美洲大蠊多肽PAE_(2)逆转耐药细胞株多药耐药性的研究

目的:探讨美洲大蠊多肽PAE2逆转人肝细胞癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU多药耐药性的作用及机制。方法:以人肝细胞癌敏感细胞株BEL-7402和人肝细胞癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU为研究对象。采用噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞活力;荧光定量聚合酶链式反应(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫细胞化学染色法检测细胞中谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferase-π,GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(topo-isomerase typeⅡ,TopoⅡ)和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的mRNA和蛋白的相对表达量。结果:美洲大蠊多肽PAE2能有效逆转人肝细胞癌耐药细胞BEL-7402/5-FU的多药耐药性,能下调多药耐药相关酶PKC、GST-π、TopoⅡ的mRNA和蛋白表达水平。结论:PAE2在体外逆转多药耐药的作用机制可能与下调多药耐药相关酶有关。

美洲大蠊多肽PAE_(2)基于AMPK调控自噬逆转BEL-7402/5-FU多药耐药的体外研究

目的:探究美洲大蠊多肽PAE_(2)基于腺苷-磷酸活化蛋白激酶(AMPK)调节自噬对人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU多药耐药性的影响。方法:以人肝癌细胞株BEL-7402及人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU为研究对象,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定AICAR的作用时间及浓度;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞中AMPK含量;实时聚合酶链式反应(real-time PCR)检测细胞中AMPK mRNA的表达水平;real-time PCR检测细胞中自噬相关蛋白5(ATG5)、自噬相关蛋白7(ATG7)、磷酸肌醇-3-激酶3(PIK3C3)、Beclin 1、微管相关蛋白1亲链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、P62、Zeste同源物增强子2(EZH2)等mRNA的表达水平;激光共聚焦显微镜观察细胞中LC3-Ⅱ的表达;免疫细胞化学法(ICC)检测细胞中P62蛋白的表达。结果:美洲大蠊多肽PAE_(2)能够降低AMPK含量(P<0.05),也能降低AMPK mRNA的表达水平,显著降低自噬相关因子ATG5 mRNA、ATG7 mRNA、PIK3C3mRNA、Beclin 1 mRNA、LC3-ⅡmRNA的表达水平(P<0.05),明显提高P62 mRNA及EZH2 mRNA的表达水平(P<0.05),增加P62蛋白的表达(P<0.05)。结论:美洲大蠊多肽PAE_(2)能够通过下调AMPK的表达进而抑制自噬来逆转BEL-7402/5-FU细胞的多药耐药性。