宫颈癌组织中Rap1GAP蛋白表达及其与HPV感染的相关性

[目的]探讨Rap1GAP蛋白在宫颈癌组织中的表达变化以及其与HPV感染之间的关系。[方法]免疫组化方法检测20例宫颈癌与20例正常宫颈组织HPV感染和Rap1GAP蛋白表达情况。[结果]HPV检出阳性率在正常宫颈组织和宫颈癌中分别为20%与75%,宫颈癌组明显高于正常宫颈组(P<0.05)。宫颈癌组的Rap1GAP蛋白表达阳性率为15%、弱阳性率为15%,二者均明显低于正常宫颈组(阳性率,55%和弱阳性率,45%)(P均<0.05)。宫颈癌组织中,HPV阳性组Rap1GAP蛋白缺失率为80%,明显高于HPV阴性组的缺失率40%(P<0.05),且二者之间呈正相关(r=0.553,P<0.05)。[结论]宫颈癌组织Rap1GAP蛋白表达下调或缺失可能与HPV感染有关。

Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内定位的影响

目的观察Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内定位的影响。方法对绿色荧光蛋白标记的Rap1GAP野生体编码第90和99位氨基酸的核苷酸进行定点突变,制备绿色荧光蛋白标记的Rap1GAP二聚体缺失突变体M90和M99。将Rap1GAP野生体及二聚体缺失突变体单独或者分别与活化型Gα共转染HEK293细胞,在荧光显微镜下观察野生体和二聚体缺失突变体在细胞内的分布情况。结果野生型Rap1GAP与二聚体缺失突变体Rap1GAP分别单独转染HEK293细胞时,野生型和突变体Rap1GAP均弥漫分布胞质内;当野生型与突变体Rap1GAP分别与活化型Gα共转染HEK293细胞时,野生型和突变体Rap1GAP均主要分布在细胞膜上。结论Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内的定位没有影响。

肿瘤转移的分子生物学机制

恶性肿瘤不仅在原发部位浸润性生长,累及邻近组织,而且常通过多种途径扩散到其他部位,生成同样类型的肿瘤。肿瘤转移是恶性肿瘤的特征之一,也是导致肿瘤患者死亡的主要原因。恶性肿瘤转移的分子生物学机制可概括为5部分:黏附、降解、运动、血管生成和基因调控。

内皮抑素及其抑制肿瘤血管新生的机制

研究开发针对肿瘤血管生成的抗肿瘤药物是限制肿瘤生长和防止其转移的有效策略 ,内皮抑素是迄今疗效较好的血管生成抑制剂。关于内皮抑素抑制肿瘤血管生成的机制主要有以下几个方面 :干扰血管生成因子作用 ;抑制血管内皮细胞增殖和 (或 )诱导其凋亡 ;阻断内皮细胞表面粘附因子作用。通过抑制肿瘤新生血管生成 。

沉默E6相关蛋白对人乳头瘤病毒阴性宫颈癌细胞中p53蛋白表达水平的影响

目的探讨沉默E6相关蛋白(E6-associated protein,E6AP)对人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)阴性宫颈癌细胞(C33A)中p53蛋白表达水平的影响。方法在LipofectamineTM2000转染试剂的介导下,将特异性沉默E6AP的siRNA序列(siE6AP)及沉默对照无序siRNA序列(siControl)分别转染C33A细胞。Western blot法检测siRNA对E6AP的沉默效果及细胞中p53和cleaved-caspase-3蛋白的表达水平。结果siE6AP组C33A细胞中E6AP蛋白表达水平显著低于siControl组(t=-4.597,P<0.05)。siE6AP组C33A细胞中p53和cleaved-caspase-3蛋白表达水平均显著高于siControl组(t分别为4.533和7.099,P均<0.05)。结论沉默E6AP可显著提高C33A细胞中p53蛋白的表达水平,表明沉默E6AP可能恢复C33A细胞中p53的活性和功能。

蛋白酶体抑制剂MG132对宫颈癌SiHa细胞中p53蛋白泛素化降解的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人宫颈癌SiHa细胞中p53蛋白泛素化降解的影响。方法采用MTT法筛选的不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132处理SiHa细胞,通过Western blot法测定细胞内p53蛋白相对含量(以GAPDH为内参),同时设未处理组(未加入MG132)。结果20μmol/L为不影响SiHa细胞活性的MG132最大浓度,因此选用低于该浓度的1、3和5μmol/L MG132处理SiHa细胞。经1、3和5μmol/L MG132处理的SiHa细胞中p53蛋白相对表达量分别为1.210±0.252、1.057±0.130和1.475±0.210,均明显高于未处理组(0.034±0.026),差异均有统计学意义(P<0.001),且MG132对p53降解的抑制作用呈剂量依赖性(P<0.01)。结论蛋白酶体抑制剂MG132可抑制SiHa细胞内p53蛋白泛素化降解,且呈剂量依赖性。