医学本科留学生的生物化学实验教学

对来华学习医学的外籍留学生本科教育中,生物化学实验教学具有重要作用。笔者在留学生的生物化学实验带教过程中,发现留学生与带教老师之间最重要的是相互之间的理解与沟通;在课堂上多数的留学生能积极地参与实验操作;留学生们认真对待实验报告,而且实验报告完成得也非常好。在此,对留学生生物化学实验带教的过程中发现的问题和观察到的现象进行总结,以期与其他的参与此类课程的同行们进行探讨和交流,从而提高留学生生物化学实验的教学质量。

蛇毒L-氨基酸氧化酶的生物学作用

蛇毒(snake venom,SV)是天然的最丰富的蛋白(酶)源之一,而L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase,LAAO)是SV的主要蛋白(酶)组成成份,也是SV重要的活性和毒性蛋白成份,其生物学活性多样。近年来的研究表明,SV-LAAOs具有明显的影响血小板聚集、诱导细胞凋亡、细胞毒性、抑菌活性及抗病毒/HIV活性等生物功能。本文简述了SV-LAAO的酶学和结构特性,综述了SV-LAAO以上生物学作用及其相关作用机制,以期为今后深入研究SV-LAAO提供参考。

刺参甘露糖结合凝集素的原核表达、纯化及生物活性分析

为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(AJ-MBL)的功能及提高刺参自身免疫力,对AJ-MBL基因的CDS区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性。采用RT-PCR法扩增AJ-MBL基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其CDS区498 bp片段克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组质粒pET-AJ-MBL。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经IPTG诱导表达出分子量约17 ku的融合蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,用Ni2+离子亲和柱纯化。结果显示,获得高表达量的重组纯化蛋白。纯化的17 ku AJ-MBL进行红细胞凝集试验检测其生物学活性。凝集试验结果显示,AJ-MBL凝集最小浓度为10μg/mL。本实验成功构建了AJ-MBL原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了17 ku AJ-MBL蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性。

细菌生物膜耐药机制与相关感染的治疗

在自然界、某些工业环境、人和动物体内外．绝大多数细菌是附着在有生命或无生命物体的表面，以生物膜（biofilm，BF）方式生长，而不是以浮游（planktonic）方式生长。细菌生物膜（bacterial biofflm）是细菌在生长过程中为了适应生存环境而形成的一种与浮游细胞（planktonic cell）相对应的存在形式．以生物膜方式和浮游方式生长的同一菌株具有不同的特性嘲．生物膜由细菌及其所分泌的胞外多聚物组成，其主要组成成分为多达97％的水以及溶于其中的各种多糖蛋白复合物。

大连刺参体腔液甘露糖结合凝集素序列的鉴定及分析

根据NCBI提交的刺参体腔液(Apostichopus japonicus)甘露糖结合凝集素(Mannan-binding lectins,MBLs)序列(AY625513)设计引物,抽取刺参体腔液进行总RNA提取,采用RT-PCR技术,获得498 bp目的片段。通过克隆、测序确定得到刺参MBLs序列。将得到序列进行核苷酸和氨基酸序列比对,鉴定了大连刺参MBLs序列,并为我国不同区域刺参的进一步分类提供了科学的分子水平依据。

中国两性生殖卤虫同工酶基因的表达及分类地位

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法，对中国１１个不同地理品系两性生殖卤虫的１０种同工酶的基因表达情况和各品系卤虫的分类地位进行了研究。分析了编码１０种同工酶的２１个座位，４６个等位基因。实验和分析结果表明中国两性生殖卤虫各品系均属于Ａ．ｓｉｎｉｃａ，而不属于Ａ．ｕｒｍｉａｎａ。１０种同工酶中有７种酶为多态酶。ＮＬ、ＨＪＱ、ＳＢ品系为Ａ．ｓｉｎｉｃａ中较为原始的种类，而Ａ．ｕｒｍｉａｎａ在中国两性生殖卤虫的起源过程中具有重要作用。通过对Ａ．ｓｉｎｉｃａ的基因表达情况的分析和与其它五大两性种卤虫同工酶基因表达情况进行比较可以说明Ａ．ｓｉｎｉｃａ是由旧大陆古老两性生殖卤虫品系进化而来，与伊朗的Ａ．ｕｒｍｉａｎａ亲缘关系较近。

