血管内皮生长因子与脑膜瘤血管形成及细胞增殖活性的关系

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)在不同级别脑膜瘤中的表达,及其表达强度与肿瘤微血管密度(MVD)和细胞增殖活性的关系.方法选取脑膜瘤石蜡标本40例,分为WHOⅠ～Ⅲ级3组.采用免疫组化法检测VEGF、第八因子相关抗原(FⅧRAg)、Ki-67核抗原.结果VEGF、MVD值、Ki-67表达随脑膜瘤分级升高而增加.在WHO Ⅰ级各组织类型中,VEGF在内皮细胞型脑膜瘤中表达最高,其次为过渡型脑膜瘤及纤维细胞型脑膜瘤,三者差异有统计学意义.相关分析结果显示:VEGF与MVD、Ki-67呈正相关.结论VEGF、MVD值、Ki-67表达强度可能是鉴别良恶性脑膜瘤、判断脑膜瘤生物学行为的良好指标,是难治性、复发性脑膜瘤治疗的新靶点.

用于ADSCs增殖分化的海藻酸钙/骨粉微胶珠的制备与检测

海藻酸钙微胶珠具有良好的生物相容性、可降解、机械强度高、韧性好等优点,已被广泛应用于组织工程研究。骨粉中含有大量的羟基磷灰石及BMP等生长因子,具有良好的骨诱导活性。结合上述两种材料的优点,制备了一种复合海藻酸钙/骨粉微胶珠,并系统研究了人源脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在其中的最佳包埋密度。通过正交实验综合考虑海藻酸钠溶液浓度、氯化钙溶液浓度和骨粉密度对海藻酸钙/骨粉微胶珠机械强度及传质性能的影响,并采用液滴法制备了最优化的用于ADSCs体外增殖分化的微胶珠。结果表明,海藻酸钠溶液的浓度对微胶珠传质能力和机械强度的影响最大,CaCl2溶液浓度其次,骨粉密度的影响最小。当海藻酸钠溶液浓度、CaCl2溶液浓度和骨粉密度分别为2.5%,4.5%和5.0mg/mL时,微胶珠的性能最好。对细胞扩增倍数的比较和死活染色等检测表明,当ADSCs的初始包埋密度为5×106 cells/mL时,更适于ADSCs的扩增与分化。

大脑中动脉动脉瘤开颅和栓塞的个体化选择

随着临床医学的不断进展，开颅夹闭术与介入栓塞术对于治疗大脑中动脉动脉瘤（ middle cerebral artery aneurysms， MCAA）已从早期的相互竞争转化成了如今的相互补充，两者都有其独特的优点。本文的研究目的为通过分析大连医科大学第一附属医院神经外科一段时间内，在不同治疗方法下的MCAA患者的资料来探讨两种手术方式的治疗效果。

携带CD基因骨髓间充质干细胞对C6大鼠胶质瘤体内抑制作用研究

为了研究自杀基因——胞嘧啶脱氨酶基因(cytosine deaminase gene,CD基因)对大鼠脑胶质瘤的体内治疗效果,采用基因转导系统将慢病毒包装的CD基因转染骨髓间充质干细胞(MSC)并使其长时间、高效表达,然后移植到使用颅内立体定向接种法制作的40只SD大鼠胶质瘤模型中.按接种细胞类型将实验SD大鼠分为5组,每组8只:①C6胶质瘤;②C6+MSCs细胞(1∶1);③C6+MSCs细胞(1∶2);④C6+MSC-codA/eGFP细胞(1∶1);⑤C6+MSC-codA/eGFP细胞(1∶2).瘤龄7天后腹腔注射500 mg/(kg.d)5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC),共14天.用磁共振成像(MRI)动态监测肿瘤的体积并进行了大鼠存活期观察、常规病理分析、RT-PCR检测、HE染色.结果显示,第①组瘤龄14天时病灶呈圆形,中心见坏死区,肿瘤平均246 mm3,均存活期15.3天,第②组平均生存期16.0天,第③组平均生存期16.6天,第④⑤组自然存活期均大于30天,14天时病灶平均体积分别为55 mm3、40 mm3,28天时肿瘤抑制率分别为77.24%、83.28%.MRI扫描可清楚显示肿瘤的大小、形态和内部结构,与病理结果高度相关;MRI动态观察可证实携带CD基因的骨髓间充质干细胞及5-FC治疗系统治疗C6颅内胶质瘤有效;RT-PCR检测结果证实肿瘤组织内有胞嘧啶脱氨酶表达.

