积雪草酸对原代大鼠视网膜神经节细胞低氧损伤的保护作用研究

目的研究积雪草酸(AA)在体外大鼠视网膜神经节细胞(RGC)低氧损伤中的保护作用,并探讨其作用机制。方法选取出生1~3 d的新生SD大鼠,解剖游离出视网膜,利用Thy1.1抗体包被法纯化获取RGC,定量聚合酶链反应(q PCR)鉴定RGC的纯度。体外给予原代RGC不同时长(0、12、24、48 h)的低氧(1%O2)损伤刺激,TUNEL检测RGC的凋亡情况。预先给予原代RGC不同浓度(0、5、10、20、50μmol/L)的AA干预后,再以1%O_2培养48 h,通过TUNEL凋亡检测、CCK-8细胞增殖检测研究AA在RGC凋亡中的作用。利用Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统对凋亡相关蛋白c-Abl进行检测。结果低氧条件下(1%O2),RGC的TUNEL凋亡阳性细胞数随着低氧刺激时间的递增呈梯度增加。低氧环境下(1%O2),给予不同浓度的AA干预,TUNEL结果显示10μmol/L和20μmol/L AA处理后,RGC凋亡细胞数显著减少(P值均<0.01)。同时CCK-8结果显示10μmol/L和20μmol/L AA干预后,RGC的增殖活力明显升高(分别为P<0.05,P<0.01)。Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统结果表明,AA在原代RGC低氧损伤中可以明显抑制c-Abl的磷酸化水平。结论体外低氧刺激时,AA可以减少RGC的凋亡,对原代RGC的低氧损伤有一定的保护作用,其作用机制与抑制c-Abl的磷酸化激活相关。

LASIK术后行白内障超声乳化摘除联合多焦点散光矫正型人工晶状体植入术一例

该文报道一例激光原位角膜磨镶(laser-assisted in situ keratectomy,LASIK)术后行白内障超声乳化摘除联合多焦点散光矫正型人工晶状体植入术的病例。该患者为42岁女性患者,20年前外院行双眼LASIK手术,现因右眼视物模糊1年就诊。术前IOLMaster检查患者右眼眼轴长度29.66 mm,前房深度3.18 mm,晶状体厚度4.75 mm,白到白距离11.6 mm,前表面及全角膜散光分别为1.01 D@67°及0.91 D@56°。Pentacam角膜地形图15°范围模拟角膜屈光力得到的角膜散光为1.2 D@58.1°,为规则领结型。患者眼底检查未见明显异常,因其脱镜意愿强烈,植入双焦点散光矫正型IOL(德国Zeiss公司AT LISA toric 909M)。根据Barrett True-K Toric公式测量的后表面散光计算结果进行手术规划,选择+17 D球镜1.5 D柱镜Zeiss 909M IOL,植入轴位55°。术后1个月患者裸眼远视力0.8,35 cm裸眼近视力1.0,最佳矫正远视力-0.25 DS/-0.5 DC×120°至1.0,患者满意。提示经过详细的术前评估及规划,并与患者充分沟通,多焦点散光矫正型人工晶状体可以在部分适合的LASIK术后患者中取得良好效果。

人脐带间充质干细胞对光诱导视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的体外观察脐带间充质干细胞(UCMSCs)对光诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤是否具有保护作用。方法培养扩增人UCMSCs,对UCMSCs的免疫表型进行流式检测鉴定。原代分离培养人眼RPE细胞,制备蓝光损伤的RPE细胞模型。利用Transwell小室建立光损伤RPE细胞与UCMSCs的非接触共培养体系。RPE细胞分为正常对照组、模型对照组和UCMSCs共培养组。正常对照组不予处理,模型对照组采用蓝光照射诱导RPE细胞损伤,UCMSCs共培养组为光损伤RPE细胞+UCMSCs共培养。光损伤RPE细胞与UCMSCs共培养后24 h和48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组RPE细胞增生活力;共培养48 h,收集各组细胞培养上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法定量检测色素上皮衍生因子(PEDF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)质量浓度,并进行RPE细胞吞噬感光细胞外节段膜盘(POS)试验。结果UCMSCs形态呈梭形,细胞表面抗原CD29、CD44、CD90和CD105呈阳性表达,同时细胞表面抗原CD34和CD45呈阴性表达。RPE细胞呈多边形,阳性表达特异性标志物RPE65蛋白。各组共培养后不同时间点RPE细胞增生能力(A值)总体比较,差异均有统计学意义(F组别=132.388,P=0.000;F时间=231.440,P=0.000),其中培养后24 h、48 h,模型对照组和UCMSCs共培养组的细胞A值均较正常对照组明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.01);UCMSCs共培养组细胞在相应时间点的细胞A值显著高于模型对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。RPE细胞POS吞噬试验的量化计算结果显示,3个组RPE细胞平均吞噬POS颗粒数总体比较,差异有统计学意义(F=28.087,P=0.000),其中模型对照组RPE细胞平均吞噬POS颗粒数较正常对照组明显减少,UCMSCs共培养组RPE细胞平均吞噬POS颗粒数较模型对照组明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ELISA法检测结果显示,正常对照组、模型对照组和UCMSCs共培养组RPE细胞上清液中PEDF质量浓度分别为(18.8±1.9)、(10.0±1.7)和(20.2±6.0)ng/ml,bFGF质量浓度分别为(25.2±1.5)、(26.3±3.6)和(61.9±14.3)pg/ml,总体比较差异均有统计学意义(F=8.654,P=0.008;F=23.698,P=0.000)。模型对照组PEDF质量浓度较正常对照组明显下降,UCMSCs共培养组PEDF质量浓度较模型对照组明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.01);UCMSCs共培养组bFGF质量浓度较正常对照组和模型对照组均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论与UCMSCs非接触共培养可以改善光损伤RPE细胞的增生能力和吞噬功能,促进RPE细胞分泌PEDF。UCMSCs可能通过旁分泌的方式分泌bFGF,减轻RPE细胞的光损伤。

