镉所致肾毒性及氧化性损害机制的研究

目的探讨氯化镉(CdCl2)引起肾脏毒性的氧化性损害机制,为防制镉危害提供实验依据。方法雄性SD大鼠随机分为4组,每组4只,体重200～260g。对照组腹腔内注射生理盐水,染镉组连续3d分别腹腔注射1.25、2.5和5mg/kg的CdCl2溶液。测定体重变化、肾脏系数、血清尿素氮(BUN)和肾皮质脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织形态学,免疫组化的方法检测肾组织中8-羟基脱氧鸟苷(8-OhdG)的表达。结果CdCl2(2.5mg/kg,5mg/kg)可引起明显的肾脏毒性。表现为体重降低,BUN水平升高,肾脏系数升高;组织形态学观察可见肾毒性急性肾小管损害表现。肾皮质匀浆MDA水平升高(P<0.05)。免疫组化结果显示各实验组大鼠肾组织中可检出氧化损伤标志物8-OhdG。结论CdCl2所致大鼠氧化性损伤可能是其肾脏毒性的机制之一。

氯丁二烯所致接触工人不良健康效应的生物标记研究

本研究对６８例氯丁二烯（ＣＢＤ）接触工人和４９例健康人进行了调查。结果显示，ＣＢＤ接触组血清中甘胆酸（ＣＧ）含量明显升高，而血清中丙氨酸转氨酶、硫酸锌浊度试验和麝香草酚浊度试验无明显改变；全血谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ—Ｐｘ）活性和血清铜蓝蛋白（ＣＰ）含量明显降低，这与动物实验结果基本一致，即ＣＢＤ在体内生成的活性中间物可导致氧化性损害。血清ＣＧ含量、全血ＧＳＨ—ｐｘ活性及血清ＣＰ可能是接触ＣＢＤ所致不良健康效应的生物标记。

表皮生长因子增高Hela细胞对顺铂敏感性作用的研究

0 1、1、10 μg/L表皮生长因子 (EGF) 2 4h预处理及同时处理均增高Hela细胞对顺铂敏感性尤以EGF预处理更明显 ;10 μg/LEGF 2 4h预处理可增高Hela细胞对铂 (Pt)的摄入速率。

肾脏谷胱甘肽代谢系统及其毒理学意义

谷胱甘肽 (GSH)主要在肝脏合成 ,经肠肝和肾肝循环运送到肾脏 ,经肾小球滤过后 ,可被位于肾小管细胞刷状缘的降解酶水解为氨基酸 ,重吸收后再合成GSH ,但主要是在肾小管细胞基底膜侧经载体介导以完整的三肽形式吸收。在细胞内有两个重要的GSH池 ,一个是细胞浆 ,一个是线粒体 ,线粒体不能合成GSH ,细胞浆GSH通过线粒体内膜的有机阴离子载体转运到线粒体内 ,在保护细胞免受氧化损伤中起重要作用。肾近曲小管细胞和远曲小管细胞对氧化损伤的敏感性不同 ,与细胞内GSH的含量不同和线粒体内膜的阴离子载体对GSH的转运能力的不同有关。

肾乐预防顺铂所致急性肾衰的初步研究

肾乐预防顺铂所致急性肾衰的初步研究刘晓芳１叶建新１仲来福１尤玉琴２１．大连医科大学毒理研究室（１１６０２７）２．广州空军总医院肝病研究所顺铂系临床上广泛使用的广谱抗肿瘤药物，顺铂的肾毒性是限制其临床使用剂量的主要毒副作用［１，２］。寻找预防和（或）治...

