二甲双胍对小鼠脑缺血再灌注损伤后认知功能的影响及其机制

目的探讨二甲双胍对脑缺血再灌注(I/R)小鼠认知功能的影响及其机制。方法采用随机数字表法将40只雄性C57BL/6小鼠[(23±2)g,7~8周龄]分为4组:sham组、I/R组、I/R+100 mg/kg二甲双胍组(低剂量组)和I/R+200 mg/kg二甲双胍组(高剂量组),每组10只。脑缺血组小鼠采用大脑中动脉阻断(MCAO)60 min后再灌注7 d,sham组除不插入细丝阻断外,其余手术步骤相同;低剂量组和高剂量组小鼠在脑缺血再灌注后4 h,每天分别用100,200 mg/kg二甲双胍溶液灌胃,持续7 d。采用Morris水迷宫实验评价小鼠学习和记忆相关指标;采用干湿质量法评估小鼠脑水肿情况;采用HE染色评估小鼠神经元形态变化;采用ELISA试剂盒检测小鼠脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与sham组相比,I/R组小鼠自发交替正确率降低,逃避潜伏期增加,目标象限时间降低,穿越平台次数降低(均P<0.05);脑组织含水量增加(P<0.05);BDNF含量和SOD活性均降低(P<0.05);脑组织中变性神经元数量增多。与I/R组相比,低剂量组小鼠目标象限时间增加(P<0.05);高剂量组小鼠自发交替正确率增加(P<0.05),逃避潜伏期降低(P<0.05),目标象限时间增加(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.05),脑组织含水量降低(P<0.05),BDNF含量和SOD活性增加(P<0.05),神经元变性减少。结论200 mg/kg二甲双胍后处理可改善脑缺血再灌注小鼠认知功能,可能与脑水肿减轻、神经元变性改善、脑内BDNF含量和SOD活性增加有关。

多媒体PPT教学和传统板书教学在生理学教学中的作用观察

目的:观察生理学多媒体PPT教学与传统板书教学优缺点。方法:选用2007级临床医学专科2个教学班,80名学生进行PPT教学与传统教学进行生理学教学对比研究。结果:PPT教学法与传统教学各有优点。结论:PPT教学与传统教学应有机结合。

慢性高脂肪饮食对缺血/再灌注大鼠脑损伤影响及机制

目的评估慢性高脂肪饮食(HFD)对缺血/再灌注(I/R)大鼠脑损伤影响及机制。方法60只雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食(ND)组(n=30)和高脂肪饮食(HFD)组(n=30),每组再分别分为Sham组和I/R组两个亚组,每组均为15只大鼠。采用神经行为学法评估各组大鼠神经功能缺损;采用HE染色法检测各组大鼠脑组织病理学变化;采用尼氏染色法检测各组大鼠神经元存活率;采用Western blotting法检测各组大鼠脑组织细胞焦亡相关蛋白(NLRP3、Caspase-1、IL-1β)及HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达。结果与ND组相比,HFD组大鼠体质量、内脏脂肪组织、甘油三酯、总胆固醇和葡萄糖水平均增加(P<0.05)。在I/R组中,与ND大鼠相比,HFD大鼠出现更严重神经功能缺损;HE染色显示HFD大鼠具有更多受损细胞;尼氏染色显示HFD大鼠存活神经元数量减少;HFD大鼠细胞焦亡相关蛋白(NLRP3、Caspase-1、IL-1β)表达较高;HFD大鼠HMGB1及其下游因子TLR4和NF-κB表达较高(P<0.05)。结论HFD摄入会加重大鼠脑I/R损伤后细胞焦亡,并增强HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路表达,从而导致I/R后不良结局。

四联疗法补救治疗幽门螺杆菌感染的效果观察

幽门螺杆菌（helicobacter pylori,H.pylori）主要寄生在胃,全球超过一半的人感染幽门螺杆菌,是胃炎、消化性溃疡和胃癌等的主要致病因素。临床上主要通过抗生素联合质子泵抑制剂根除幽门螺杆菌。目前根除幽门螺杆菌最主要的问题是幽门螺杆菌对抗生素产生耐药性。

