自噬相关蛋白LC3Av1在口腔鳞状细胞癌中表达及甲基化对其的影响

目的:检测自噬相关基因LC3Av1在口腔鳞状细胞癌中的表达,及甲基化对表达的影响,初步探讨自噬与口腔肿瘤发生的关系。方法:提取18株口腔鳞癌细胞系的总RNA,检测LC3Av1的转录水平表达。并采用COBRA法检测LC3Av1启动子区域CpG岛的甲基化程度。结果:LC3Av1在18株口腔鳞癌中仅有3株表达(表达率为16.7%),而LC3B全部表达。有17株LC3Av1可检测出甲基化。结论:在口腔鳞癌中LC3Av1表达水平降低,提示口腔鳞癌的发生可能与LC3Av1依赖的细胞自噬障碍有关,其表达缺失可能与高甲基化相关。

引导组织再生术联合牙内骨内种植治疗牙周病的临床疗效

选取沈阳市口腔医院牙周科2017年1月至2018年1月间收治的56例牙周病患者,按照治疗方法不同分为观察组与对照组,每组28例。对照组采用引导组织再生术治疗,观察组在采用引导组织再生术治疗基础上联合牙内骨内种植治疗,比较分析2组患者治疗效果。结果显示,与治疗前比较,2组患者牙周附着水平、牙周袋探诊深度指标均明显改善(P <0.05)。治疗后与对照组比较,观察组牙齿松动度降低,治疗总有效率提高,老年人口腔健康生活质量评价指数各指标评分降低(均P <0.05)。引导组织再生术联合牙内骨内种植治疗牙周病,可明显提升牙周附着效果,改善患者口腔健康状况,提高了患者生活质量,值得临床上推广应用。

不同脱钙条件对透明牙体标本制作影响的实验研究

目的研究硝酸的温度与浓度及附加振荡对透明牙体标本制作的影响。方法将48颗离体牙进行常规根管预备、根管充填后,根据硝酸的温度和浓度不同及是否附加振荡,随机分为6组:A组置于20℃、6%硝酸中;B组置于20℃、6%硝酸中并附加振荡;C组置于20℃、3%硝酸中;D组置于20℃、3%硝酸中并附加振荡;E组置于30℃、6%硝酸中并附加振荡;F组置于30℃、3%硝酸中并附加振荡。待标本达脱钙标准后,常规梯度脱水,于水杨酸甲酯中透明并保存,比较各组脱钙所需时间,观测牙体标本透明前后的长度,计算牙体标本透明后收缩量和收缩率。结果E组脱钙时间最快,其次是F组、B组,C组最慢。关于牙体标本收缩量,E组>B组>A组,F组>D组>C组,B组>D组,E组>D组,其差异有统计学意义(P<0.05)。C组收缩最小,与其他组之间差异有统计学意义(P<0.05)。关于牙体标本收缩率,A组与B组、C组与D组、B组与F组、D组与F组差异无统计学意义,其余各组之间比较均有统计学差异(P<0.05)。结论使用振荡仪、温度越高、酸浓度越大,脱钙越迅速,牙体标本收缩越大。使用3%浓度硝酸溶液在20℃振荡条件下进行脱钙,既可以尽快完成脱钙,又可以减少牙体标本的收缩程度,制作透明牙标本效果最佳。

NLRP3/Caspase-1炎性体通路在大鼠根尖周炎中表达的研究

目的:研究大鼠实验性根尖周炎中NLRP3/Caspase-1炎性体通路的表达。方法:30只大鼠双侧下颌第一磨牙开髓后封入PBS缓冲液棉球,玻璃离子封闭髓腔,分别于开髓后0、7、14、21d和28d处死大鼠,分离双侧下颌骨。组织学处理后HE染色观察根尖周组织炎症状况,免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR分别检测NLRP3、Caspase-1和IL-1β的表达情况。结果:NLRP3、Caspase-1和IL-1β在炎性根尖周组织中均有表达;与对照组相比,三者表达水平均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);其中Caspase-1和IL-1β阳性细胞数与NLRP3阳性细胞数呈显著正相关(P<0.01)。结论:根尖周组织中存在着NLRP3/Caspase-1炎性体通路,提示该通路在根尖周组织固有免疫中可发挥重要作用。