表皮生长因子提高化疗作用的体外实验研究

目的 探讨表皮生长因子 (EGF)在肿瘤化疗中的可能作用。方法 采用体外研究的方法观察了不同浓度EGF处理下的人宫颈癌细胞 (Hela细胞 )对顺铂敏感性的变化 ,并对其机理进行初步研究。结果 在顺铂给药前 2 4h以EGF预先处理及与顺铂给药同时处理均提高Hela细胞对顺铂的敏感性 ,以EGF预先处理更明显 ;在EGF作用下 ,Hela细胞还原噻唑蓝的量增加 ,但10 μg/LEGF处理Hela细胞在 2 4h、48h后 ,未见细胞DNA、蛋白质、乳酸脱氢酶 (LDH )含量及细胞数量改变。 结论 EGF可提高Hela细胞还原噻唑蓝的能力 ,噻唑蓝还原量增高不是细胞增殖所致 ,而是线粒体脱氢酶活性相对增高所致 ,这种改变可能是细胞对顺铂敏感性提高的原因。

姜黄素与氟尿嘧啶抗人结肠癌细胞株HT-29增殖的协调作用研究

目的:检测姜黄素能否增强氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)抗结肠癌细胞的增殖作用,并探讨其与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)蛋白表达的关系。方法:应用中位效应原理和联合作用指数法来定量姜黄素与FU的联合作用。应用Westernblot分析联合应用两种药物之后对于COX-2蛋白表达的影响。结果:姜黄素和FU的半数生长抑制率(IC50)分别为15.9±1.96和17.3±1.85μmol/L。当姜黄素与FU联合应用时,在较高的作用水平可以定量地观察到对HT-29细胞的协同抑制作用。并且这种协同作用随COX-2蛋白表达水平下调。结论:姜黄素可以增强FU的化学治疗效果,在结肠癌的临床治疗方面联合应用这两种药物可能具有实际意义。

顺铂对蛋白酶体抑制作用的研究

目的 研究顺铂对蛋白酶体的抑制作用。方法 采用蛋白酶体特异性底物S LLVY AMC、B LRR AMC及Z LLE AMC观察了顺铂对纯化的人 2 0S蛋白酶体及CCD 110 3KidTr细胞内蛋白酶体活力的影响 ,同时分析了受蛋白酶体降解的p5 3蛋白在蛋白质及mRNA水平的表达。结果 顺铂对纯化的人 2 0S蛋白酶体具有明显的抑制作用 ,对 3种酶活力抑制作用的半数抑制浓度 (IC50 )分别为 3 2 17(S LLVY AMC)、3 7 96(B LRR AMC)和 3 7 81μg ml(Z LLE AMC)。在 3 0和 60μg ml顺铂作用下 ,CCD 110 3KidTr细胞内蛋白酶体活力也受到显著抑制。在 3 0 μg ml顺铂作用下 ,p5 3mRNA表达在 3、6、12和 2 4h未见明显改变 ,而p5 3蛋白质水平在 3、6h明显增高。结论 顺铂对蛋白酶体活力有抑制作用 ,但对蛋白酶体3种酶活力的抑制没有特异性。顺铂作用CCD 110 3KidTr细胞后p5 3蛋白质表达增高 ,可能与蛋白酶体抑制有关。

马兜铃酸致DNA损伤的体外研究

目的研究马兜铃酸(AA)体外致DNA损伤作用。方法采用噻唑蓝比色法比较AA对人胚肾293细胞与转染核苷酸切除修复基因的ERCC1-XPF-293细胞毒性差异;采用单细胞凝胶电泳试验研究AA致293细胞DNA单链断裂作用;以EB荧光法研究AA致牛胸腺DNA交联作用及其代谢活化。结果AA对人胚肾293细胞及ERCC1-XPF-293细胞的半数抑制浓度分别为480.1和661.8μmol/L(P<0.05);AA在60μmol/L即具有致DNA单链断裂作用;加大鼠肝S9条件下AA致牛胸腺DNA交联,同时加入CYP1A抑制剂α-萘黄酮降低DNA交联率。结论AA所致DNA损伤作用是其细胞毒性的重要机制之一。

