CYP17基因多态性与大同地区早期复发性自然流产关系研究

目的探讨CYP17基因多态性与大同地区早期复发性自然流产的关系。方法采用PCR-RFLP分别检测山西大同地区的不明原因早期复发性自然流产(58例)和健康妊娠妇女(73例)的CYP17基因多态性,分析探讨两者的关系。结果早期复发性自然流产组和对照组之间CYP17 3种基因型分布具有统计学意义(χ2=7.817,P=0.020)。A2/A2、A1/A2发生早期复发性自然流产的危险度分别提高了3.181倍和3.123倍。结论 CYP17等位基因突变可增加发生早期复发性自然流产的危险性,可能是早期复发性自然流产的遗传易感因素之一。

Tim-3/Gal-9信号通路参与妊娠的研究进展

成功的妊娠依赖于母体对胎儿的免疫耐受。近年来研究证实：Tim-3/Gal-9信号通路通过抑制Th1细胞的活性、Th17细胞的分化和功能以及促进Th2细胞的功能,调节T细胞亚群平衡和诱导外周免疫耐受。Tim-3/Gal-9信号通路在母胎界面和妊娠中的功能已经在人和动物模型中有较多报道。本文将从Tim-3/Gal-9信号通路调节T细胞平衡这一生物学功能着手,阐明其在母胎免疫耐受的诱导和维持，

不明原因复发性流产小鼠模型CD4^+CD25^+ Treg的比例及Foxp3表达的变化

目的分析比较小鼠正常妊娠模型和流产模型中CD4+CD25+调节性T细胞CD4+CD25+Treg的比例、Foxp3蛋白表达水平及胎盘吸收率,探讨CD4+CD25+Treg与不明原因复发性流产的关系。方法以雌性CBA/J×雄性Balb/c为对照组,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为流产组,各10对,于妊娠第14天采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析CD4+CD25+Treg在CD4+细胞中所占比例,Western blot检测并比较2组CD4+T细胞中Foxp3的表达,并观察2组小鼠的胎盘吸收情况。结果流产组CD4+CD25+Treg所占比例为(10.1±0.59)%低于对照组(15.5±0.78)%(P<0.05)。流产组胚胎吸收率为(25.6±3.5)%,明显高于对照组(2.4±1.6)%(P<0.01)。流产组Foxp3谱带密度相对值为0.30±0.018,低于正常组的0.68±0.025(P<0.05)。结论小鼠的自然流产模型建立成功,流产组孕鼠CD4+CD25+Treg的比例和Foxp3蛋白表达水平明显低于正常妊娠组,提示流产组高流产率可能与CD4+CD25+Treg数量和Foxp3的表达减少有关,CD4+CD25+Treg细胞的数量减少和功能缺陷可能是不明原因复发性流产的发生机制之一。

复发性流产患者妊娠早期滋养细胞中E-cadherin的表达及其与HPV感染的相关性

目的:研究E-钙粘素(E-cadherin)在复发性流产患者妊娠早期滋养层细胞中的表达,探讨复发性流产与HPV感染的相关性。方法:采用免疫组织化学与PCR法分别对34例复发性流产患者(实验组)与41例正常早孕女性(对照组)妊娠早期滋养层细胞中E-cadherin的表达水平与HPV-DNA进行检测。结果:实验组滋养细胞中E-cadherin的表达明显低于对照组(P<0.001),HPV感染率则高于正常早孕组(P=0.039);HPV感染阳性的标本中,实验组E-cadherin的表达水平要低于正常早孕组,其差异有显著性(P=0.015)。结论:妊娠早期滋养层细胞E-cadherin的异常表达可能与复发性流产的发生有关,而人乳头瘤病毒(HPV)可能参与这一过程。

Th17和Treg细胞及其比例在先兆流产中的变化及意义

目的检测外周血Th17细胞和调节性T细胞(Treg细胞)在先兆流产发病机制中的作用。方法入组健康早孕妇女24例和先兆流产孕妇37例,采用三色荧光流式细胞分析技术检测2组孕妇外周血中Th17细胞和Treg细胞占CD4+T细胞的比例,使用SPSS16.0分析相关数据。结果先兆流产孕妇与健康早孕妇女既往均无自然流产史,外周血中,先兆流产孕妇Th17细胞占CD4+T细胞的比例显著高于健康早孕妇女(P<0.05),而Treg细胞占CD4+T细胞的比例显著低于健康早孕妇女(P<0.05),且Th17/Treg细胞比例在先兆流产孕妇中明显升高(P<0.05)。结论外周血Th17和Treg细胞水平异常及两者比例失衡可能参与先兆流产的发生。

