磷酸酯酶和张力蛋白同源物基因的生物学特性及其在中枢神经系统中的作用

在10号染色体上缺失的磷酸酯酶和张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homolog，PTEN）是1997年克隆出的一个新基因，在多种人类肿瘤中都发现存在PTEN基因的突变或表达水平的异常，因此PTEN被认为是重要的肿瘤抑制基因。

重组人色素上皮衍生因子在真核细胞SP2／0中的瞬时表达及活性鉴定

目的构建抑制早产儿视网膜病新生血管形成的重组人色素上皮衍生因子（pigment epithelium—derived factor，PEDF）真核表达载体，检测其在小鼠骨髓瘤细胞SP2／0中的瞬时表达。方法根据已知的GenBank中人PEDFcDNA成熟蛋白编码区序列设计特异性引物，以全基因合成的pUC57-PEDF质粒为模板，经聚合酶链反应技术扩增人PEDF基因，定向克隆至真核表达载体pIRESneo3中，获得重组表达质粒pIRESneo3-PEDF。将重组质粒pIRESneo3-PEDF与脂质体转染试剂Lipofectamine^TM 2000混合后转染小鼠骨髓瘤细胞SP2／0，采用酶联免疫吸附试验及Western印迹对表达产物进行鉴定。收集转染细胞培养液上清，采用四甲基偶氮唑盐比色法检测重组PEDF活性。结果聚合酶链反应技术、酶切鉴定和测序结果表明，pIRESneo3PEDF表达载体构建成功。脂质体法将表达质粒成功转染到SP2／0中，经培养，可分泌表达PEDF，且经Western印迹检测证明为人PEDF，分子量为50000。转染36h上清液中PEDF浓度最高，为（0．92±0．04）ug／ml。转染36h细胞培养液上清对人脐静脉内皮细胞的抑制作用最强（P〈0．05）。结论成功构建人PEDF真核表达质粒pIRESneo3PEDF，转染细胞可瞬时分泌表达有活性的人PEDF，对人脐静脉内皮细胞增殖有抑制作用，为开展下一步稳定转染表达及蛋白纯化奠定基础，为早产儿视网膜病的防治带来新的希望。