硼酸对脂多糖诱导的人单核细胞产生TNF-α的影响

目的研究硼酸对脂多糖(LPS)激活后的人单核细胞THP-1产生TNF-α的影响。方法采用ELISA法检测硼酸对LPS诱导的THP-1分泌TNF-α的影响;采用RT-PCR方法检测硼酸对LPS激活的THP-1表达TNF-α mRNA的影响。结果LPS(1μg/mL)处理THP-1细胞3h后,THP-1细胞TNF-α mRNA表达升高,培养液中TNF-α的水平也升高,硼酸预处理24h后再给予LPS,则TNF-α的分泌和mRNA表达都呈剂量依赖关系的下降,25μmol/L硼酸组与LPS组相比有显著性差异(P<0.05)。结论硼酸能抑制LPS诱导的THP-1细胞TNF-α mRNA的表达和分泌,提示硼酸可能通过对炎症因子TNF-α的负性调控而发挥其抗炎作用。

维生素A对小鼠致畸作用剂量的影响

目的 观察维生素A的胚胎毒性和致畸作用 ,以确定VA 的致畸剂量。方法 在小鼠胚胎器官形成期 ,经口给予孕鼠维生素A(VA) 1 5 g/kg、2 0 g/kg、2 7g/kg ,于孕后第 18天剖腹取仔 ,观察其活胎外观有无畸形 ,并对胎仔、骨骼及内脏进行检查。以生理盐水作为对照组。结果 高剂量组交配成功率明显下降 ,第 18天处死前孕鼠体重无明显变化 ,但中剂量组母鼠增重明显减少 (P <0 0 5 ) ,高剂量组母鼠增重高于中剂量组 ,低于阴性对照组。仔鼠统计指标中 ,吸收胎率、死胎率显著高于阴性对照组 (P <0 0 5 )。各剂量组间吸收胎率也呈显著变化 (P <0 0 5 )。VA3个剂量组的活胎外观畸形率依次增高 ,且高剂量组与阴性对照组比有显著性 (P <0 0 5 ) ,各组的骨骼畸形率均显著高于阴性对照组 (P <0 0 5 ) ,并且各组间也有显著变化 (P <0 0 5 )。内脏检查末见畸形。结论 VA 作为孕鼠致畸实验的阳性对照品 ,以经口给予 2mg为宜。

姜黄素对顺铂所致大鼠肾毒性的防护作用

目的研究姜黄素(CMN)对顺铂(CDDP)所致肾损害的防护作用,并探讨其可能机制。方法将42只大鼠按体重随机分6组,分别为对照组、CMN组、CDDP组、CMN(204、0和80 mg/kg)+CDDP组。CMN连续给予大鼠灌胃3 d,第2天灌胃后1 h腹腔注射CDDP(5.5 mg/kg)。CDDP处理后,分别在第1、3和5天采血,测定血清尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)。第5天采血后处死动物,测定肾脏系数、肾皮质匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力以及肾组织铂(Pt)含量等。同时利用体外实验观察对抗增殖作用的影响。结果CMN预处理可减轻CDDP引起的肾脏系数升高及BUN、CRE水平升高;能抑制CDDP引起的MDA形成增高;并能提升CDDP引起的GSH含量和GSH-Px活力下降。CMN低剂量的上述作用明显(P<0.05或P<0.01)。CMN防护组与CDDP组的人卵巢癌细胞系和膀胱癌细胞系的半数抑制浓度差异无显著性。结论CMN经口给予能防护CDDP所致的肾损害,其机制可能与其抗氧化作用和清除自由基活性有密切关系。较高剂量CMN未见防护CDDP所致肾毒性的作用,其原因可能与其助氧化作用有关。CMN对CDDP抗肿瘤细胞增殖作用无明显影响。

