宫颈癌细胞通过分泌TSLP促进自身细胞活力

目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用。方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和CasKi,分别收集培养24、48和72小时的培养上清,ELISA法检测培养上清中TSLP的分泌水平;流式细胞术分析HeLa和CasKi细胞表面TSLP受体(TSLPR)的表达水平;再用MTT法分别检测HeLa和CasKi细胞经人重组细胞因子TSLP(1、10和100 ng/ml)处理24、48和72小时后细胞活力的水平变化。结果:HeLa和CasKi细胞均呈时间依赖性分泌TSLP(P<0.01),且HeLa细胞在24和48小时分泌TSLP的水平高于CasKi细胞(P<0.01或P<0.05);HeLa和CasKi细胞TSLPR阳性表达率分别为23.61±1.30和27.07±2.13,前者低于后者(P<0.05);此外,10或100 ng/ml TSLP作用HeLa和CasKi细胞48小时或72小时均能上调其细胞活力(P<0.05)。结论:宫颈癌细胞可能通过TSLP自分泌作用促进自身的活力,进而利于宫颈癌细胞的生长,因而参与宫颈癌的发病和进展。

人早孕期蜕膜基质细胞下调蜕膜NK细胞杀伤活性

通过分析人早孕期蜕膜基质细胞(decidual stromal cell,DSC)对蜕膜NK细胞(dNK)表面趋化因子受体CXCR4与细胞内颗粒酶B表达水平的影响,研究早孕蜕膜基质细胞对局部NK细胞的训导作用。收集早孕蜕膜组织,分离DSC及蜕膜免疫活性细胞,进一步通过磁珠分选蜕膜CD3-CD56bright NK细胞,将分离的蜕膜NK细胞与DSC按1∶1比例共培养24h,收集蜕膜NK细胞,流式细胞仪检测其表面趋化因子受体CXCR4和细胞内颗粒酶B(granzyme B)的表达水平。结果显示,与对照组相比,在与DSC细胞共培养之后,趋化因子受体CXCR4+NK细胞的百分率明显上升,而蜕膜NK细胞内颗粒酶B阳性率显著下降(P<0.05)。结果表明,人早孕母-胎界面DSC细胞上调蜕膜NK细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达,下调NK细胞内颗粒酶B的表达水平,可能抑制其杀伤活性。

人早孕滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养对外周NK细胞的影响

为了分析人早孕母-胎界面功能细胞对外周NK细胞表型及功能的调节作用,我们模拟母-胎界面微环境,建立滋养细胞和蜕膜基质细胞共培养系统,并将此共培养体系与外周NK细胞共培养,采用流式细胞术分析NK细胞的表型和细胞因子的表达,用细胞毒检测试剂盒检测NK细胞的细胞毒活性。研究发现,母-胎界面滋养细胞与蜕膜基质细胞共培养体系能够显著上调外周NK细胞抑制型受体KIR2DL1的表达,下调外周NK细胞杀伤性受体NKp44的表达;显著上调Th2型细胞因子IL-10的表达水平,下调外周NK细胞穿孔素perforin表达及其细胞毒活性。结果表明,母-胎界面功能细胞能够诱导外周NK细胞的耐受表型及Th2型优势,下调外周及蜕膜NK细胞的细胞毒活性,从而有利于形成母-胎界面免疫耐受微环境。

环孢素A对人母-胎界面IL-10和IFN-γ细胞因子格局的调节作用

本研究目的为了探讨环孢霉素A（CsA）对人早孕期母-胎界面主要组成细胞产生的IL-10与IFN-γ比率的调节作用,为治疗复发性自然流产等妊娠相关性疾病提供新线索。收集6~10周行人工流产术的正常妊娠妇女的绒毛和蜕膜组织;体外分离、培养获得蜕膜免疫细胞、蜕膜基质细胞与滋养细胞,建立三种细胞之间的两两共培养和三者共培养模型;ELISA法检测经环孢素A（0μmol/L、1μmol/L）处理48 h的共培养体系培养上清中IL-10与IFN-γ分泌水平。结果显示,（1）1μmol/L CsA可以明显促进两两共培养（P〈0.05）,尤其三种细胞共培养体系IL-10的分泌（P〈0.01）;相反,抑制蜕膜免疫细胞与滋养细胞或蜕膜基质细胞两两共培养（P〈0.05）,及三者共培养体系中IFN-γ的产生（P〈0.05）;（2）低剂量CsA升调两两共培养和三者共培养体系中IL-10与IFN-γ比率（P〈0.01）。结果表明,CsA通过促进母-胎界面IL-10/IFN-γ的比率,从而有利于母-胎界面Th2型免疫优势的维持。

IDO通过整合素αvβ3调控子宫内膜间质细胞黏附能力

探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)通过细胞外黏附分子整合素对子宫内膜间质细胞(ESC)与细胞外基质黏附能力的调控。收集非内异症患者健康内膜、内异症患者在位内膜及异位内膜样组织,体外分离、培养获得子宫内膜间质细胞,并鉴定细胞纯度;In-cell Western比较分析健康、在位和异位ESC中IDO的表达水平,以及脂多糖(LPS)和1-甲基色氨酸(1-MT)单独或联合作用对IDO表达的影响;黏附试验分析LPS和(或)1-MT对ESC与细胞外基质laminin、collagen、fibrino-gen、fibronectin等黏附能力的影响;进一步应用流式细胞术分析LPS或/和1-MT对相应细胞外基质配体-整合素表达的调节。结果显示,IDO在子宫内膜异位症患者来源在位及异位ESC中高表达。炎症因子LPS可以促进ESC中IDO的表达,并通过上调整合素αvβ3增强ESC对细胞外基质collagen I、collagen IV、fibrinogen、fibronectin的黏附。IDO特异性抑制剂1-MT可以抑制ESC表达IDO,并且可以逆转LPS诱导的整合素αvβ3表达及ESC黏附能力。