酶活性数据缺失;携带His32Arg变异的2例患儿中1例酶活性为Ⅱ类,另1例为Ⅲ类.携带相同致病位点且酶活性一致的男性新生儿患儿临床表现差异明显：有9例携带Arg463His且酶活性为Ⅲ类,其中6例诊断高胆红素血症,2例达到换血标准,2例有溶血表现;有4例携带Arg459Leu且酶活性为Ⅱ类,其中3例诊断高胆红素血症;有4例携带Arg459Leu且酶活性为Ⅲ类,其中2例诊断高胆红素血症,1例达到换血标准;有3例携带Val291Met且酶活性为Ⅲ类,其中1例诊断高胆红素血症.结论 Arg463His、Arg459Leu、Leu342Phe、Val291Met为G6PD基因的热点变异.携带相同G6PD致病变异同性别患儿的表型谱有较大差异,携带相同致病位点且酶活性一致的同性别患儿临床表现亦差异.