非人类灵长类恒河猴衰老与热量限制抗衰老研究进展

非人类灵长类恒河猴是研究人类衰老和热量限制抗衰老的理想模型。与人类衰老一样,恒河猴由于增龄性神经内分泌、免疫、神经系统、心血管系统等衰老,出现相应的老年病。热量限制能有效地延缓恒河猴原发性衰老和继发性衰老。其机制可能是调节代谢相关的信号通路,抑制氧化应激-炎性衰老-DNA损伤;同时激活DNA损伤修复。然而,不同的实验设计、饲养环境、饮食组成和遗传背景等可能对热量限制抗长生命周期恒河猴原发性衰老和继发性衰老作用存在不同的影响。优化实验设计,控制这些变量,缩短实验周期将更有利于明确CR抗衰老的作用及其机制。

石杉碱甲对D-半乳糖诱导老年性聋大鼠听觉功能的影响评估

目的通过测试听性脑干反应和复合动作电位评估石杉碱甲对D-半乳糖致老年性聋大鼠听觉功能的改变。方法出生后3～4 W的Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,模型组用5%D-半乳糖(200 mg/kg)行颈背部皮下连续注射8 W制备大鼠老年性聋模型;干预组用5%D-半乳糖(200 mg/kg)和石杉碱甲(0.1 mg/kg)行大鼠颈背部皮下注射;空白组作为对照。用药前、后分别检测大鼠听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)以检测听觉敏感性;复合动作电位(compound actionpotential,CAP)测试耳蜗输出幅度;以成对短声(pair clicks)为时间紧张性刺激,通过各CAP2/CAP2(20 ms)比值与短声间隔的关系函数反映耳蜗时间分辨能力。β-半乳糖苷酶染色下丘衰老细胞。结果 3组动物用药前后ABR阈值无明显改变(P>0.05);和模型组相比,干预组8kHz下80 dBSPL时ABRⅢ波潜伏期、I～V波间期缩短,提示听觉信号从外周到中枢的传入时间减少;以成对短声CAP响应所代表的耳蜗时间分辨力干预组高于模型组,但仍低于对照组;模型组下丘衰老细胞密度最高,干预组次之,对照组最少。结论石杉碱甲可以提高D-半乳糖致老年性聋大鼠与言语识别相关的听觉处理能力,为临床寻找改善老年患者听觉功能药物提供实验支持。

螺旋神经节外周投射发育的体外观察

目的体外观察螺旋神经节外周投射发育情况,为建立螺旋神经节体外支配模型提供实验基础。方法采用18只胚胎第16天小鼠Corti器(36只Corti器,分为三组,每组12只,分别体外培养2、3、4天)及4只出生当天小鼠的8只Corti器,全基底膜组织固定后,行免疫组织化学染色铺片,共聚焦显微镜下观察体外螺旋神经节外周投射发育过程,并比较其与在体发育的异同。结果胚胎16天小鼠Corti器体外培养2天后(相当于在体胚胎18天),I型和II型螺旋神经节细胞树突向外周放射性生长并同时投射至内毛细胞和外毛细胞;培养3天后(相当于在体出生当天),两型螺旋神经节细胞树突向外继续生长,聚集形成放射性纤维束,其中,纤维在内毛细胞底部形成内螺旋丛,外毛细胞区纤维沿外毛细胞分布生长并向蜗轴底回延伸;培养4天后(相当于在体出生1～2天),螺旋神经节外周纤维进一步退缩、纯化,形成明显的内螺旋束和相对不规则的外螺旋束。结论体外培养的小鼠胚胎期Corti器尽管没有传出纤维的支配,仍保持了与在体相同的外周靶支配模式,证明体外培养的螺旋神经节支配模型可以作为研究两型神经节树突发育的替代模型。

