羟基法舒地尔对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠氧化应激的影响

目的:探究羟基法舒地尔(HF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠氧化应激的影响及可能机制。方法:将BV2细胞随机分为正常对照组、LPS组和LPS+HF组。HF预处理2 h后给予LPS刺激24 h,收取细胞上清液。将16只C57BL/6小鼠随机平均分为EAE组和HF组。HF组小鼠于免疫后第3天起以HF腹腔注射干预,剂量40 mg/(kg·d)。EAE组小鼠注射等量生理盐水。从免疫当天开始,每隔1 d记录小鼠的临床评分。DPPH法和ABTS法检测不同浓度HF对自由基的清除作用。MTT法检测BV2细胞在不同浓度HF的干预下细胞活力的改变。HE和LFB染色检测脊髓炎症和髓鞘脱失。ELISA检测细胞上清液和小鼠脊髓中RNS、ROS、MDA、SOD、CAT和GSH-Px含量。免疫荧光染色和Western blot检测小鼠脊髓中Nrf2、HO-1表达。结果:HF在3.75~60μg/ml浓度范围内对DPPH和ABTS自由基几乎没有清除作用,在0~15μg/ml浓度范围内对BV2细胞活力没有影响,HF可抑制EAE小鼠的临床症状,改善脊髓炎症和髓鞘脱失,减少氧化产物ROS、RNS和MDA产生,增加抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px表达,同时促进小鼠脊髓Nrf2和HO-1表达。结论:HF抑制EAE小鼠的临床症状,减少中枢神经系统内炎症浸润和髓鞘脱失,其机制可能与HF激活Nrf2/HO-1信号通路,抑制EAE小鼠的氧化应激有关。

白果内酯促进巨噬细胞神经保护的机制研究

探讨白果内酯(BB)通过抑制巨噬细胞/小胶质细胞炎症反应、促进神经营养因子分泌、干预外周免疫中CD4^(+)T细胞活化分化,从而发挥神经保护作用及其机制。以质量浓度梯度为12.5、25、50、100μg·mL-1的BB干预RAW264.7与BV2细胞,采用MTT、CCK-8法检测BB的细胞毒性并选取合适的药物浓度进行后续实验。分别以脂多糖(LPS)诱导RAW264.7、BV2细胞、小鼠骨髓巨噬细胞、原代小胶质细胞建立炎性模型,并使用ELISA法检测BB对细胞增殖、炎性因子和神经营养因子分泌的影响。选取7~8周龄C57BL/6雌性小鼠分离脾脏单核细胞,无菌条件下磁珠分选CD4^(+)T细胞,用骨髓巨噬细胞模型中的条件培养基与CD3/CD28诱导分化Th17细胞,ELISA法检测上清中IL-17细胞因子含量,以测定对CD4^(+)T细胞活化分化程度的影响。另将骨髓巨噬细胞与原代小胶质细胞模型中的条件培养基,孵育PC12细胞,观察细胞数量和形态,并用LDH法测定细胞毒性,结果显示BB在12.5~100μg·mL-1对RAW264.7与BV2细胞无细胞毒性,对低炎症模型细胞的活性亦无明显影响。选取BB 50μg·mL-1进行实验,结果显示BB可抑制LPS诱导的炎症细胞模型中炎性因子的分泌。使用条件培养基进行干预的CD4^(+)T细胞模型实验,结果显示LPS诱导的骨髓巨噬细胞炎症模型条件培养基能够促进CD4^(+)T细胞的活化分化,而进行BB药物干预的实验组条件培养基降低了CD4^(+)T细胞的活化分化程度。另外,BB也可以促进骨髓巨噬细胞与原代小胶质细胞神经营养因子的释放,且BB干预后的条件培养基可显著减少PC12神经元的死亡,抑制神经元损伤,保护神经元。综上表明,BB通过抑制骨髓巨噬细胞与小胶质细胞介导的炎症反应,促进神经营养因子分泌,发挥神经保护作用。