关木通水煎剂致大鼠肾毒性及DNA损伤机制

目的研究关木通水煎剂(AMK)致大鼠肾毒性及DNA损伤机制。方法用健康雄性SD大鼠经灌胃AMK(50 g/kg),并与对照组比较。观察指标有:肾组织形态学变化、体重、肾脏系数、血尿素氮(BUN)及肾皮质丙二醛(MDA)含量;采用彗星试验检测肾组织中的DNA链断裂程度;利用免疫组化检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)表达情况。结果给药组动物的肾组织形态学变化、体重、肾脏系数、BUN及MDA含量等各项观察指标均有明显改变,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。彗星试验结果显示,AMK引起明显的DNA迁移,其中尾矩变化最明显。对照组、给药3、5及7 d组肾组织的彗星尾矩分别为1.52±1.10、12.77±16.05、97.97±17.85及111.77±16.65。给药组肾组织8-OHdG表达高于对照组。结论AMK经口给药50 g/kg连续3 d,即可引起肾损伤。AMK可致肾组织活性氧增高,进而引起DNA氧化性损伤,这可能与AMK的肾毒性有关。

姜黄素诱导人结肠癌细胞凋亡作用

目的探讨姜黄素对人的结肠癌细胞系(HT-29)体外增殖及凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定姜黄素在不同浓度对HT-29细胞的抑制作用;利用流式分光光度技术、荧光显微镜技术和电镜技术,观察姜黄素对HT-29细胞诱发凋亡及细胞周期的变化。结果姜黄素可明显抑制HT-29细胞的生长,其抑制率与药物浓度成剂量依赖关系,半数抑制浓度为(15.9±1.96)μmol/L。流式细胞分析仪结果表明,姜黄素能使HT-29在加药后24h出现凋亡峰;荧光显微镜下可见姜黄素处理组织细胞核呈现深染、致密的颗粒块状荧光。电镜观察可见姜黄素能使细胞发生凋亡,出现核边集及染色质浓缩成块状。结论姜黄素可抑制大肠癌细胞的生长,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。

大蒜素对顺铂所致大鼠肾损害的预防作用

目的 研究大蒜素对顺铂 (CDDP)所致肾损害的预防作用及其可能机制。方法 将SD大鼠按体重随机分 3组 ,分别为对照组 (生理盐水组 )、CDDP组、CDDP +大蒜素组。处理后 ,分别在 1,3 ,5d测体重、肾脏系数、血清尿素氮 (BUN)、肾皮质匀浆丙二醛 (MDA)以及超氧化物歧化酶 (SOD)活性等。结果 大蒜素预处理可减轻CDDP引起的体重降低、肾脏系数升高及BUN水平升高 ;能抑制CDDP引起的MDA形成增高 ;并能抑制CDDP引起的SOD活性下降。结论 大蒜素经口给予能预防CDDP所致的肾损害 ,其机制可能与其强大的抗氧化和清除自由基活性有密切关系。

顺铂对大鼠肝细胞毒性及谷胱甘肽的保护作用

目的 探讨顺铂对原代培养的大鼠肝细胞的毒性及谷胱甘肽对其影响。方法 从大鼠的肝脏分离培养肝实质细胞接种于 96孔培养板 ,培养 3h后加入一系列浓度的顺铂 ,或在加入顺铂前 16和 4h ,分别加入谷胱甘肽(glutathione ,GSH)合成抑制剂DL -buthionine - (S ,R) -sulfoximine(BSO)和GSH的前体物半胱氨酸 ,继续培养 ,分别在 8,2 4和 4 8h 3个时间点用噻唑蓝 (MTT)方法检测细胞存活率。结果 顺铂对大鼠肝细胞有明显的毒性 ,在不同的时间点有各自的剂量 -反应关系 ,顺铂对大鼠肝细胞在 8,2 4和 4 8h 3个时间点半数抑制浓度 (IC50 )分别为 1 13,0 2 1和 0 15mmol/L ;BSO能使 3组IC50 均降低 ,分别为 0 0 17,0 0 11和 0 0 13mmol/L ,而半胱氨酸则可使 3组IC50均升高 ,均大于 5mmol/L。结论 顺铂对大鼠肝细胞具有明显的毒性作用 ,且呈时间和剂量依赖关系 ;BSO可增强顺铂的肝细胞毒性 ,而半胱氨酸对顺铂引起的肝细胞毒性有保护作用 ,提示细胞内GSH对顺铂所致肝细胞毒性有保护作用。