石杉碱甲对D-半乳糖诱导老年性聋的局部抗炎作用

目的研究石杉碱甲对D-半乳糖诱导的老年性聋大鼠的局部抗炎作用。方法将30只SD雄性大鼠随机平均分为3组,均行颈背部皮下连续注射8周:D-gal组予5%D-半乳糖(200mg/kg);D-gal+HupA组予同体积的5%D-半乳糖(200mg/kg)和石杉碱甲(0.1mg/kg),对照组予同体积生理盐水。利用免疫组织化学检测耳蜗组织中的施万细胞和NF-κB的活化情况;通过定量RT-PCR分析检测耳蜗组织中的炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α。结果与对照组相比,D-gal组的施万细胞被激活、NF-κB活化,而D-gal+HupA组的施万细胞和NF-κB变化无差别;同时D-gal组和D-gal+HupA组相比,Dgal+HupA组耳蜗组织内IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显低于D-gal组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论石杉碱甲可以抑制D-半乳糖诱导老年性聋大鼠的耳蜗组织内的施万细胞的激活和NF-κB活化,进而抑制炎症因子的释放,起到局部抗炎作用。

脂联素基因SNPs＋45T〉G和SNPs＋276G〉T与老年非糖尿病冠心病的相关性

目的探讨老年人脂联素基因SNPs＋45T〉G和SNPs＋276G〉T与老年非糖尿病冠心病的相关性。方法选择2005年11月至2009年12月人住我院心血管内科病房，行冠状动脉造影、年龄≥65岁的非糖尿病患者688例，根据冠状动脉造影结果分为冠心病组396例和对照组292例。采用聚合酶链式反应／连接酶检测反应方法检测多态性位点。结果SNPs＋45T〉G基因表型为突变型GG者发生冠心病的危险性较TT型者显著增加（OR=2．65，P〈0．01）；SNPs＋276G〉T基因表型为GG型者发生冠心病的危险性较TT型者显著增加（OR=2．36，P〈0．01）；杂合子GT型者发生冠心病的危险陛也较TT型者显著增加（OR=1．66，P〈0．05）。logistic回归分析显示，SNPs＋45T〉G基因表型为GG型，SNPs＋276G〉T基因表型为GG和GT型是冠心病发病独立的危险因素。SNPs＋45T〉G和SNPs＋276G〉T位点存在连锁不平衡，脂联素基因SNPs＋45T〉G基因表型为突变型GG型者SNPs＋276G〉T基因表型均为GG型，而SNPs＋276G〉T基因表型为突变型TT型者SNPs＋45T〉G基因表型均为TT型，即GGGG基因表型和TTTT基因表型，且SNPs＋45T〉G和SNPs＋276G〉T位点基因表型为GGGG型者发生冠心病的危险性显著高于TTTT型者（OR=4．77，P〈0．01）。结论在老年非糖尿病者中，脂联素基因SNPs＋45T〉G基因表型为GG型者和SNPs＋276G〉T基因表型为GG或GT型者可能是冠心病的易感人群。

石杉碱甲对D-半乳糖诱导老年性聋神经纤维的保护作用

目的研究石杉碱甲（HupA）对D-半乳糖（D—gal）诱导的老年性聋大鼠耳蜗神经纤维的保护作用。方法3—4周Sprague—Dawley雄性大鼠30只，随机平均分为3组，模型组用5％D—gal（200mg／kg）行颈背部皮下注射制备老年性聋模型，D—gal＋HupA组为大鼠颈背部皮下注射同体积5％D—gal（200mg／kg）和HupA（0．1mg／kg），对照组予同体积生理盐水作颈背部皮下注射，均连续注射8周。β-半乳糖苷酶染色耳蜗衰老细胞；同时用免疫组织化学方法检测各组用药后神经纤维数目的变化。结果模型组耳蜗衰老细胞密度最高，D-gal＋HupA组和对照组却差别不大。免疫组织化学检测结果分析，D-gal＋HupA组神经纤维的数目和对照组无明显差异，而模型组神经纤维数目明显少于D—gal＋HupA组（P〈0．05）。结论HupA对D—gal诱导的老年性聋的神经纤维具有保护作用。

中老年认知障碍的早期干预

认知功能状况可分为认知功能正常、增龄相关记忆障碍（age-associated memory impairment,AAMI）、轻度认知障碍（mild cognitive Impairment,MCI）及痴呆4个阶段。有研究报道,当出现AAMI时,与学习能力密切相关的细长型树突大量丢失,但不出现神经细胞的死亡[1-2]。

肌肉衰减症、衰老和老年病

骨骼肌作为最大的内分泌器官，通过营养和应激感受和肌源性细胞因子调节机体衰老进程和其他器官的功能。骨骼肌释放肌源性细胞因子和代谢产物，不但调节其他器官，如骨、脂肪组织、胰岛、肝及肌肉本身，导致许多老年病的发生；同时调节机体的代谢平衡和机体衰老及寿限。