脂质体介导胞嘧啶脱氨酶基因转染鼠骨髓间充质干细胞

背景：自杀基因独有的旁观者效应,可显著提供肿瘤细胞杀伤效果,同时还与放射治疗、免疫基因治疗联合应用,并克服了基因转导效率低的缺陷。胞嘧啶脱氨酶（cytosinedeaminase,CD）即可产生强大的旁观者效应。目的：观察脂质体介导真核表达载体CD基因转染鼠骨髓间充质干细胞的效果及其基因表达。设计、时间及地点：细胞学基因水平实验,于2007-05/12在大连理工大学干细胞与组织工程研发中心完成。材料：SPF级C57BL纯系小鼠6只,由大连医科大学实验动物中心提供。连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α由大连理工大学干细胞与组织工程研发中心提供。LipofectamineTM2000脂质体为Invitrogen产品。方法：取连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒DNA,对质粒pIRES2-AcGFP1-CD进行XhoI和BamHI双酶切,用于转染。取小鼠双侧下肢股骨和胫骨,贴壁法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第3代制成单细胞悬液,加入荧光标记的CD44,CD45,CD90,CD105抗体后,采用Lipofectamine2000介导法转染第3代骨髓间充质干细胞。主要观察指标：重组质粒的鉴定,流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面标记表达,细胞转染后CD基因的表达。结果：质粒pIRES2-AcGFP1-CD酶切产物经琼脂糖凝胶电泳后,于1.0-1.5kb处有一条带出现,符合CD基因长度。细胞表面标记CD45呈阴性,CD44,CD90,CD105呈阳性。pIRES2-AcGFP1-CD基因转染36h后,荧光倒置相差显微镜下可见小鼠骨髓间充质干细胞有绿色荧光蛋白的表达,48h后细胞仍有荧光表达,且强度明显增强。结论：脂质体介导的CD基因在鼠骨髓间充质干细胞中成功表达,于转染48h后达峰值。

pIRES2-AcGFP1-CD真核表达载体构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

背景：骨髓间充质干细胞在体外易分离和扩增，还易于外源基因的转入及表达，在人类医学上被认为是一种理想的治疗性细胞和基因治疗中的靶细胞。目的：探讨脂质体介导胞嘧啶脱氨酶基因转染兔骨髓间充质干细胞及其基因的表达。设计：单一样本观察。单位：大连市干细胞与组织工程研发中心，大连医科大学基础医学院生化室。材料：实验于2006—03／2007—06在大连市干细胞与组织工程研发中心及大连医科大学基础医学院生化室完成。新西兰大白耳兔，5月龄，雌雄不拘，体质量2．0～2．5kg。方法：以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板，用PCR方法获得目的基因片段，定向克隆至载体pMD19-T，限制性内切酶消化鉴定、基因测序后，构建pIRES2-AcGFP1-CD真核表达质粒。同时对兔骨髓间充质干细胞取材、培养、鉴定。真核表达质粒经酶切鉴定后，采用Lipofectamine2000介导法转染经过鉴定的兔骨髓间充质干细胞。并于转染后24h在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。主要观察指标：表达载体的构建及基因转染骨髓间充质干细胞鉴定。结果：实验克隆出胞嘧啶脱氨酶基因，并将其与带荧光的真核表达载体pIRES2-AcGFP1连接。经转染兔骨髓间充质干细胞24h后，在倒置荧光显微镜488am蓝光激发下观察，pIRES2-AcGFP1-CD组和pIRES2-AcGFP1空载体组均可见细胞发出绿色荧光，未经转染的细胞未见发出绿色荧光，说明胞嘧啶脱氨酶基因成功转染了骨髓间充质干细胞。结论：骨髓间充质干细胞有望成为胞嘧啶脱氨酶基因治疗中的理想载体。

自制的双极电凝吸切器在脑瘤切除术中的应用

应用自行研制的集吸引、绞切、双极电凝三项功能于一体的双极电凝吸切器进行脑肿瘤切除术，取得预期效果和初步经验，报告如下。

pIRES2-AcGFP1-CD真核表达载体在骨髓间充质干细胞中的表达

背景:骨髓间充质干细胞在体外易分离和扩增,还易于外源基因的转入及表达,是一种理想的治疗性细胞和基因治疗的靶细胞。目的:观察脂质体介导胞嘧啶脱氨酶基因转染兔骨髓间充质干细胞及其表达。设计、时间及地点:单一样本观察的细胞基因工程实验,于2006-03/2007-04在大连理工大学干细胞与组织工程研发中心完成。材料:5月龄新西兰大白耳兔用于骨髓间充质干细胞的分离培养。方法:采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞。以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板,用PCR方法获得目的基因片段,定向克隆至载体pMD19-T,限制性内切酶消化鉴定、基因测序后,构建pIRES2-AcGFP1-CD真核表达质粒。酶切鉴定后,采用Lipofectamine2000介导胞嘧啶脱氨酶基因转染骨髓间充质干细胞。主要观察指标:倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。结果:成功克隆了胞嘧啶脱氨酶基因,基因测序结果同Genbank中公布的序列一致。将胞嘧啶脱氨酶基因亚克隆到pIRES2-AcGFP1质粒上,构建了pIRES2-AcGFP1-CD真核表达载体。利用脂质体介导法将胞嘧啶脱氨酶基因转染骨髓间充质干细胞,24h后在倒置荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:pIRES2-AcGFP1-CD真核表达载体已成功转入骨髓间充质干细胞中,说明骨髓间充质干细胞有望成为胞嘧啶脱氨酶基因治疗中的理想载体。