小鼠脑缺血时自噬相关基因5的抗损伤作用

目的:观察自噬相关基因5(Atg5)在小鼠脑缺血再灌注损伤中的抗损伤作用。方法:将雄性BALB/c小鼠随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、Atg5 siRNA组和control siRNA组。I/R组采用大脑中动脉阻塞(MCAO)60 min后再灌注24 h。Atg5 siRNA组和control siRNA组将5μL Atg5 siRNA或scrambled siRNA在MCAO前24 h侧脑室注射。实时荧光定量PCR和Western blot检测Atg5的表达;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测抑制Atg5对缺血再灌注损伤后脑梗死面积和水肿率的影响;神经行为学评分法检测抑制Atg5对缺血再灌注损伤后神经症状的影响。结果:MCAO后再灌24 h,缺血半影区Atg5 mRNA和蛋白水平显著增高(P<0.05);Atg5 siRNA明显降低缺血再灌后Atg5 mRNA和蛋白的表达(P<0.05);侧脑室给予Atg5 siRNA能显著增加脑梗死面积和水肿率,并加重神经行为学损伤(P<0.05)。结论:沉默Atg5加重小鼠脑缺血再灌损伤,提示MCAO后诱导的Atg5可减轻小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤。

早期跑步运动对大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经行为与神经元凋亡的影响

目的:探讨早期跑步运动对大鼠脑缺血后神经行为与神经元凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为4组:假手术+安静组(Sham-St、假手术+运动组(Sham-Ex)、缺血(大脑中动脉闭塞(MCAO)+运动组((MCAO-Ex)和缺血+安静组(MCAO-St),每组15只。MCAO-Ex和MCAO-St组大鼠行MCAO 60 min,再灌注2 d后,MCAO-Ex和Sham-Ex大鼠在跑步机上进行5 d的30 min/d跑步运动(15 m/min),之后进行神经行为学评价,最后大鼠断头取脑进行TTC方法染色,评估各组大鼠梗死体积以及缺血半影Caspase-3和TUNEL阳性细胞表达水平。结果:与Sham-St相比,MCAO-St和MCAO-Ex大鼠缺血半影区Caspase-3表达均显著升高(P<0.05);与MCAO-St组大鼠相比,MCAO-Ex组大鼠脑梗死体积明显减少,大鼠神经功能评分明显改善,大鼠缺血半影区Caspase-3和TUNEL阳性细胞表达水平显著降低(P<0.05)。结论:早期运动可能通过抑制大鼠脑缺血后神经元凋亡发挥神经保护作用。

N-乙酰半胱氨酸对脂多糖诱导的小鼠肝MAPK磷酸化的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脂多糖(LPS)诱导的肝MAPK磷酸化的影响。方法:雄性昆明种小鼠54只随机分为对照组(n=6):0.9%NaCl0.2mLip;LPS组(n=24):LPS5mgip;NAC+LPS组(n=24):NAC150mg·kg-1.d-1ip,连续3d;第3dNAC灌胃后1h时,LPS5mgip。将小鼠分别在注射LPS或生理盐水后0.5h、1h、2h和6h时,在戊巴比妥钠麻醉下开腹取肝,测定肝MDA和还原型谷胱甘肽(GSH)含量;Western blotting方法测定肝脏MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK磷酸化水平,放免法测定肝TNF-α含量。结果:NAC预处理使肝MDA含量明显下降,使肝GSH含量升高。NAC预处理显著抑制了LPS所致的肝MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK磷酸化,同时使肝TNF-α水平显著降低。结论:在LPS诱导的急性肝损伤过程中,活性氧(ROS)在激活MAPK信号转导中起重要作用。NAC通过其抗氧化作用部分抑制了LPS诱导的MAPK磷酸化,使TNF-α生成减少,从而发挥抗损伤作用。