再治疗根管粪肠球菌生物膜形成与临床表现相关性分析

目的检测粪肠球菌形成生物膜的能力,探讨其生物膜形成能力与临床表现之间的关系。方法采用96孔板法形成生物膜,结合结晶紫染色,检测临床样本中分离的53株粪肠球菌形成生物膜的能力,分析其生物膜形成能力与患牙临床表现之间的关系。结果 53株粪肠球菌中,40株(75.47%)具有生物膜形成能力;在患牙的多种临床表现中,瘘道与再治疗根管粪肠球菌生物膜形成具有相关性,结果具有统计学意义(P<0.05)。结论再治疗根管中,无瘘道的患牙分离出来的粪肠球菌生物膜形成能力强于有瘘道的患牙,临床治疗中应予以注意。

复发性阿弗他溃疡患者唾液中表皮生长因子和病损区表皮生长因子受体的定量研究

目的探讨复发性阿弗他溃疡(RAU)患者溃疡期和间隙期唾液表皮生长因子(EGF)质量浓度的变化以及病损区表皮生长因子受体(EGFR)的表达有无缺陷。方法选择27例在溃疡期和间隙期均成功获取唾液样本的轻型RAU患者作为RAU1组,采集33例正常人的唾液样本作为对照1组,采用酶联免疫吸附法检测两组唾液样本中EGF质量浓度。另外选择31例轻型RAU溃疡期患者在溃疡基底部剪取小块组织样本作为RAU2组,采集35例无RAU者的正常黏膜组织作为对照2组,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应检测两组组织样本内EGFR的RNA表达情况。结果RAU1组溃疡期患者唾液EGF质量浓度高于RAU1组间隙期和对照1组,而间隙期EGF质量浓度低于对照1组(P<0.05)。RAU1组和对照1组唾液EGF质量浓度在不同性别间差别不大,与年龄也没有相关性(P>0.05)。RAU2组EGFR的RNA表达强度高于对照2组,两组间有统计学差异(P<0.05)。结论RAU患者口腔溃疡的复发性可能与间隙期唾液EGF质量浓度减少有关;口腔溃疡的自愈性可能与溃疡期唾液EGF质量浓度增加和溃疡区EGFR表达增加有关。

实时荧光定量聚合酶链反应检测复发性阿弗他溃疡患者中人类疱疹病毒5型和8型的潜伏

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测轻型复发性阿弗他溃疡(RAU)患者4种样本中人类疱疹病毒5型(HHV-5)和8型(HHV-8)的潜伏情况。方法选择18例轻型RAU患者为试验组,同时选择健康者23名为对照组进行临床采样,样本包括唾液、病变区脱落细胞、病变区组织块及外周血。然后用实时荧光定量PCR检测4种样本中HHV-5和HHV-8的DNA。结果HHV-5仅在试验组患者病损区组织块样本中能检测到,而在对照组的组织块样本中没有检测到。试验组和对照组的血液和唾液样本中均有HHV-5阳性检出,但两组比较其差异无统计学意义(P>0.05);试验组和对照组的脱落细胞样本中均无HHV-5阳性检出。试验组和对照组的4种样本中HHV-8均检出阴性。结论HHV-5在RAU患者的溃疡区可能有潜伏。

JAK2-STAT3信号通路在大鼠根尖周炎中表达的相关性研究

目的:检测大鼠根尖周炎中Jak2-Stat3信号通路的表达。方法:将25只8周龄SD大鼠右下颌第一磨牙开髓,封入PBS缓冲液小棉球,进口玻璃离子暂封,调合。分别于术后0、7、14、21、28d处死后取下颌骨组织,制备石蜡切片后,采用HE染色检测根尖周炎症进展过程,免疫组织化学的方法检测Jak2、P-Jak2、Stat3、P-Stat3的表达。酶组织化学方法检测破骨细胞的表达。结果:成功建立了PBS感染的大鼠根尖周炎模型。Jak2、Stat3、PJak2和P-Stat3在正常组织中少量表达。炎症进展至14d,Jak2、P-Jak2、Stat3、P-Stat3表达均达到顶峰,明显高于对照组(P<0.05);21d时,Jak2、P-Jak2、Stat3、P-Stat3数量有一定减少,但仍高于对照组(P<0.05),28d时,Jak2、P-Jak2、Stat3、P-Stat3均明显降低,Stat3、P-Jak2和P-Stat3表达与对照组相似(P>0.05);Jak2稍高于对照组(P<0.05)。破骨细胞在7d表达增多(P<0.05),14d时达到顶峰(P<0.05),21、28d表达下降但仍高于对照组(P<0.05)。结论:Jak2/Stat3信号通路与根尖周炎症的急性期的炎症进展过程密切相关,推测其在根尖周急性炎症期骨破坏过程中发挥了重要作用。

