临床血液学检验技术线上教学实践与思考

临床血液学检验技术是医学检验技术专业的主干必修课。文章总结了该课程2020年和2022年春季学期两次线上教学具体实施情况,并通过调查问卷对线上教学效果进行评估,探讨了线上教学存在的问题并提出了对策和建议。这将为今后的教学改革提供参考。

Bmi-1介导的K562/ADR细胞多药耐药机制

目的:观察Bmi-1基因沉默对白血病耐药细胞株K562/ADR耐药性的影响并初步探讨其机制。方法:将2种序列的Bmi-1小干扰RNA SiRNA转染到耐药细胞K562/ADR,检测Bmi-1基因m RNA和蛋白的表达以确定转染效果。检测Bmi-1基因沉默后耐药蛋白P-gp及其编码基因MDR1的表达情况,并采用流式细胞术检测细胞内阿霉素蓄积情况。检测Bmi-1基因沉默后NF-κB蛋白的表达变化;应用NF-κB抑制剂PDTC处理K562/ADR细胞抑制NF-κB活性后,检测P-gp蛋白的表达及其功能的变化。检测Bmi-1基因沉默后PTEN、AKT和p-AKT蛋白表达的变化。应用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理K562/ADR细胞抑制p-AKT表达后,检测NF-κB和P-gp蛋白的表达。应用PTEN抑制剂BPV(phen)处理Bmi-1基因沉默后的细胞,检测AKT、p-AKT、NF-κB和P-gp蛋白的表达。以上mRNA表达用RT-PCR法检测,蛋白表达用Western blot法检测。结果:在mRNA水平和蛋白水平2种序列的小干扰RNA均使K562/ADR细胞Bmi-1基因表达降低。MDR1/P-gp在Bmi-1 siRNA干扰细胞中的表达明显低于在K562/ADR细胞的表达(P<0.05);干扰后细胞内阿霉素蓄积增多。Bmi-1基因沉默后,细胞NF-κB活性降低;NF-κB抑制剂抑制NF-κB活性后,K562/ADR细胞P-gp蛋白表达及药物泵出功能被抑制。Bmi-1基因沉默后PTEN蛋白表达增高,而p-AKT蛋白表达明显降低(P<0.05)。PI3K/AKT通路抑制剂LY294002抑制p-AKT表达后,NF-κB活性和P-gp蛋白表达明显下降(P<0.05)。PTEN抑制剂BPV(phen)处理Bmi-1基因沉默细胞后,NF-κB活性和P-gp蛋白表达得到重塑。结论:Bmi-1在MDR1/P-gp介导的K562/ADR细胞多药耐药中起关键作用,这种作用可能是通过激活PTEN/AKT途径调控NF-κB完成。

Bmi-1基因表达对THP-1细胞化疗敏感性的影响

目的:研究Bmi-1表达对急性单核细胞白血病细胞THP-1化疗敏感性的影响,及其相关作用机制。方法:以瞬时转染法将p Genesil-2-Bmi-11 si RNA、p-MSCV-Bmi-1分别转入THP-1细胞中降低、增强Bmi-1的表达。用PCR和Western blot法验证Bmi-1 m RNA和蛋白的表达;MTT法检测喜树碱(CPT)对THP-1细胞增殖及Bmi-1表达对THP-1细胞化疗敏感性的影响;采用免疫荧光法检测细胞中DNA双链断裂标志物γ-H2AX的表达;流式细胞术检测线粒体膜电位及凋亡情况;Western blot法检测Cytochrome C、Caspase 3、Bax和BCL-2蛋白的表达。结果:沉默Bmi-1能够抑制THP-1细胞的增殖并增强THP-1细胞对CPT的敏感性,而Bmi-1过表达促进细胞增殖并减弱THP-1细胞对CPT的敏感性;沉默Bmi-1能够增强CPT诱导的DNA双链断裂,降低线粒体膜电位并促进CPT诱导的细胞凋亡,Bmi-1基因过表达减弱了CPT诱导的DNA双链断裂,线粒体膜电位升高,CPT诱导的细胞凋亡率明显减少。结论:Bmi-1表达能够改变THP-1细胞对CPT的敏感性,其机制可能涉及DNA双链断裂及线粒体凋亡。

Bmi-1-siRNA通过PTEN/pAKT通路调控K562细胞体内外的增殖能力

目的:观察Bmi-1基因沉默对白血病K562细胞体内外增殖能力的影响并初步探究二者之间的分子机制是否与PTEN/pAKT通路有关。方法:将Bmi-1小干扰RNA(siRNA)序列转染到K562细胞中降低其Bmi-1的表达;应用MTT比色法和软琼脂集落形成实验检测Bmi-1-siRNA对K562细胞体外增殖的影响;裸鼠皮下接种各组细胞,观察Bmi-1-siRNA对K562细胞在裸鼠体内的致瘤能力的影响;应用Western blot检测Bmi-1、PTEN、p-AKT等蛋白的表达。结果:Bmi-1-siRNA有效沉默了Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达;沉默Bmi-1基因的表达能够抑制K562细胞的增殖活性、集落形成及裸鼠成瘤能力;Bmi-1基因沉默后,干扰组PTEN表达明显升高,而p-AKT活性明显下降;p-AKT抑制剂LY294002处理K562细胞后,p-AKT表达降低,集落形成及裸鼠成瘤能力相比未处理K562细胞降低;PTEN抑制剂Bpv处理K562-S1细胞后,PTEN的表达降低,而p-AKT、集落形成及裸鼠成瘤能力得以重塑。结论:Bmi-1基因有可能参与了对白血病细胞K562的体内外增殖能力的调控,PTEN/pAKT信号通路可能是介导这一调控过程的分子机制之一。

沉默Bmi-1表达对K562/ADM细胞体内外增殖能力的影响

目的:观察沉默Bmi-1表达对慢性髓系白血病阿霉素耐药细胞株-K562/ADM细胞增殖的影响并初步探讨其分子机制。方法:将Bmi-1小干扰RNA(siRNA)序列转染到K562/ADM细胞中降低其Bmi-1的表达;采用MTT法、软琼脂集落形成实验、裸鼠成瘤实验检测沉默Bmi-1表达对K562/ADM细胞体内外增殖能力的影响;应用Western blot检测Bmi-1、PTEN、p-AKT等蛋白表达;免疫组织化学实验分析Bmi-1和Ki-67的表达情况。结果:Bmi-1基因的沉默能够抑制K562/ADM细胞的增殖活性、集落形成及裸鼠成瘤能力;Bmi-1基因沉默后,干扰组PTEN表达明显升高,而p-AKT活性明显下降;p-AKT抑制剂-LY294002处理K562/ADM细胞后,p-AKT表达降低,集落形成及裸鼠成瘤能力相比K562/ADM细胞降低;PTEN抑制剂-Bpv处理K562/ADM-S1细胞后,PTEN的表达降低,而p-AKT表达、集落形成及裸鼠成瘤能力得以重塑;Bmi-1基因沉默使得肿瘤组织中Bmi-1与Ki-67表达均下降。结论:Bmi-1基因有可能参与了对K562/ADM的体内外增殖能力的调控,PTEN/pAKT信号通路可能涉及其中。