2型糖尿病患者血管病变与血清可溶性粘附分子间的关系

目的研究2型糖尿病患者血清可溶性细胞间黏附分子-1和血管细胞黏附分子-1水平的变化及其与血管病变的关系。方法73例2型糖尿病患者按照血管病变的情况分为无血管病变组(n=22)、微血管病变组(n=25)、大血管病变组(n=26),20例健康者作为对照组。应用酶联免疫吸附法检测各组患者血清可溶性细胞间黏附分子-1和血管细胞黏附分子-1水平,并测定糖脂代谢指标和血浆假性血友病因子水平。结果糖尿病各组血清可溶性细胞间黏附分子-1和血管细胞黏附分子-1水平明显高于对照组(P<0.01)。无血管病变组、微血管病变组和大血管病变组血清可溶性细胞间黏附分子-1和血管细胞黏附分子-1水平均逐渐升高,组间比较有显著性差异(P<0.01)。可溶性细胞间黏附分子-1水平与血浆假性血友病因子、三酰甘油、血压呈正相关(r=0.46、0.52和0.47,P<0.01),可溶性血管细胞黏附分子-1水平也与血浆假性血友病因子、三酰甘油呈正相关(r=0.43和0.48,P<0.01)。结论细胞表面细胞间黏附分子-1和血管细胞黏附分子-1在糖尿病慢性血管病变的发生发展中起着重要作用,可作为2型糖尿病患者血管病变的预测和监测指标。

盐酸美金刚联合维生素D对阿尔茨海默病患者认知功能的影响

阿尔茨海默病（AD）患者是痴呆最常见的形式,不仅脑内胆碱能活性降低,同时存在谷氨酸兴奋性毒性,导致突触可塑性丧失和神经元死亡,表现为学习和记忆能力下降。临床上常用乙酰胆碱酯酶抑制剂治疗AD,可以提高脑胆碱能活动,在突触中保持较高水平乙酰胆碱,但这些药物不改变AD发病机制。相比较,盐酸美金刚治疗AD,可以改善可塑性和抑制谷氨酸兴奋性毒性。

CCL3对大鼠糖尿病神经病理性疼痛的影响

目的探讨脊髓趋化因子配体3(CCL3)在链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病神经病理性疼痛模型中的作用。方法将SD大鼠随机分成对照组和STZ组。STZ组进一步分为CCL3组、IgG2A组,以及A438079组、PBS组,STZ注射前1 d经鞘内注射CCL3和A438079,1次/d,持续7 d。采用免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角(SDH)Iba1的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测CCL3及其受体CCR1、CCR5和P2X7R mRNA表达水平,von Frey细丝法测定大鼠机械痛阈值。结果大鼠腹腔注射STZ后机械刺激痛阈降低(P<0.05)。大鼠SDH小胶质细胞数量增加(P<0.05)。与此同时,STZ组大鼠SDH中CCL3、CCR5 mRNA表达增加(P<0.05)。鞘内注射CCL3中和抗体能减轻STZ诱导的大鼠机械性痛觉过敏(P<0.05)。P2X7R选择性拮抗剂A438079能缓解STZ所致痛觉过敏(P<0.05)。结论大鼠SHD中CCL3和P2X7R有助于STZ诱导的痛觉过敏。

早期运动联合戊四氮对脑缺血再灌注大鼠神经功能的效果及其机制

目的探讨早期跑步运动和γ-氨基丁酸(GABA)受体拮抗剂对缺血再灌注(I/R)大鼠神经功能和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠50只平均分为假手术组、模型组、运动组、戊四氮组和综合组,每组10只。除假手术组外,其余大鼠行大脑中动脉阻塞(MCAO)1 h再灌注。再灌注2 d后,戊四氮组和综合组每天腹腔注射戊四氮0.25 mg/kg,共5 d;运动组和综合组每天跑步机上跑步30 min。再灌注7 d后,各组大鼠行神经行为学评价,TTC染色评估各组大鼠梗死体积,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法检测各组缺血半影区BDNF表达水平。结果与模型组相比,运动组、戊四氮组和综合组神经功能评分改善,脑梗死体积减少(P<0.05),而且综合组优于其他两组(P<0.05)。综合组缺血半影区BNDF表达高于其他组(P<0.05)。结论早期跑步运动联合戊四氮可促进I/R大鼠神经功能恢复,可能与BDNF上调有关。