人Müller细胞来源的外泌体对脂多糖刺激视网膜色素上皮细胞产生炎症因子的影响

目的研究人原代Müller细胞来源的外泌体(EXO)对脂多糖(LPS)刺激人视网膜色素上皮(RPE)细胞产生炎症因子的影响。方法原代纯化培养人Müller和RPE细胞,通过免疫荧光鉴定RPE细胞,用试剂盒提取得到Müller细胞来源的EXO并通过透射电镜观察和Western印迹法进行鉴定。在无EXO培养基培养人RPE细胞后,分别采用100 ng/mL LPS刺激,不加或加入EXO(50μg/mL),以不含EXO和LPS培养细胞为对照组,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定和实时反转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究RPE细胞产生炎症因子的变化。结果人Müller细胞来源的提取物经透射电镜观察为圆形或半圆形囊泡,直径为30~100 nm,表达EXO特有标志物CD63和Flotillin-1。LPS组上清液中白介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度分别为(333.89±41.51)、(404.67±13.88)、(1 557.11±317.08)、(466.78±39.34)μg/mL,EXO+LPS组分别为(214.11±18.14)、(318.12±34.73)、(1 170.37±244.15)、(319.73±41.39)μg/mL,2组比较差异有统计学意义(IL-1β:P<0.01;IL-6、IL-8:P<0.05;TNF-α:P<0.001)。与LPS组相比,EXO+LPS组的相关基因表达受到抑制,其中IL-1β基因表达差异有统计学意义(P<0.05),IL-8、CCL20和TNF-α差异有统计学意义(P<0.001),CCL2与IL-6则组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功获得Müller来源的EXO,其对LPS刺激RPE细胞产生炎症因子具有一定的调节作用。

特异沉默周细胞的circ_0001186表达抑制糖尿病性视网膜血管病变的发生

周细胞是调控视网膜血管成熟和稳定的关键细胞,其病变是引起糖尿病视网膜病变的关键病因。环状RNA作为重要的RNA调控分子,在多种生理和病理进程中发挥作用。本研究发现,糖尿病相关的病理刺激可以特异地上调周细胞中的circ_0001186表达水平,而对血管内皮细胞中的circ_0001186表达水平无显著影响;细胞实验发现,circ_0001186表达沉默可以抑制高糖引起的周细胞损伤,促进周细胞的增殖和内皮细胞对周细胞的募集;动物实验发现,在糖尿病小鼠视网膜中,特异性沉默周细胞中的circ_0001186表达可以减少高糖引起的周细胞丢失,减轻视网膜血管的渗漏和炎症反应。circ_0001186表达沉默可以激活PDGF-PI3K-Akt信号通路进而保护周细胞的功能。本研究发现了视网膜血管病变的调控新机制,靶向抑制周细胞内的circ_0001186表达有望为治疗该疾病提供新思路。

Schlemm管内皮细胞和小梁细胞老化诱发房水动力学异常与青光眼关系的研究进展

青光眼是仅次于白内障的全球第二大致盲性眼病,细胞老化是导致青光眼眼压升高的最直接危险因素.眼压的形成与房水循环密切相关.房水外流通道细胞主要包括小梁网细胞和Schlemm管内皮细胞,其对维持正常眼压起关键作用.细胞老化可诱发房水动力学异常,从而引起眼压升高.其中小梁网细胞老化可能导致细胞固有僵硬度增大,自噬功能障碍,microRNA表达异常,线粒体功能障碍等,造成细胞功能障碍.Schlemm管内皮细胞老化则降低细胞的通透性,影响机械传感性,干扰内皮型一氧化氮合酶的信号传导通路,导致房水外流阻力增大,从而引起眼压升高.本文将针对小梁网细胞和Schlemm管内皮细胞老化引起的房水动力学异常与青光眼关系的研究进展进行综述,以期为临床研究提供参考.