5-氮-2'-脱氧胞苷诱导的调节性T细胞转输对自然流产孕鼠妊娠结局的影响

目的:研究过继转输5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5Aza D)诱导的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(inducible regulatory T cells,i Tregs)对自然流产孕鼠妊娠预后的影响。方法:以60例雌性CBA/J×雄性DBA/2J小鼠自然流产模型为研究对象,随机选取20例孕鼠经免疫磁珠分选脾脏CD4+T细胞,应用5Aza D对CD4+CD25-T细胞进行体外处理得到i Tregs,通过流式细胞术检测表观修饰前后Tregs细胞中Foxp3的表达。分别向妊娠第1天和第4天的流产孕鼠体内输注i Tregs作为治疗组,于妊娠14天比较各组孕鼠的胚胎吸收率。结果:经5Aza D修饰后,i Tregs占CD4+T细胞的比例为(41.50±8.03)%。治疗组中妊娠第1天和第4天过继转输i Tregs孕鼠的胎盘吸收率分别为10.47%和21.69%(P<0.05)。结论:对CD4+CD25-T细胞的表观修饰可能解决自然调节性T细胞来源不足的问题,在妊娠早期转输5Aza D诱导的i Treg细胞更有利于维持正常妊娠。

复发性自然流产患者血清RLX-2,TIMP-1,TIMP-2的表达及其临床诊断价值

目的检测复发性自然流产(RSA)患者血清RLX-2,TIMP1,TIMP2的表达水平,探讨RLX-2,TIMPs在RSA发生过程中的作用机制,及其对RSA的临床诊断价值。方法采用ELISA法对18例RSA患者与18例正常妊娠者不同妊娠期血清RLX-2,TIMP1,TIMP2的表达水平进行检测,采用受试者工作特性曲线对血清RLX-2,TIMP2及RLX-2/TIMP-2比值在RSA临床诊断的价值进行评价。结果血清RLX-2的水平在妊娠呈上升趋势,10～12周达到高峰;实验组血清TIMP-2水平在各妊娠期均高于正常组(P<0.05),各妊娠期RLX-2/TIMP-2比值的曲线下面积(AUC)均较RLX-2,TIMP-2高,其最佳拐点为≤0.1(P<0.000 1)。结论RSA的发生可能与妊娠期RLX-2的分泌不足以及过高的血清TIMP-2浓度有关;妊娠10～12周时RLX-2/TIMP-2比值≤0.1对RSA的临床诊断价值最大。

原因不明复发性流产患者外周血单核细胞上Tim-3和PD-1的表达及意义

目的探讨原因不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)和先兆流产患者外周血单核细胞上PD-1和Tim-3的表达及其细胞因子的分泌情况,为先兆流产和URSA发病机制研究提供理论依据。方法随机选取29例健康早孕妇女作为正常早孕组(A组),37例仅有少量阴道出血的早孕妇女为先兆流产组(B组),22例URSA早孕患者为URSA组(C组);应用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,然后采用流式细胞分析技术检测3组孕妇外周血中CD14+单核细胞上Tim-3、PD-1的表达水平;ELISA法检测外周血中IL-4、IL-12、IFN-γ的含量。结果与正常早孕组相比,先兆流产组和URSA组外周血单核细胞上Tim-3、PD-1表达降低,外周血IL-4表达降低,URSA组低于先兆流产组(P<0.05);IFN-γ、IL-12表达增高,URSA组高于先兆流产组(P<0.05);相关性分析提示先兆流产组及URSA组外周血单核细胞上Tim-3与PD-1之间呈正相关;Tim-3、PD-1与IL-12呈负相关,IL-12与IL-4呈负相关,与IFN-γ呈正相关。结论外周血单核细胞上Tim-3、PD-1可能通过调节IL-12产生间接调节Th1/Th2平衡参与先兆流产和URSA的发生。