粪肠球菌对多形核白细胞释放基质金属蛋白酶-8及凋亡影响的实验研究

目的体外研究粪肠球菌对多形核白细胞(PMNs)释放基质金属蛋白酶-8(MMP-8)及凋亡的影响。方法提取PMNs,以加入粪肠球菌悬浮液的PMNs作为实验组;加入乙酸肉豆蔻佛波醇的PMNs为阳性对照组;PMNs的PBS悬浮液为阴性对照组。培养0、20、60、120min后,ELISA法检测各时间点MMP-8的释放量。以加入粪肠球菌裂解液的PMNs为实验组,PMNs的PBS悬浮液为对照组,培养2、5、10、15h后,流式细胞分析仪检测PMNs的凋亡率。结果在0min时,实验组和阳性对照组MMP-8释放量间差异无统计学意义(P>0.01);在60、120min时,实验组MMP-8的释放量明显低于阳性对照组,二者间差异有统计学意义(P<0.01)。在2、5、10、15h,实验组凋亡率均高于对照组(P<0.01)。结论粪肠球菌作用于PMNs后,PMNs无大量释放MMP-8现象,PMNs无凋亡延迟现象。

抗菌肽对高龋患者口内变异链球菌生长的影响

[目的]研究人工合成抗菌肽KSL对高龋患者口内变异链球菌的生长抑制情况,为KSL的临床实用奠定实验基础。[方法]依据抗菌肽KSL的氨基酸序列人工合成抗菌肽KSL,采用标准培养法及生化鉴定法,分离鉴定高龋患者口内变异链球菌,测定KSL对该菌株的生长抑制情况。[结果]成功分离鉴定变异链球菌3株,KSL对临床分离变异链球菌的MIC为0.0625 mg/mL,MBC为1.0000 mg/mL,KSL对变异链球菌杀菌曲线表明应用30 min后其对变异链球菌有明显的杀菌效果。[结论]抗菌肽KSL对高龋患者口内变异链球菌有着明显的抑菌杀菌效果。

大肠杆菌密度感应缺陷株中LuxS的表达及其对生物膜形成的影响

目的：研究在大肠杆菌密度感应缺陷株中表达LuxS蛋白对于生物膜形成相关基因的影响。方法：在大肠杆菌密度感应缺陷株MDA12中表达LuxS蛋白，继而通过Real-time PCR检测菌株间生物膜形成相关基因的表达差异。结果：野生株中生物膜形成相关基因motA、motB表达量约为MDA12的2～5倍，而表达了LuxS蛋白的MDA12中该基因的表达量则为6-8倍，且差异具有统计学意义。结论：大肠杆菌密度感应缺陷株内表达LuxS，可以恢复其密度感应系统继而恢复生物膜形成相关基因的表达。

20~40nm银的体外生物安全性研究

目的：本课题组之前的实验结果提示纳米银具有强有力的杀菌作用,本实验将探讨纳米银的体外生物安全性。方法：将人牙龈成纤维细胞与0.1%、0.5%、1.0%、1.5%和2%的纳米银-PLGA载体共同培养一定的时间,利用MTT法检测人牙龈成纤维细胞的增殖情况,并在骨向诱导培养基条件下分析人牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性。结果：与对照组相比,人牙龈成纤维细胞的增殖情况在不同浓度的纳米银-PLGA组未出现明显减少,各组间也无明显差异。在骨向诱导培养条件下,人牙龈成纤维细胞表现出一定碱性磷酸酶活性,并且该活性未收到各浓度纳米银的影响。结论：本研究所采用的20~40nm银对人牙龈成纤维细胞具有良好的体外生物安全性。

