铁皮石斛多糖抗肝纤维化作用及其机制研究

目的探讨铁皮石斛多糖(DOP)对CCl4诱导肝纤维化(HF)的影响、作用机制及其超声评价方法。方法采用皮下注射40%CCl4橄榄油溶液建立大鼠HF模型,随机分为正常组(NG组)、模型组(MG组)、秋水仙碱组(CG组,5×10^(-5)g/kg)、DOP低剂量组(DL组,0.05 g/kg)、DOP高剂量组(DH组,0.1 g/kg),每组6只。药物组分别给予秋水仙碱和DOP灌胃处理,NG组和MG组给予等量生理盐水处理。采用苏木精-伊红(HE)染色、Masson染色法和血液生化法进行病理学、肝功能和HF指标的检测;采用RT-qPCR法检测Col-Ⅲ、TGF-β1、TIMP-1、β-catenin基因的表达;采用Western blot法检测α-SMA、TGF-β1、β-catenin蛋白的表达;采用超声声学弹性成像技术(ARFI)的横向剪切速度(Vs)评价HF程度。结果CG、DH组均可增加MG组大鼠的体质量(P<0.05)HE、Masson染色结果显示MG组出现典型HF特征,DL组和DH组均可改善HF程度。血液生化检测肝功能结果显示,DH组较MG组的ALT、AKP下降(P<0.05),AST显著降低(P<0.01),ALB显著上升(P<0.01),而DL组与MG组比较仅有AST显著降低(P<0.01);DL组ALT、AST含量较CG组均明显上升(P<0.01)检测HF指标结果显示,DL、DH组较MG组的LN、HA、PC-Ⅲ和Col-Ⅳ均出现显著下降(P<0.01),Col-Ⅲ仅在DH组出现显著下降(P<0.01),DL组LN、HA、PC-Ⅲ、Col-Ⅳ和Col-Ⅲ含量较CG组明显上升(P<0.05)。RT-qPCR检测结果显示,DH组较MG组的TGF-β1 mRNA表达显著减少(P<0.01),Col-Ⅲ、TIMP-1、β-catenin mRNA表达减少(P<0.05);DL组Col-Ⅲ、TIMP-1、TGF-β1、β-catenin mRNA相对表达量均高于CG组(P<0.05或0.01);DH组仅Col-Ⅲm RNA相对表达量高于CG组(P<0.05)。蛋白检测结果显示,DH组的α-SMA、TGF-β1、β-catenin蛋白以及DL组的α-SMA蛋白相对表达量均较MG组下降显著(P<0.01),DL组的TGF-β蛋白相对表达量低于MG组(P<0.05);DL组α-SMA、TGF-β1、β-catenin蛋白相对表达量均高于CG组(P<0.05)。ARFI检测结果显示,DL组较MG组的Vs值降低(P<0.05),而DH组较MG组的Vs值显著下降(P<0.01);DL组较CG组Vs值明显上升(P<0.05)。结论DOP可减轻CCl4诱导的HF程度,其抗HF作用机制可能与通过调控大鼠肝组织中的TGF-β和Wnt/β-catenin信号通路有关。Vs可作为ARFI评价HF的一个重要指标。