大鼠缺血再灌注后早期运动干预通过诱导内皮型一氧化氮合酶活化发挥神经保护作用的机制研究

目的:探讨早期跑步运动是否通过激活内皮型一氧化氮合酶(activating endothelial nitric oxide synthase,e NOS)在大鼠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中发挥保护作用。方法:50只雄性SD大鼠随机分为5组:Sham组(n=10)、I/R组(n=10)、运动+I/R组(n=10)、eNOS抑制剂(L-NIO)+I/R组(n=10)和运动+L-NIO+I/R组(n=10)。I/R大鼠行大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)60mins,再灌2天后,运动+I/R组和运动+L-NIO+I/R组大鼠在跑步机上连续跑5天,每次30mins。再灌7天后,评估各组大鼠神经功能、脑梗死体积,以及梗死周围区和脑血管P-eNOS和P-AMPK蛋白表达。结果:运动+I/R组神经行为学评分及脑梗死体积明显低于I/R组、L-NIO+I/R组和运动+L-NIO+I/R组(所有P<0.05)。与I/R组、L-NIO+I/R组和运动+L-NIO+I/R组相比,运动+I/R组梗死周围区和脑血管P-eNOS和P-AMPK蛋白水平较高(所有P<0.05)。结论:早期跑步运动可能通过激活eNOS减轻I/R大鼠神经血管损伤,改善功能预后。

下调microRNA-181b在小鼠缺血性脑损伤中的神经保护作用

目的:探讨microRNA-181b(miR-181b)在缺血性小鼠脑损伤病理过程中的神经保护作用。方法:应用N2A细胞氧-糖剥夺(OGD)模型模拟神经细胞缺血损伤;应用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型模拟缺血性脑损伤(成功率约60%),原位细胞凋亡检测试剂盒检测N2A细胞损伤程度,蛋白印迹检测miR-181b靶蛋白自噬蛋白5(Atg5)及caspase-9的变化情况,萤光素酶报告基因技术检测miR-181b对Atg5 mRNA的直接调控作用。结果:在OGD致N2A细胞缺血损伤过程中,通过上调或抑制miR-181b的表达水平可以显著影响N2A细胞的凋亡(P<0.05);miR-181b表达水平的改变可显著影响Atg5蛋白表达水平(P<0.05);共转染miR-181b前体或miR-181b抑制剂可显著抑制或增高含有Atg5 mRNA 3’-UTR的萤光素酶报告基因的活性(P<0.05);MCAO后活化caspase-9的表达显著升高,而miR-181b拮抗剂可使MCAO后剪切的caspase-9表达明显减少(P<0.05)。结论:下调miR-181b可能通过调节Atg5的蛋白表达在缺血性小鼠脑损伤中发挥神经保护作用。

高糖对脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的观察高糖对脐静脉血管内皮细胞生长因子(VEGF)信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。方法胰酶消化法制备人脐静脉内皮细胞并传代培养,取生长良好的第2、3代细胞进行实验。用不同浓度葡萄糖(0mmol/L、5.5mmol/L、11mmol/L、22mmol/L、44mmol/L)作用48h,并选取22mmol/L葡萄糖分别作用0h、24h、48h、72h、96h,观察VEGF mRNA的变化。结果脐静脉VEGF mRNA的表达随高糖浓度的增加也逐渐增加(P<0.05),至22mmol/L达到最高峰,44mmol/L时下降;在22mmol/L葡萄糖作用下,随着作用时间的延长,VEGF mRNA水平逐渐增加(P<0.01),但当作用72h时VEGF mRNA水平不再升高。结论高血糖本身可引起脐静脉内皮细胞VEGF mRNA表达的增加,且在一定范围内呈时间和剂量依赖性。

汽车尾气对大鼠皮层神经细胞的影响

随着机动车数量增多,汽车尾气对健康构成了巨大的威胁。汽车尾气中存在的多种化学物质不仅可作用于鼻腔、咽喉、气管等呼吸道部位,有研究显示汽车尾气还具有神经毒性,能导致脑组织中多巴胺神经元的数目减少[1]。汽车尾气对胎儿神经系统的发育是否有影响未见报道。本研究以新生的Wistar大鼠和每天吸汽车尾气的大鼠所生的新生Wistar大鼠为观察对象,进行离体神经细胞培养,观察大鼠神经细胞存活的天数、Calcein-AM染色结果、神经细胞活力测定等。报告如下。

