美洲大蠊提取物YS-F对人非小细胞肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响

目的:探讨美洲大蠊提取物对人非小细胞肺癌细胞A549增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法:将美洲大蠊干燥虫体以90%乙醇冷浸提取后,经聚酰胺柱色谱以水-甲醇梯度洗脱,得20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%甲醇洗脱部位(YS-A^H)。采用MTT法筛选活性部位,并检测不同剂量活性部位作用后的细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测不同剂量活性部位作用后的细胞凋亡、细胞周期和线粒体膜电位变化情况。结果:YS-A^H的半数抑制浓度分别为(95.25±8.42)、(129.93±7.24)、(221.28±12.68)、(275.39±14.87)、(276.76±16.32)、(31.90±5.34)、(163.15±6.97)、(122.81±8.36)μg/mL,以YS-F的活性最强。经YS-F 3、9、27、81μg/mL作用24、48、72 h后,各时间点的细胞增殖抑制率均显著升高,且药物作用48、72 h时的细胞增殖抑制率显著高于同组24 h,作用72 h时的细胞增殖抑制率均显著高于同组48 h(P<0.01)。除YS-F 3μg/mL作用24 h、YS-F 9μg/mL作用72 h对坏死晚期细胞百分比,YS-F 3μg/mL作用24 h对G2/M期细胞比例以及YS-F 3μg/mL作用48 h对细胞线粒体膜电位降低率均无显著影响(P>0.05)外,其余各剂量组各时间点凋亡早期、凋亡晚期和坏死早期、坏死晚期细胞百分比以及Sub-G0/G1期、S期细胞比例均显著升高,G0/G1期、G2/M期细胞比例均显著降低(P<0.01);且药物作用48、72 h时各剂量组凋亡早期、凋亡晚期和坏死早期、坏死晚期细胞百分比(除YS-F 9μg/mL作用72 h时的坏死晚期细胞百分比外)以及Sub-G0/G1期、G2/M期(除48 h YS-F 3、9μg/mL组外)细胞比例均显著高于同组24 h,而G0/G1期、S期、G2/M期(除48 h YS-F 9μg/mL组外)细胞比例均显著低于同组24 h(P<0.01);药物作用72 h时各剂量组凋亡早期、凋亡晚期和坏死早期、坏死晚期细胞百分比(除YS-F 27μg/mL作用72 h时的凋亡晚期和坏死早期细胞百分比以及YS-F 3、9μg/mL作用72 h时的坏死晚期细胞百分比显著降低外)以及S期(除72 h YS-F 3μg/mL组外)、Sub-G0/G1期细胞比例均显著高于同组48 h,而G0/G1期、G2/M期细胞比例均显著低于同组48 h(P<0.01)。经YS-F 9、27、81μg/mL作用48 h后,细胞线粒体膜电位降低率均显著升高,且YS-F 27、81μg/mL组显著高于YS-F 9μg/mL组,YS-F 81μg/mL组显著高于YS-F 27μg/mL组。结论:YS-F可通过阻滞细胞从S期向G2/M期转化、降低线粒体膜电位等途径来抑制A549细胞的增殖并促进其凋亡,且这种作用具有时间或剂量依赖性。