石杉碱甲对D-半乳糖诱导的老年性聋大鼠听觉中枢Kir4.1表达的影响

目的研究石杉碱甲(HupA)对D-半乳糖(D-gal)诱导的老年性聋大鼠听皮质和下丘内Kir4.1表达的影响。方法出生后3～4周Sprague-Dawley雄性大鼠45只,随机平均分为3组。D-gal组用5%D-gal(200mg/kg)对大鼠行颈背部皮下连续注射,共8周;D-gal+HupA组大鼠颈背部皮下注射同体积5%D-gal(200mg/kg)和HupA(0.1mg/kg),共8周;对照组予同体积生理盐水颈背部皮下注射,共8周。用药前、后分别检测大鼠听性脑干反应(ABR)以评价其听觉敏感度和听觉传入通路中的传导功能;利用Western印迹和免疫组织化学方法检测Kir4.1在大鼠听皮质和下丘中的表达。结果与对照组相比,D-gal组和D-gal+HupA组大鼠用药前后ABR阈值无明显改变,但两组动物ABR各频率Ⅲ、Ⅴ波潜伏期,Ⅰ-Ⅴ波间期较对照组延长(P<0.01;P<0.05),其中D-gal组ABR各频率Ⅲ、Ⅴ波潜伏期,Ⅰ-Ⅴ波间期长于D-gal+HupA组,差异有统计学意义(P均<0.05)。Western印迹结果显示:与对照组相比,D-gal组听皮质、下丘内Kir4.1蛋白表达水平明显降低(P<0.01),D-gal+HupA组Kir4.1蛋白表达与对照组无明显差异,D-gal组和D-gal+HupA组比较,Kir4.1蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。下丘组织免疫荧光支持Westernblot结果。结论 HupA可以提高D-gal致老年性聋大鼠听觉中枢内Kir4.1蛋白表达,对预防和治疗老年性聋引起的听觉中枢Kir4.1减少有重要作用。

石杉碱甲对D-半乳糖致衰老大鼠海马及下丘Lamin A／C、prelamin A及FACE1表达的影响

目的研究D-半乳糖致衰老大鼠海马及下丘laminA／C、prelaminA、FACEl的水平变化，并进-步明确石杉碱甲对D-半乳糖诱导的这些蛋白变化的影响及其意义。方法36只健康雄性SD大鼠随机分成对照组、D-半乳糖治疗组和D-半乳糖联合石杉碱甲组。D-半乳糖组每天皮下注射D-半乳糖300mg／Kg，共8W；D-半乳糖联合石杉碱甲组每天D-半乳糖300mg／Kg联合石杉碱甲0．1mg／Kg共同皮下注射，共8W。对照组皮下注射等量生理盐水。应用蛋白免疫印迹杂交（Western blotting）方法检测3组大鼠海马、下丘laminA／C、prelaminA和FACEl的表达。结果海马中，laminA在对照组、D半乳糖＋石杉碱甲组、D-半乳糖组中逐渐降低，laminC水平逐渐升高，prelaminA在对照组中最高，D-半乳糖组与D-半乳糖＋石杉碱甲组无明显差异；FACEl在D-半乳糖＋石杉碱甲组水平最高，对照组中水平最低。下丘中，laminA水平在D-半乳糖＋石杉碱甲组最高，D-半乳糖组中最低；D-半乳糖组和D-半乳糖＋石杉碱甲组laminC水平较对照组升高，D-半乳糖组与D-半乳糖＋石杉碱甲组之间的差异无统计学意义；prelaminA水平在对照组中最低，D-半乳糖＋石杉碱甲组中最高；FACE1水平在对照组、D-半乳糖＋石杉碱甲组、D-半乳糖组中逐渐升高。结论LaminA降低、laminC及FACE1升高预示着D-半乳糖诱导的海马及下丘衰老。石杉碱甲可以在-定程度上改善部分指标的变化，说明它有-定的延缓海马及下丘衰老的作用。