视网膜色素变性的致病基因研究进展

视网膜色素变性（RP）是一组视网膜光感受器异常导致的遗传性致盲眼底疾病。RP在遗传和临床表型上具有高度异质性，可分为单纯型RP和综合征型RP。主要遗传方式为常染色体显性、常染色隐性及伴x连锁遗传。随着基因测序技术的普及和临床应用，越来越多的致病基因被发现，这些基因主要在光感受器细胞及视网膜色素上皮细胞表达。深入正确认识RP致病基因，不仅为RP诊断和遗传咨询提供理论基础，还可为RP基因治疗提供指导。

Stargardt病1型的治疗研究现状与进展

Stargardt病(STGD)是最常见的遗传性黄斑营养不良,多在儿童期或青少年期发病,几乎所有患者都会出现不可逆的视力下降。其中以1型STGD(STGD1)最为常见,是由于Abca4基因突变引起的常染色体隐性遗传疾病。近年来,针对STGD1的治疗研究取得了令人鼓舞的进展,其中C20氘化维生素A(ALK-001)、芬维A胺(fenretinide)和ICR-14967(A1120)等视觉周期调节药物、StarGen基因补充疗法以及人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞移植展现了光明的应用前景。相信随着各项研究的深入和临床试验的成功开展,STGD1的各种治疗手段在临床的应用指日可待,未来将有望挽救广大患者的视力。

可替换式角膜刮片刀在感染性角膜炎患者中的应用

目的自行设计一款可替换式角膜刮片刀,探讨其在感染性角膜炎患者中对提高角膜检菌阳性检出率和患者治愈率的影响。方法采用便利抽样法,选取2020年6月至2021年10月在复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科行感染性角膜炎治疗的100例患者作为研究对象。选择2020年6月至2021年1月的50例患者作为对照组,2021年2—10月的50例患者为试验组;对照组使用传统角膜刮片刀进行角膜刮片操作,试验组使用可替换式角膜刮片刀进行角膜刮片操作。比较2组检菌阳性检出率、截至资料搜集日患者的治愈率、患者舒适状况、护士操作难易度评分。结果试验组的检菌阳性检出和截至资料搜集日治愈的患者分别为28例占56%和30例占60%,对照组分别为16例占32%、18例占36%,2组比较差异有统计学意义(χ^(2)=-2.47、-2.20,均P<0.05)。试验组患者Kolcaba舒适度量表得分为(83.92±6.40)分,对照组患者为(54.04±10.69)分,2组比较差异有统计学意义(t=17.14,P<0.01)。试验组护士操作难易度得分为(1.46±0.54)分,对照组为(3.24±0.72)分,2组比较差异有统计学意义(t=-13.50,P<0.01)。结论使用可替换式角膜刮片刀不仅能提高患者检菌阳性检出率,改善患者治疗效果,提升患者舒适度和满意度,更能提升护士工作效率,减少护士的操作风险,从而提高护士真正的职业价值。

从“看得见”到“看得清”——为先天性晶状体疾病患儿开创新“视”界

人们常用“清澈明亮”“纯净透明”来形容孩子的眼睛。然而,有一些孩子却没那么幸运,生来没有透亮双眸,更难拥有正常视力,他们是患有先天性晶状体疾病的孩子。若得不到及时治疗,严重者可能造成终身失明。复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科卢奕教授团队深耕先天性晶状体疾病领域多年,攻克重重难关,让大量原本只能去盲童学校学习的孩子有了正常上学的机会。在2017年上海市科学技术奖榜单上,卢奕教授领衔的“先天性晶状体疾病的微创治疗”项目荣获科技进步奖二等奖。

话说那些“命中注定”的眼病

眼睛是心灵的窗户,可以带我们感知各种美好的事物。而其一旦生病,我们的世界将失去色彩,心灵更将陷入黑暗中的恐惧和孤独之中。所以,我们每个人都希望拥有明亮的双眸。然而,有些人天生视力差,甚至很早就失明;更可十白的是这些疾病还可以遗传给下一代。为什么命运偏偏蒙上了你的双眼,这些“命中注定”的眼病能治疗吗?