HMGB1与原因不明复发性流产的关系

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)患者外周血中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平,及其对Th17/Treg平衡的影响。方法选取42例早孕期原因不明复发性流产患者为研究对象(URSA早孕组),并以32例正常早孕孕妇为正常早孕组(NP组)。采用流式细胞术(FCM)检测外周血中Th17和Treg细胞的比例;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测外周血中HMGB1、RAGE、IL-17、IL-6、TGF-β及IL-10表达水平。结果 URSA早孕组外周血中Treg细胞比例低于正常早孕组(P<0.05),而Th17细胞比例和Th17/Treg比值均高于正常早孕组(P<0.05);URSA早孕组外周血HMGB1和RAGE表达高于正常早孕组(P<0.05);与正常早孕组相比,URSA早孕组外周血IL-17、IL-6表达水平均增高(P<0.05),而TGF-β、IL-10的表达水平均下降(P<0.05);在相关性分析比较中,URSA早孕组外周血HMGB1表达水平与RAGE、IL-17、IL-6均呈正相关,而HMGB1表达水平与TGF-β、IL-10均呈负相关。结论 URSA外周血中HMGB1表达水平增高,HMGB1可能通过直接或间接的方式调节Th17/Treg平衡模式参与URSA的发病机制。

母血中胎源RASSF1A基因的表达水平对于子痫前期的预测价值

目的研究子痫前期患者在妊娠早、中期血浆中胎源性RASSF1A基因的水平，探讨其在预测子痫前期发生和发展中的作用。方法选取孕妇325名，分别在其孕7～12周、13～18周及19-24周采外周血，提取游离DNA，采用甲基化敏感的限制性酶切消化法联合荧光定量PCR技术检测血浆中超甲基化RASSF1A基因的含量，同时监测孕妇血压、尿蛋白值及临床表现，将最终发展为子痫前期的孕妇列入子痫前期组，从正常孕妇中随机选取30名列入对照组，回顾性分析两组孕妇血浆中超甲基化RASSF1A基因水平的差异，并进一步分析子痫前期临床分类、分型与该基因浓度的关系。结果（1）325名孕妇中26例发展为子痫前期患者，在妊娠13～18周子痫前期组超甲基化RASSF1A基因平均含量为141．62拷贝数／mL，正常妊娠组为98．90拷贝数／mL，差异有统计学意义；妊娠19～24周子痫前期组RASSF1A基因含量为对照组的2．03倍。（2）在妊娠13～24周，重度子痫前期超甲基化RASSF1A基因浓度均高于轻度子痫前期，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与晚发型重度子痫前期组相比，在妊娠19～24周早发型重度子痫前期组RASSF1A基因的浓度升高（P〈0．05）。结论孕妇血浆中超甲基化RASSF1A基因浓度的异常变化可能发生在妊娠中期，对早期预测子痫前期的发生及进展具有重要意义。

孕妇血浆中胎儿表观遗传标记的检测效率评价

目的 分析母血中非性别依赖的胎儿表观遗传学标记超甲基化Ras相关区域家族1A（Ras association domain family 1A,RASSF1A）基因的检测效率,探讨其替代SRY基因检测游离胎儿DNA的可行性. 方法 选择2011年5月1日至2012年4月30日于山西省大同市第一和第五人民医院进行产前检查的正常妊娠妇女50例,分别于妊娠早、中、晚期采集外周静脉血,胎儿出生后确定为男胎的孕妇（28例）为研究对象.选择20例同期体检的健康未妊娠女性作为阴性对照.通过甲基化敏感的限制性内切酶消除母源性（非甲基化）RASSF1A基因,采用TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应检测胎源性（超甲基化）RASSF1A基因,同时测定孕妇血浆中SRY基因并作为参照,对检测结果进行相关性分析.统计学方法采用Shapiro-wilk分析、Pearson或Spearman秩相关分析和x2检验. 结果 28例男胎孕妇共进行84次检测,超甲基化RASSF1A基因最早于妊娠第8＋2周检出,检出率97.62％（82/84）.对照组未检测到超甲基化RASSF1A基因和SRY基因.妊娠早、中、晚期孕妇血浆中酶切后RASSF1A基因及SRY基因的含量分别为（60.19±14.16） copies/ml与（58.22±15.13） copies/ml（r=0.933,P＜0.01）、（99.18±28.44） copies/ml与（95.43±32.33） copies/ml（r=0.931,P＜0.01）、（144.93±33.51） copies/ml与（132.96±28.24） copies/ml（r=0.654,P＜0.01）.酶切后RASSF1A和SRY基因含量均与孕周呈正相关（r分别为0.933和0.896,P均＜0.01）. 结论 检测表观遗传学标记超甲基化RASSF1A基因所得的游离胎儿DNA结果与SRY基因具有较高的一致性,该基因突破了胎儿性别的局限,有助于扩大无创伤性产前诊断的临床应用范围.