小眼畸形相关转录因子及其信号通路在破骨细胞分化中的作用

背景:小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associatedtranscriptionfactor,MITF)被发现其是编码一个众所周知的转录因子家族的成员,但目前对它的分析可能仍然处于初级阶段。MITF对许多不同器官的生理学和病理学至关重要,包括眼睛、耳朵、免疫系统、黑色素瘤,特别是骨骼和皮肤。目的:文章介绍MITF基因位点的发现与克隆,综述了MITF上调与破骨细胞活性相关的基因的表达和通过细胞融合调节破骨细胞的发育,敲除MITF后抑制破骨细胞的分化以及MITF及其信号通路在破骨细胞的分化中的作用。方法:作者以“MITF、骨破坏、破骨细胞、成骨细胞、小眼畸形相关转录因子、组织蛋白酶K、核因子κB、核因子κB配体”为关键词,检索2000年至2018年中国知网数据库和PubMed数据库中相关文献,并将这些文献进行筛选与总结。结果与结论:最终纳入文献43篇。①MITF对于多种细胞系的分化是必不可少的,并且通过与谱系特异性辅因子的相互作用以及其对特定信号级联的响应而获得其特异性;②MITF在破骨细胞的分化过程中发挥了重要的作用,其能够促进骨破坏;③研究MITF在骨破坏中的作用机制以及骨微环境的改变,可以成为治疗这一系列骨破坏疾病的关键靶点。

原子力显微镜观察粪肠球菌的超微结构及生物膜的动态形成过程

目的应用原子力显微镜(AFM)观察生理状态下粪肠球菌的表面超微结构及粪肠球菌生物膜的动态形成过程。方法利用AFM观察生理状态下粪肠球菌的超微结构并进行三维成像。利用硝酸纤维素薄膜在体外构建粪肠球菌生物膜模型,用AFM观察粪肠球菌生物膜形成过程中的表面变化。结果粪肠球菌菌体呈球状,表面凹凸不平,被颗粒状物包绕。初步确定了6h粪肠球菌生物膜逐渐形成,24h生物膜维持稳定状态,观察到细菌表面局部特征的变化及细菌胞外的多聚体物质。结论应用AFM能够在生理条件下清晰地观察粪肠球菌表面超微结构及粪肠球菌生物膜的整个动态形成过程。

无汗/少汗型外胚叶发育不全家系致病基因的筛查

目的:探讨无汗/少汗型外胚叶发育不全(HED)家系的遗传方式及表型特点,并对家系致病基因进行筛查。方法:采用临床检查和家系调查的方法,对通过先证者法收集的HED家系进行遗传方式和临床表现分析。利用直接测序法对EDA、EDAR和EDARADD基因开放阅读框内外显子编码区及外显子-内含子接头区核苷酸序列进行分析。结果:收集到的家系为典型的无汗/少汗型外胚叶发育不全家系,先证者临床表现典型,毛发发育不良,头发、眉毛、睫毛稀疏;汗腺发育不良,无汗/少汗,体温随季节变化有明显改变;缺失多颗恒牙,并有乳牙滞留。家系内其他成员无明显异常表现。对EDA、EDAR和EDARADD基因开放阅读框的测序分析未找到致病突变。结论:本研究收集家系的患者临床症状明显,排除目前已知致病基因突变。

富血小板纤维蛋白对根尖牙乳头干细胞生物学性能的作用研究

目的研究富血小板纤维蛋白(platelet rich fibrin,PRF)对根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)生物学性能的作用,探讨其应用于牙髓再生治疗(regenerative endodontic treatment,RET)、促进年轻恒牙牙根继续发育的机制。方法原代分离培养SCAP,抽取静脉血获取PRF。实验按所用PRF的体积不同分为4组:1/8PRF组、1/2PRF组、1PRF组、0PRF组(对照组)。分别收集各组PRF上清液,制备条件培养基。通过MTT法检测PRF对SCAP增殖的影响;对经不同PRF条件培养基预处理的SCAP进行成骨诱导,应用Western Blot检测牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达水平,检测PRF对SCAP成牙本质或成骨分化的影响。结果在条件培养基培养3 d和5 d时,与对照组相比,实验组PRF均显著促进SCAP的增殖(P <0.05),3 d和5 d时,1/2PRF组促进SCAP增殖作用最强(P <0.05)。PRF条件培养基预处理的SCAP经成骨诱导后,高表达DSPP和DMP1(P <0.05)。结论 PRF可显著促进SCAP增殖和向成牙本质细胞分化,为PRF应用于RET奠定了生物学基础。