白眉蝮蛇去整合素Adinbitor对Akt信号转导通路及对SSMC7721细胞增殖、迁移和凋亡的影响

研究白眉蝮蛇去整合素adinbitor对蛋白激酶B(Akt)通路信号分子的影响及对SSMC7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响.采用MTT法检测adinbitor对SSMC7721细胞增殖的作用;Hoechst33258试剂盒检测adinbitor对SSMC7721凋亡的影响;Transwell检测adinbitor对SSMC7721细胞迁移的作用;Western印迹检测adinbitor对信号分子Akt及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、核因子κB(NF-κB)的抑制蛋白IκB-α及NF-κBp65的影响;分光光度法检测其对半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3)活性的影响.结果显示,adinbitor可显著抑制SSMC7721细胞的迁移和增殖(与对照组比较,P<0.05),促进凋亡.在浓度梯度adinbitor作用下,Akt表达量基本不变,但其磷酸化受到抑制.细胞浆内IκB-α表达增加,细胞核内NF-κBp65表达减少,caspase-3活化倍数平均在2.24～3.85之间,以上作用均呈现剂量依赖性.结果说明,adinbitor可通过抑制Akt相关信号转导分子的作用而抑制SSMC7721细胞增殖和迁移,并促进其凋亡.

免疫球蛋白糖链结构异常和自身免疫性疾病

免疫球蛋白在人体体液免疫中发挥巨大作用 ,而其均为糖蛋白 .免疫球蛋白中与蛋白质相连的寡糖链结构及组成对其功能有很大影响 ,当寡糖链糖基化异常时 ,可导致一些自身免疫性疾病 .从IgA肾病和类风湿性关节炎的结构基础、分子机制、酶学基础、临床意义等方面对这两类自身免疫性疾病的发病机制与糖基化异常之间的密切相关性予以详细论述 ,为这两类疾病在临床上建立一种特异、灵敏的血清学检测方法提供了理论基础 ,开辟了一条新途径 .

中国4个两性生殖卤虫品系的ISSR指纹分析

根据微卫星DNA序列设计了10种ISSR引物,对中国4个两性生殖卤虫品系的亲缘关系进行了分析.用10种ISSR引物对卤虫基因组DNA进行扩增,共获得188条清晰稳定的条带,75个基因座位,其中有99条多态性片段,53个多态性座位,片段长度在2000～150bp之间.聚类分析结果表明:3个内蒙品系卤虫亲缘关系较近,当遗传相似系数为0.5333时,明显把来自内蒙古和西藏的卤虫分为2个类群.

墨旱莲乙醇提取物动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成的影响

目的选择离体实验中对黑色素合成的关键酶—酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)有激活作用的墨旱莲(旱莲草),研究其动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成及相关基因犤TYR、TYR相关蛋白(TRP-1/2)mRNA犦表达的影响。方法以棕色豚鼠为动物模型,用Schmorl法染色,计数含黑素的细胞;用多巴(DOPA)-氧化酶染色,计算每100个基底细胞中DOPA阳性细胞数。培养的小鼠B16黑素瘤细胞以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、氢氧化钠(NaOH)法和体外氧化DOPA反应方法分别测定细胞的增殖活性、黑素生成量及TYR活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TYR及其TRP-1/2基因的表达。结果墨旱莲乙醇提取物可使豚鼠表皮基底层中含黑素颗粒细胞增多,使豚鼠表皮内DOPA阳性细胞增多(P<0.05);具有促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及TYR活性作用(P<0.05),对细胞TYR基因有上调作用,而对TRP-1/2mRNA的表达无明显作用。结论墨旱莲乙醇提取物具有促进黑素合成及上调酪氨酸酶基因表达的作用,对白癜风色素恢复有较好应用和开发的前景。

蛋白激酶B及其在磷脂酰肌醇3-激酶介导的信号转导中的作用

蛋白激酶B(PKB)是原癌基因c akt的表达产物 ,它参与由生长因子激活的经磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI3K)介导的信号转导过程。与许多蛋白激酶相似 ,PKB分子具有一特殊的AH/PH结构域 (AH/PHdomain) ,后者能介导信号分子间的相互作用。PKB是PI3K直接的靶蛋白。PI3K产生的脂类第二信使PI 3,4, P2 和PI 3,4,5 P3等均能与PKB和磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 (PDK)的AH/PH结构域结合 ,使二者转位于质膜上并活化。PDK也能使PKB磷酸化而激活 ,激活的PKB又进一步激活抗细胞凋亡机制、葡萄糖代谢 (糖原合成、糖酵解及葡萄糖的摄取 )及蛋白质合成等过程 。