BK通道在血管平滑肌细胞迁移中的作用

观察BK通道在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)上的功能及数量发生变化时,对VSMC迁移速度的影响。用脂质体转染法使BK通道在VSMC上过表达,或用BK通道特异性阻断剂IBTX(iberiotoxin)阻断VSMC上BK通道的功能,在这两种情形下,观察VSMC迁移速度的变化。研究结果表明,当过表达BK通道于VSMC,与正常对照相比,其迁移速度明显减慢;反之,当BK通道功能被特异性阻断剂IBTX阻断后,VSMC的迁移速度明显加快。最后认为BK通道的表达水平与VSMC的迁移速度呈负相关,过表达BK通道抑制VSMC的迁移。

静脉或鞘内注射盐酸奈福泮对大鼠甲醛炎性痛的影响及机制探讨

目的评估盐酸奈福泮静脉或鞘内注射的镇痛效果及脊髓多巴胺能神经传递在其中的作用。方法复制大鼠甲醛炎性痛模型,然后进行微透析研究,检测盐酸奈福泮注射后大鼠脊髓背角细胞外多巴胺浓度变化。通过预先注射舒必利,多巴胺D2受体拮抗剂,观察多巴胺水平变化与盐酸奈福泮镇痛的关系。结果静脉注射盐酸奈福泮,可抑制甲醛诱导的Ⅰ期退缩反应,但对Ⅱ期退缩反应无影响。鞘内注射盐酸奈福泮可减少Ⅰ和Ⅱ期退缩反应,并呈剂量依赖性。微透析研究发现,鞘内注射盐酸奈福泮引起大鼠脊髓多巴胺水平增加。预处理舒必利不影响静脉或鞘内注射盐酸奈福泮的镇痛作用。结论无论是静脉和鞘内注射盐酸奈福泮均有效缓解大鼠炎性痛。盐酸奈福泮镇痛机制可能不涉及脊髓水平多巴胺能神经传递。

合理设计实验室总体布局 培养学生综合实验技术技能

高等教育的改革和发展,给实验室工作带来了生机。实验室是实验技能培训的主要场所,建设多功能、多学科联用实验室,将实验室科学合理地进行布局具有必要性和重要性。

α1a肾上腺素受体拮抗剂西洛多辛对大鼠良性前列腺增生的影响

目的探讨选择性α1a肾上腺素受体拮抗剂西洛多辛对睾酮引起大鼠良性前列腺增生（BPH）的影响及机制研究。方法大鼠随机分成三组：对照组、睾酮诱导BPH组和西洛多辛＋BPH组。对照组不做任何处理，BPH组、西洛多辛组BPH模型由睾酮[20mg／（kg·d）]皮下连续注射4周诱导。西洛多辛组大鼠同时连续口服西洛多辛[100μg／（kg·d）]4周，4周后处死所有大鼠，检测各组大鼠血生化指标，前列腺体积、重量和病理变化，表皮生长因子受体（EGFR）和B细胞慢性淋巴细胞白血病／淋巴瘤2（BCL-2）蛋白表达。结果4周后，各组大鼠体重均增加，但差异无统计学意义（P〉0．05）。BPH组血糖水平低于对照组，各组间谷草转氨酶和谷丙转氨酶水平差异均无统计学意义（P〉0．05）。与BPH组相比，西洛多辛治疗组前列腺体积和重量显著减小[前列腺体积：（0．93±0．14）cm^3 VS（1．75±0．15）cm^3，P〈0．01；前列腺重量：（0．97±O．06）gVS（1．30±0．05）g，P〈0．01]。西洛多辛降低前列腺组织中EGFR和BCL-2表达（P〈0．05）。结论西洛多辛可能通过减少EGFR和BCL-2的表达抑制BPH。