生物样本库质量控制体系在冠心病中的初步应用

目的探讨老年病生物样本库建立质量控制体系在老年冠心病中的应用研究。方法制定老年病样本库操作流程及质量控制体系,规范化收集、处理及保存诊断为老年冠心病的血液标本380例,进行生化指标测定、血浆及全血基因组DNA提取,并检测DNA的浓度和纯度,同时建立一套信息管理系统用于老年冠心病生物样本库的管理。结果 380例有完整临床资料的老年冠心病患者的全血标本、血浆及DNA的提取成功率均为100%,并随机抽取20份DNA进行质量检测,结果表明所收集标本质量较好。初步建立了规范化的样本信息资料软件管理系统。结论该研究有效的在老年冠心病中建立了标准化的质量控制系统并加以应用研究,为冠心病研究提供规范化的临床样本资源平台。

老年病样本库规范化建设

目的探讨规范化建立老年病样本库、老年病生物样本库建立质量控制体系和样本信息化管理。方法制定老年病样本库标本库操作流程(SOP)及质量控制体系,规范化收集、处理及保存老年病患者的血清、血浆、核酸和组织等样本,应用信息管理软件进行样本信息录入。样本全程质控并随机抽样进行质量评估。结果自2013年建库以来,入库病种主要为少肌症、老年冠心病、老年糖尿病、肝癌、结肠癌、白塞氏病、帕金森病、阿尔茨海默病、脂肪肝等共16个病种。入库病例共2 110例,>60岁的体检人群约500例。入库样本共20 171份,并随机抽取30份DNA进行质量检测,结果表明所收集标本质量较好。建立了规范化的标本信息管理系统。结论通过老年病样本库规范化建立,能够建立有效的标准化的质量控制系统并规范化、有效地收集、保存和利用样本,为老年病研究提供宝贵资源和临床研究平台。

共享生物样本库在衰老研究中的建立和意义

目的探讨规范化建立衰老研究的共享样本库,标准化样本信息管理。方法制定样本库标准操作流程(SOP),收集、处理及保存患者的组织、血浆、核酸等样本,全程质量控制。应用信息管理软件进行样本和患者临床信息录入。开放数据库,申请通过审核后可共享样本资源。结果自2013年建库以来,入库病种主要为帕金森病、阿尔茨海默病、脂肪肝等共16个病种。大于60岁的体检人群约3 000例。入库样本共32 000份,样本库样本使用率在23%左右。样本质量检测结果表明所收集标本质量较好。建立了规范化的样本信息共享管理系统。结论高质量共享样本库的建立和应用,是衰老发病机制研究的基石,是生物样本库可持续发展的保证。

老年病样本库生物安全管理

目的探讨老年病样本库的生物安全管理。方法对样本库进行生物风险评估,建立和优化老年病样本库的生物安全管理体系生物安全防护措施,规范化收集、处理及存储老年病样本7609例,同时信息管理系统中填写SPREC,跟踪样本信息。结果自2013年建库,入库7609例有完整临床资料的老年病患者样本,随机抽取76份DNA进行质量检测,结果表明所收集标本质量较好。建立了规范化的生物安全管理体系。结论有效地在老年病样本库中建立和优化了生物安全管理体系及生物安全防护措施,在保障样本库生物安全的同时确保为老年病研究提供高质量样本。

应用顺铂建立C57小鼠感音神经性聋模型的实验研究

目的探讨顺铂诱发C57小鼠感音神经性聋模型的制备方法。方法将C57BL/6J小鼠随机分成4组,A组:耳蜗圆窗龛生理盐水给药5μL;B组:耳蜗圆窗龛顺铂给药5μL(1 mg/mL);C组:经鼓膜中耳腔顺铂给药10μL/d×5 d(1 mg/mL);D组:腹腔注射顺铂6 mg/(kg·d)×5 d。用全频程脑干听觉诱发电位(ABR)检测4个组动物的听觉反应阈为指标,以动物各频率听觉反应阈上升≥10 dB定为听力减退,并通过异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鬼笔环肽染色观察用药后毛细胞的形态学变化。结果 A、C、D组ABR反应阈用药前后无明显变化(P>0.05);B组小鼠顺铂用药后48 h全频程ABR反应阈均升高(P<0.05),且毛细胞出现损伤、脱落,其损伤从顶回到底回有逐渐加重的趋势,外毛细胞较内毛细胞损伤严重。结论圆窗龛给药途径是建立顺铂诱发C57小鼠耳聋模型的有效途径。