L-选择蛋白可能介导小鼠肝癌HCa-F细胞经淋巴道转移的研究

目的 观察L 选择蛋白是否介导小鼠肝癌HCa F细胞与淋巴结黏附 ,探讨HCa F细胞特异性向周围淋巴结转移的分子机制。 方法 应用免疫细胞化学方法验证小鼠肝癌HCa F细胞为非淋巴细胞来源 ;用免疫印迹分析、RT PCR及流式细胞术检测L 选择蛋白在HCa F细胞的表达 ;并用L 选择蛋白的抗体抑制HCa F细胞与冰冻淋巴结切片间的黏附实验 (Stamper Woodruffmethod)检测L 选择蛋白的功能。 结果 HCa F细胞为非淋巴细胞来源的肝癌细胞 ,在其表面有L 选择蛋白的表达 ,且HCa F细胞与淋巴结之间的黏附可被L 选择蛋白的抗体抑制。结论 非淋巴细胞来源的HCa F细胞表面表达功能性L 选择蛋白分子 ,并可协助其与淋巴结黏附 ,从而可能介导HCa F细胞向淋巴道转移。

糖原磷酸化酶同工酶BB测定方法的建立及其在急性冠脉综合征诊治中的价值

[目的]分离纯化糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB), 建立血清GPBB定量测定方法,探讨其在急性冠脉综合征早期诊断及治疗中的价值.[方法] 应用纯化GPBB抗原及其抗体建立GPBB定量测定方法.对34例健康人、28例不稳定心绞痛(UAP)患者和29例急性心肌梗死(AMI)患者分别进行血清GPBB、CK、CK-MB及cTnI测定.[结果] GPBB被纯化100倍,比活性384 μmol/mg*min-1,回收率28%.建立了GPBB定量测定方法,确定抗原检测线性范围为0.3～20 ng.在AMI发作6 h内,患者血清中(n=26)GPBB浓度超过正常上限值7.4 μg/L.GPBB诊断灵敏度是89.7%,明显高于CK、CK-MB(24.1%,20.8%,P<0.01),与cTnI相当.AMI患者血清GPBB峰值水平(66.38±27.41μg/L)明显高于健康人(2.57±1.61) μg/L,P<0.01.28例UAP患者中21例血清GPBB升高≥7.4 μg/L,其均值是(23.2±14.2) μg/L,明显高于健康人和稳定心绞痛患者血清GPBB水平(P< 0.01),与cTnI诊断阳性率相似,而UAP患者血清中CK、CK-MB均无明显升高.其中GPBB升高组 (≥7.4 μg/L)4周内发生心性事件远高于GPBB<7.4 μg/L组(47.6%,14.3%,P<0.01).AMI患者血清GPBB到达峰值时间早于CK和CKMB达到峰值时间.[结论]GPBB是AMI发作后6 h内敏感特异的生化指标,对判断UAP预后有一定的临床价值.

肝再生的调控及原癌基因表达

肝脏再生过程中受到多种体液因素的调控。肝细胞生长因子（ＨＧＦ）、肝刺激因子（ＨＳＳ）等对肝细胞有促分裂作用；转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）等则具有抑制作用。此外，肝再生还需要去甲肾上腺素（ＮＥ）、胰岛素等辅助分裂原的存在，共同调节肝再生。肝细胞分裂增殖与原癌基因表达密切相关。肝细胞从静息期进入细胞周期，以及在整个细胞周期中，某些原癌基因有特征性的表达。

中国孤雌生殖卤虫多倍体α-AMY同工酶基因的表达特征

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法 ,对中国孤雌生殖卤虫 10个品系的 2 6个多倍体单个体克隆的α AMY同工酶的基因表达情况进行了研究 .所研究的α AMY为多态酶重复基因表达 ;各多倍体克隆间的多态程度较高 ,说明群体存在较高的遗传变异 .

DNA制剂对中老龄大鼠组织的抗氧化作用

目的 观察DNA制剂对中老龄大鼠心、肝和肾组织过氧化脂质含量和超氧物歧化酶活性的影响 ,探讨其抗氧化作用及机制。方法 选择 2 0只健康SD大鼠 ,随机分为对照组和DNA制剂治疗组 ,每日分别按DNA0 ,3 0mg腹腔注射 ,连续 2 2d。在第 2 3d时 ,宰杀大鼠 ,采集心、肝和肾组织 ,测定其匀浆中过氧化脂质 (LPO)含量和超氧物歧化酶 (SOD)的活性。结果 与对照组比较 ,DNA治疗组大鼠心、肝和肾组织LPO水平有不同程度的下降 (P <0 0 5) ,SOD活性有不同程度的提高 (P <0 0 5)。结论 DNA能直接捕获自由基和间接通过提高氧自由基清除剂活性发挥复合抗氧化作用 ,对延缓心。